枸杞黃酮提取工藝研究

枸杞黃酮提取工藝研究

類黃酮是植物中的重要次生代謝產(chǎn)物之一，在植物中得到廣泛分布。黃酮化合物具有抗癌、利肝保膽、清除自由基等多種生理功能和藥理作用,被廣泛應(yīng)用于功能性食品和天然保健性食品添加劑中。筆者研究了枸杞(LyciumchinenseMill.)葉、果柄中黃酮化合物的提取工藝,旨在為更好地開發(fā)利用枸杞葉、果柄中黃酮類物質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1材料供試材料為枸杞(LyciumchinenseMill.)葉及果柄,采摘于寧夏蘆花臺(tái)枸杞基地。1.1.2主要設(shè)備旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、循環(huán)水真空泵、電熱鼓風(fēng)干燥箱、電子分析天平、數(shù)控恒溫水浴鍋、回流裝置、UV-2501PC紫外可見分光光度計(jì)。1.1.3各樹脂的平均合成事結(jié)構(gòu)乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、HP20大孔樹脂、AB-8大孔樹脂、D-101大孔樹脂、蘆丁標(biāo)品。1.2方法1.2.1縮萃取液濃縮提取工藝路線:原料粉碎→醇溶劑回流提取→合并提取液濃縮至膏狀→石油醚萃取(除葉綠素)→正丁醇萃取黃酮部分→濃縮萃取液→水液上大孔樹脂柱→乙醇洗脫→濃縮至干。準(zhǔn)確稱取粉碎的枸杞葉(果柄)50g,加入濃度70%乙醇回流提取2h,趁熱過濾,濾渣用再回流提取2次,每次1h,趁熱過濾,合并濾液,濃縮至無醇味,濃縮液加純凈水沉淀24h,取上清液抽濾,水液上D-101大孔樹脂柱,用濃度為30%和60%的乙醇洗脫,合并洗脫液60℃濃縮至干。1.2.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)用純水和濃度70%乙醇提取枸杞樣品,選擇最佳的提取溶劑。按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)路線,研究乙醇濃度、乙醇用量、提取時(shí)間、原料粒度4個(gè)因素對(duì)提取效果的影響,L9(34)試驗(yàn)因素水平見表1,以總黃酮含量和得率為考察指標(biāo),采用正交試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。1.2.3測(cè)定了枸杞葉和葉柄原料的粗黃酮含量分別對(duì)不同時(shí)間所采不同部位枸杞樣品進(jìn)行黃酮含量測(cè)定,分析不同樣品中黃酮含量差異。1.2.4黃酮的總含量1.2.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取濃度為0.435mg/ml的蘆丁標(biāo)液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml至25ml試管中,加入濃度30%乙醇溶液至5ml,加入10%的亞硝酸鈉溶液0.3ml搖勻,放置6min,然后加入濃度5%的硝酸鋁溶液0.3ml搖勻,放置6min,最后加入濃度4%的氫氧化鈉溶液4ml搖勻,放置15min。分別測(cè)定不同濃度樣液在510nm下的吸光值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。以該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中與蘆丁等當(dāng)量的總黃酮含量。1.2.4.總黃酮含量測(cè)定精確稱取樣品30mg用濃度70%乙醇定容至25ml,精密吸取樣品液0.5ml置10ml比色杯中按“1.2.4.1”項(xiàng)下方法顯色,測(cè)定A值,計(jì)算出樣品總黃酮含量和得率?？傸S酮含量=C×10×25/V/m/1000×100%(1)式中,C——樣品液濃度(μg/ml);V——吸取樣品液體積(ml);m——原料質(zhì)量(g)。得率=總黃酮提取物質(zhì)量/原料質(zhì)量×100%(2)2結(jié)果與分析2.1枸杞黃酮提取及研究2.1.1提取溶劑的確定由表2可知,純水提取枸杞葉、果柄黃酮得率高于醇溶劑提取,但黃酮含量較低,從產(chǎn)品量看,醇溶劑提取高于純水提取,綜合考慮確定乙醇作為枸杞黃酮的提取溶劑。2.1.2間、原料粒度由表3可知,影響因素最大的為乙醇濃度,其次是乙醇用量和提取時(shí)間、原料粒度,最優(yōu)組合為A1B2C2D2,即乙醇濃度70%,料液比1∶8(M∶V,g/ml),提取時(shí)間3h,提取3～8mm碎粒。在該工藝條件下獲得黃酮含量為79.4%,得率為3.72%。2.1.3提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)取100g枸杞葉碎粒,共3份,按照優(yōu)選的提取工藝參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),測(cè)定結(jié)果見表4。3次試驗(yàn)結(jié)果都處于較高水平,說明該提取工藝穩(wěn)定可行。2.2黃酮與枸杞果柄由表5可知,枸杞不同的藥用部位黃酮含量不同,枸杞葉中黃酮含量明顯高于枸杞果柄;同一品種枸杞不同時(shí)間采摘的枸杞葉黃酮含量不同,5月份采摘的枸杞葉黃酮含量高于10月份采摘的枸杞葉,不同品種間枸杞葉黃酮含量差異不大。3工藝條件下提取的枸杞黃酮/總黃酮含量(1)醇溶劑法提取枸杞黃酮的適宜工藝條件為:乙醇濃度70%,料液比1∶8(M∶V,g/ml),提取時(shí)間3h,提取3～8m