不同配方稀土釋液對公豬的人工授精效果

不同配方稀土釋液對公豬的人工授精效果

隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展和同時開展育種工作的需要，保證了生豬育種的快速普及。同時，不同規(guī)模的豬繁殖站已成為中國養(yǎng)豬業(yè)的重要組成部分。人工授精站為了能夠充分利用優(yōu)秀種公豬，發(fā)揮其種豬優(yōu)勢，達(dá)到真正意義上的資源共享，因此精液保存時間、精液保存效果是人工授精的應(yīng)用成敗的關(guān)鍵因素，開發(fā)出保存時間長、保存效果良好、成本顯著低于現(xiàn)有商品化的精液稀釋液的稀釋液，對人工授精技術(shù)而言有重要的經(jīng)濟(jì)效益。1最佳稀釋粉配方的確定通過第一輪稀釋粉配方的收集、調(diào)整，我們從20種配方實驗中篩選出四種配方，分別是BTS、配方hotboar++(BTS改進(jìn)配方）、配方4號、配方5號，我們重新對此四種稀釋粉配方與法國卡蘇BTS+2稀釋粉做對照跟蹤實驗，其原理是利用浩邦優(yōu)秀種公豬新鮮精液采用國內(nèi)AI標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行精液的稀釋保存,通過實驗對不同配方稀釋液保存效果進(jìn)行一一比較，選擇最佳稀釋粉效果配方。1.1公豬的飼養(yǎng)管理種公豬精液來自北京浩邦豬人工授精服務(wù)中心公豬站的20頭公豬，其中，6個長白，11個大白，3個杜洛克。公豬按常規(guī)飼養(yǎng)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理，生長發(fā)育正常。本實驗除1頭丹系長白（耳號179101）重復(fù)一次外，其它公豬均采鮮精一次。1.2試劑和主要設(shè)備1.2.1稀釋粉的配制實驗的五種配方均按配方準(zhǔn)備所有化學(xué)藥品和生化制劑。嚴(yán)格控制實驗配方中實驗藥品質(zhì)量、生產(chǎn)日期、廠家、藥品級別，稀釋粉的配制通過精密天平稱量每一種化學(xué)試劑需求量，配好后的稀釋粉充分溶解穩(wěn)定、過濾、消毒后進(jìn)行pH值、滲透壓等的測定，并進(jìn)一步加熱，使用前加入抗生素（慶大霉素350mg）以備用。嚴(yán)格按照公豬新鮮精液稀釋保存的GTC實驗要求進(jìn)行精液的稀釋保存。1.2.2主要設(shè)備常規(guī)儀器、桑翌科技公司提供的PH6測定儀、法國卡蘇公司提供的精密精子密度測定儀。1.3不同稀釋液稀釋按正常采精方法，采集1個公豬精液，通過GTC實驗室檢測精液不論從顏色、氣味、精子活力、精子畸形率等均達(dá)到鮮精合格標(biāo)準(zhǔn)，立即抽取6個樣，抽取辦法是根據(jù)每頭份精液中含有30億有效精子，80ml/頭份，計算抽取合格原精液劑量，嚴(yán)格控制不同實驗稀釋液溫度，使其稀釋液的溫度和精液的溫度完全吻合，然后緩慢將不同的稀釋液加入到所抽樣品中，加至80ml，整個稀釋過程要在15min內(nèi)完成，精液稀釋完成后并標(biāo)記，密封，待1～2h精液溫度緩慢降止20℃～23℃時，用毛巾裹上一同放入恒溫箱內(nèi)，每12h輕輕搖勻精液并檢測精子活力、精子畸形率等指標(biāo)，直至精子活力下降到0.6以下時停止檢測，記錄保存時間，精子活力、精子畸形率。以上步驟重復(fù)20次。1.4精子活力和畸形率測定精液的顏色、氣味：通過觀察及人的嗅覺來主觀判斷。精子活力：按照精液中做直線前進(jìn)運動的精子占總精子的百分率。檢測精子活力，檢測精液時精液必須預(yù)熱到37℃，在100倍顯微鏡下觀察，鮮精活力要求不低于70%，保存后精子活力不得低于60%。精子畸形率：精子畸形評定是通過肉眼600倍鏡下觀察200個精子中畸形精子所占比例。pH值測定：通過桑翌科技公司提供的pH6測定儀測定。精子密度：精子密度是通過法國卡蘇公司提供的精密精子密度測定儀測定。1.5實驗中的稀釋劑省略和成本2不同稀釋液的酒精保存時間、保留時間和畸形率的比較利用MICROSOFTEXCELR軟件的TTEST對不同稀釋液處理的精液的保存時間、保存時間臨界點精子活力、精子畸形率進(jìn)行成對比較,本文對不同稀釋液的精液保存時間、保存過程中精子活力、精子畸形率進(jìn)行分析。2.1結(jié)果與分析2.1.1稀釋液及t檢驗所有實驗稀釋液對精液的總體平均保存時間4.00d，不同配方稀釋液對鮮精保存時間及比較結(jié)果見表2，本實驗中，應(yīng)用BTS、hotboar++、4號、5號、卡蘇稀釋粉BTS+2稀釋液配方的精液平均保存時間分別為：3.45±1.075d,4.9±1.382d、4.0±1.044d,3.2±0.987d,4.775±1.509d，其中hotboar++保存時間最長平均為4.9d，其次卡蘇BTS+2。成對T檢驗結(jié)果表明，hotboar++配方組稀釋液與法國卡蘇BTS+2配方組稀釋液對種公豬精液的保存時間差異不顯著，但hotboar++配方組稀釋液與法國卡蘇BTS+2配方組稀釋液對精液的保存時間極顯著高于BTS配方組稀釋液，5號配方組稀釋液；hotboar++配方組稀釋液與4號配方組稀釋液相比較差異不顯著，法國卡蘇BTS+2配方組稀釋液顯著高于4號配方組稀釋液。4號配方組稀釋液與BTS配方組稀釋液差異不顯著，但顯著高于5號配方組稀釋液；BTS配方組稀釋液與5號配方組稀釋液之間差異不顯著。2.1.2稀釋液的保護(hù)品度表3列出不同稀釋液保存精液的相關(guān)性。不同稀釋液對精液保存時間的相關(guān)性可反映稀釋液與精液之間的互作效應(yīng)。相關(guān)性高，表示稀釋液與精液之間的互作效應(yīng)小，該稀釋液的通用性就強(qiáng)；相反，該稀釋液的通用性就差，意味著不同鮮精的最佳稀釋液不同，因此，有待于研究出多種能夠適應(yīng)不同品種甚至不同個體的精液保存稀釋液，這樣，變大大增加了人工授精生產(chǎn)管理的復(fù)雜程度。本實驗中，BTS配方組稀釋液的精液保存時間與hotboar++配方組稀釋液、5號配方組稀釋液、4號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為-1.450、0.25、-0.55、-1.325;hotboar++配方組稀釋液與5號配方組稀釋液、4號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為1.700、0.99、1.25;5號配方組稀釋液與4號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為-0.800、-1.75;4號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)為-0.775。如果用一種稀釋液與其它5種配方稀釋液相關(guān)系數(shù)的平均值來表示本實驗中5種配方稀釋液的通用性，其相關(guān)系數(shù)平均值越高說明配方稀釋液的通用性越高，BTS配方組稀釋液、hotboar++配方組稀釋液、5號配方組稀釋液、4號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液的相對通用性分別為-0.615、0.835、-1.1875、-0.065、0.710,hotboar++配方組稀釋液通用性最好。2.2不同配方組稀釋液對精子活力的影響不同稀釋液對保存精液中精子活力的影響結(jié)果比較見表4，本實驗中，應(yīng)用BTS配方組稀釋液、hotboar++配方組稀釋液、4號配方組稀釋液、5號配方組稀釋液、卡蘇稀釋粉BTS+2配方組稀釋液在保存精液期間精液中精子活力的平均水平分別為：68±4.70、72±5.50、67.75±3.80、69.75±4.22、72.25±5.73，其中卡蘇稀釋粉BTS+2維護(hù)精子活力能力較強(qiáng)、其次hotboar++配方組稀釋液。成對T檢驗結(jié)果表明，hotboar++配方組稀釋液與卡蘇BTS+2配方組稀釋液對保存精液中精子活力的影響相比較差異不顯著，但hotboar++配方組稀釋液與卡蘇BTS+2配方組稀釋液對保存精液中精子活力的影響顯著高于BTS配方組稀釋液、5號配方組稀釋液，但與4號配方組稀釋液相比較差異不顯著；稀釋粉BTS配方組稀釋液、5號配方組稀釋液及4號配方組稀釋液對保存精液中精子活力的影響相比較差異不顯著。2.3稀釋液及卡蘇bts+2配方對保存精子畸形率的影響不同稀釋液對保存精液中精子畸形率的影響結(jié)果比較見表5，本實驗中，應(yīng)用BTS配方組稀釋液、hotboar++配方組稀釋液、4號配方組稀釋液、5號配方組稀釋液及卡蘇BTS+2配方組稀釋液對保存精液中精子畸形率的平均水平分別為：10.75±5.68、7.25±6.58、11.00±5.98、10.25±5.50、8.75±5.82，其中hotboar++配方組稀釋液對保存精液中精子畸形影響最小、其次卡蘇BTS+2配方組稀釋液。成對T檢驗結(jié)果表明，BTS配方組稀釋液、hotboar++配方組稀釋液、4號配方組稀釋液、5號配方組稀釋液與卡蘇BTS+2配方組稀釋液對保存精液中精子畸形率的影響相比較差異不顯著。3配方稀釋粉對精子畸形率的影響人工授精成本中稀釋粉成本占整個成本的很大比例，因此，研究開發(fā)出經(jīng)濟(jì)高效的稀釋液對降低人工授精成本具有重要的意義。本研究對當(dāng)前國際上應(yīng)用較多的稀釋液、及相對改進(jìn)的稀釋液配方進(jìn)行成對的比較，其中卡蘇BTS+2的稀釋液是使用卡蘇BTS+2稀釋粉配置而成的，其它四種稀釋液是按照原來配方及改進(jìn)的配方自行購買原料，嚴(yán)格按照配方每種試劑級別要求，精確稱取每種試劑配置成稀釋粉，然后根據(jù)需要配置成相應(yīng)的稀釋液，其成本顯著比卡蘇BTS+2稀釋粉的低。研究結(jié)果表明，hotboar++配方稀釋粉對精液的平均保存時間最長，平均保存時間為（4.90±1.382），與現(xiàn)市場上購買的中長效卡蘇BTS+2的稀釋粉在保存時間上差異不顯著，但顯著好與其他實驗的配方稀釋粉，hotboar++配方稀釋粉通用性最高，其次