《基因克隆的載體》課件

基因克隆的載體克隆技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要手段之一?；蚩寺〖夹g(shù)作為克隆技術(shù)的重要組成部分，因其應(yīng)用領(lǐng)域的廣泛性及重要性而備受關(guān)注。本課程將為您詳細(xì)介紹基因克隆的載體知識(shí)。載體的定義和特點(diǎn)定義基因克隆載體是指具有自主復(fù)制能力的DNA分子，具有攜帶外源DNA片段進(jìn)入細(xì)胞和定向操縱目的基因表達(dá)等功能。特點(diǎn)常見的基因克隆載體質(zhì)粒具有如下特點(diǎn)：1.大小適中；2.構(gòu)建簡單方便；3.易于操作且可大量擴(kuò)增；4.可以自主復(fù)制；5.便于基因操縱和定向表達(dá)等。類型常見的載體類型包括質(zhì)粒、噬菌體、Cosmid和BAC等。常見的基因克隆載體質(zhì)粒最常見的基因克隆載體，易于操作且可大量擴(kuò)增。噬菌體適用于大批量表達(dá)分泌蛋白的研究，轉(zhuǎn)化后可產(chǎn)生高水平的基因表達(dá)。Cosmid可容納大型外源DNA片段，適用于聚合酶連鎖反應(yīng)、基因組文庫構(gòu)建和定位大片段DNA序列等研究。BAC適合于構(gòu)建大型基因組文庫和物種基因組序列的物理/遺傳圖譜?；蚩寺〉牟襟E1下載或制備載體獲取可自主復(fù)制的載體，或通過人工合成的方法制備載體。2載體的線性化將載體在目標(biāo)區(qū)域產(chǎn)生線性剪切，為目標(biāo)基因的插入創(chuàng)造條件。3獲得目標(biāo)基因從源生物體中提取目標(biāo)基因，通過PCR擴(kuò)增、限制酶切剪切等方法，獲得目標(biāo)基因。克隆載體的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化方法的介紹包括熱激轉(zhuǎn)化、電轉(zhuǎn)化等傳統(tǒng)方法以及冷凍驚叫轉(zhuǎn)化、基因槍轉(zhuǎn)化等新興方法。轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞將制備好的目標(biāo)載體轉(zhuǎn)入特定的受體細(xì)胞中，并培養(yǎng)、篩選、鑒定等，最終獲得基因工程菌株?；蚩寺〉尿?yàn)證1檢測重組載體常用方法包括PCR，南方雜交等。通過檢測目的基因的插入，判斷載體是否重組成功。2驗(yàn)證目的基因的插入常用方法包括Sequencing和Southernblotting等，驗(yàn)證目的基因是否插入到載體中?？偨Y(jié)和展望總結(jié)基因克隆載體是基因克隆技術(shù)的重要組成部分，應(yīng)用領(lǐng)域廣泛。核心在于選取合適的載體、構(gòu)建載體、將基因植入載體并最終將載體轉(zhuǎn)化到受體細(xì)胞中。展望隨著人們對(duì)克隆技術(shù)的不斷深入