水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定

水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定1.定義葉綠素是植物光合作用中的重要光合色素。通過(guò)測(cè)定浮游植物葉綠素，可掌握水體的初級(jí)生產(chǎn)情況，在環(huán)境監(jiān)測(cè)中，可將葉綠素a含量作為湖泊富營(yíng)養(yǎng)化的指標(biāo)之一。2.水樣的采集與保存可根據(jù)工作的需要進(jìn)行分層采樣或混合采樣。湖泊、水庫(kù)采樣 500mL,池塘300mL,采樣量視婦幼植物分布而定。若浮游植物數(shù)量較少，也可采樣1000mL。采樣點(diǎn)及采樣時(shí)間同“浮游植物”。水樣采集后應(yīng)放在陰涼出,避免日光直射。最好立即進(jìn)行測(cè)定的預(yù)處理,如需經(jīng)過(guò)一段時(shí)間（4~48h）方可進(jìn)行預(yù)處理，則應(yīng)將水樣保存在低溫（0~4C）避光處。在每升水樣中加入1%碳酸鎂懸濁液1mL，以防治酸化引起色素溶解。水樣在冰凍情況下（-20C）最長(zhǎng)可保存30d。3.儀器和設(shè)備分光光度計(jì)。真空泵。離心機(jī)。3.4乙酸纖維濾膜（孔徑0.45m）。抽濾器。組織研磨器或其他細(xì)胞破碎器。碳酸鎂粉末。90%丙酮。4.試驗(yàn)程序4.1以離心或過(guò)濾濃縮水樣，在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜。倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽慮，抽慮時(shí)負(fù)壓不能過(guò)大（約為50kPa）。水樣抽完后，繼續(xù)抽1~2min,以減少濾膜上的水分。如需短期保存 1~2d時(shí)，可放入普通冰箱冷凍，如需長(zhǎng)期保存（30d），則應(yīng)放入低溫冰箱（-20T）保存。4.2取出帶有浮游植物的濾膜，在冰箱內(nèi)低溫干燥6~8h后放入組織研磨器中，

加入受涼碳酸鎂粉末及2~3mL90%丙酮，充分研磨，提取葉綠素a。用離心機(jī)（3000~4000r/min）離心10min。將上清液倒入5mL或10mL容量瓶中。4.3在用2~3mL的90%的丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心10min,并將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中。重復(fù)1~2次，用90%的丙酮定容為5mL或10mL，搖勻。4.4將上清液在分光光度計(jì)上用1cm光程的比色皿，分別讀取750nm、663nm、645nm、630nm波長(zhǎng)的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度測(cè)定，對(duì)樣品吸光度進(jìn)行校正。葉綠索3的含量按如下公武計(jì)算;葉綠索3的含量按如下公武計(jì)算;（1l.64x（D師-D妙）-2J6只（D期*_衛(wèi)丁牝）+也1°*軸_門右“??叭式中］V—水樣體積CL）；D一光度；們——提取液宦容JG的體積＜tn3＞；5——匕色皿尤程Gmh6.參考文獻(xiàn)水