急性出血性結(jié)膜炎應(yīng)急處置程序參考方案

急性出血性結(jié)膜炎應(yīng)急處置技術(shù)方案（試行）1總則1.1背景急性出血性結(jié)膜炎(acutehemorrhagicconjunctivitis，AHC)也稱為流行性出血性結(jié)膜炎，是重要由腸道病毒引發(fā)的，以結(jié)膜高度充血，常見(jiàn)結(jié)膜下出血及角膜上皮點(diǎn)狀剝脫為重要臨床特性的傳染病。普通可在2～3周痊愈，屬于自限性疾病，預(yù)后良好。該病全年均可發(fā)病，多見(jiàn)于夏秋季，各年紀(jì)組人群均可發(fā)病。重要通過(guò)接觸傳輸，傳染性極強(qiáng)，傳輸速度快，人群普遍易感，易造成流行或暴發(fā)。1.2編制目的為確保我一旦發(fā)生急性出血性結(jié)膜炎暴發(fā)疫情，能快速查清因素，并及時(shí)采用有效方法控制和撲滅疫情。2分級(jí)原則根據(jù)急性出血性結(jié)膜炎疾病的特性，以及我歷年急性出血性結(jié)膜炎的流行狀況，擬定1周內(nèi)一種自然村寨、社區(qū)、建筑工地、學(xué)校等集體單位發(fā)生20例以上流行性出血熱病例的視為暴發(fā)疫情。按照急性出血性結(jié)膜炎疫情發(fā)生和流行的性質(zhì)、危害程度和涉及范疇，將疫情劃分為特別重大（Ⅰ級(jí)）、重大（Ⅱ級(jí)）、較大（Ⅲ級(jí)）和普通（Ⅳ級(jí)）疫情，依次用紅色、橙色、藍(lán)色和黃色進(jìn)行預(yù)警，分別實(shí)施Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)應(yīng)急響應(yīng)。2.2.1Ⅰ級(jí)疫情：1周內(nèi)在我半數(shù)以上縣（、區(qū)）出現(xiàn)20起以上、持續(xù)發(fā)生的暴發(fā)疫情，且疫情涉及鄰近地，并有大范疇蔓延趨勢(shì)。2.2.2Ⅱ級(jí)疫情：1周內(nèi)在2個(gè)以上縣（、區(qū)）出現(xiàn)10起以上暴發(fā)疫情，且有擴(kuò)大蔓延趨勢(shì)。2.2.3Ⅲ級(jí)疫情：1周內(nèi)在2個(gè)毗鄰的縣(、區(qū))出現(xiàn)5起以上暴發(fā)疫情，且有蔓延趨勢(shì)。2.2.4Ⅳ級(jí)疫情：1周內(nèi)在1個(gè)縣(、區(qū))范疇內(nèi)出現(xiàn)2起以上暴發(fā)疫情。3應(yīng)急響應(yīng)（1）Ⅳ級(jí)疫情發(fā)生時(shí)，縣（、區(qū)）疾病防止控制中心應(yīng)立刻組織專業(yè)人員進(jìn)行調(diào)查確認(rèn)，報(bào)告并請(qǐng)求縣（、區(qū)）衛(wèi)生行政部門(mén)組織專家組對(duì)疫情進(jìn)行綜合評(píng)定?？h（、區(qū)）疾病防止控制中心負(fù)責(zé)暴發(fā)疫情的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、解決與報(bào)告。必要時(shí)，請(qǐng)級(jí)疾病防止控制中心提供技術(shù)支持。（2）Ⅲ級(jí)及Ⅱ級(jí)疫情發(fā)生時(shí)，級(jí)疾病防止控制中心應(yīng)立刻組織專業(yè)隊(duì)伍，會(huì)同疫情發(fā)生地縣（、區(qū)）疾病防止控制中心，開(kāi)展疫情的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、解決與報(bào)告。報(bào)告并請(qǐng)求級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)組織專家組對(duì)疫情進(jìn)行綜合評(píng)定。必要時(shí)，請(qǐng)省級(jí)疾病防止控制中心提供技術(shù)支持。（3）Ⅰ級(jí)疫情發(fā)生時(shí)，由級(jí)疾病防止控制中心組織專業(yè)人員，會(huì)同疫情發(fā)生地的縣（、區(qū)）疾病防止控制中心，開(kāi)展疫情的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、解決與報(bào)告。請(qǐng)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)組織專家組對(duì)疫情進(jìn)行綜合評(píng)定。必要時(shí)，由省級(jí)疾控中心統(tǒng)一組織協(xié)調(diào)疫情調(diào)查、解決。4現(xiàn)場(chǎng)處置4.1流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查是暴發(fā)疫情應(yīng)急處置的核心環(huán)節(jié)和中心環(huán)節(jié)，必須做到認(rèn)真、細(xì)致，必要時(shí)應(yīng)開(kāi)展重復(fù)、多次調(diào)查，力求查明因素和危險(xiǎn)因素，為有效控制疫情提供對(duì)的的方向和根據(jù)。4.1.1普通狀況調(diào)查（1）理解疫情暴發(fā)單位所在該地區(qū)的位置、周邊環(huán)境。（2）理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)人員數(shù)、各類人員分布狀況。（3）理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)的接觸狀況、飲用水供應(yīng)狀況及水源狀況、飲食供應(yīng)、食堂衛(wèi)生、炊事人員健康狀況、廁所及糞便解決狀況。（4）理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)周邊環(huán)境衛(wèi)生狀況、單位人員的衛(wèi)生習(xí)慣，如喝生水、共用物品等。（5）理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)近1周內(nèi)有無(wú)大型聚會(huì)活動(dòng)等。4.1.2發(fā)病狀況調(diào)查（1）理解該單位已經(jīng)掌握病人的臨床癥狀、體征、就診狀況和醫(yī)院檢查診療狀況，核算與報(bào)告疾病的診療與否符合。（2）理解該單位已經(jīng)掌握病人的發(fā)病時(shí)間、班級(jí)（小組或居民區(qū)）分布、人群分布狀況。（3）理解該單位周邊的單位或周邊的群眾在近來(lái)與否有同樣病人發(fā)生、發(fā)生的時(shí)間、發(fā)病的人數(shù)、有無(wú)共同接觸等狀況。（4）到該單位或地區(qū)所在的醫(yī)療單位的門(mén)診、檢查科理解該病的就診檢查狀況，以發(fā)現(xiàn)病人和進(jìn)一步核算診療。（5）對(duì)該單位或村莊每個(gè)班組逐個(gè)進(jìn)行病人的搜索，全方面理解該單位或村莊的發(fā)病狀況。（6）個(gè)案調(diào)查：在普通狀況和發(fā)病狀況調(diào)查后，疾病防止控制機(jī)構(gòu)流行病學(xué)調(diào)查人員要在最短時(shí)間內(nèi)對(duì)報(bào)告和發(fā)現(xiàn)的病例進(jìn)行流行病學(xué)個(gè)案調(diào)查。個(gè)別需要增加的內(nèi)容能夠根據(jù)調(diào)查和理解的狀況增加。個(gè)案調(diào)查時(shí)，要認(rèn)真、具體地理解和統(tǒng)計(jì)患者發(fā)病前、發(fā)病后的親密接觸人員的有關(guān)狀況。4.1.3病因調(diào)查針對(duì)疫情的具體狀況，緊緊抓住疫情中的核心病人和線索病人，擬定診療原則和病例定義，開(kāi)展病例搜索，盡量掌握疫情的全貌，通過(guò)描述性流行病學(xué)辦法，結(jié)合環(huán)境和衛(wèi)生學(xué)調(diào)查，以及疫情發(fā)生地的人群活動(dòng)狀況，綜合分析，提出疫情的病因假設(shè)。4.1.4傳染來(lái)源和傳輸鏈調(diào)查（1）從全部病人個(gè)案調(diào)查表中查出該疫情發(fā)生的首例病人。（2）根據(jù)該病人和其它病人之間的發(fā)病時(shí)間，分析該病人是本次暴發(fā)或流行的傳染源還是同代病人。（3）若首例病人是本起暴發(fā)疫情的傳染源，追溯該病最長(zhǎng)潛伏期內(nèi)有無(wú)急性出血性結(jié)膜炎病人接觸史等。(4)調(diào)查暴發(fā)單位發(fā)病信息，明確暴發(fā)單位與外界病例的聯(lián)系和暴露狀況。4.2控制方法控制方法在通過(guò)初步調(diào)查擬定后，為及時(shí)、有效地控制疫情，應(yīng)當(dāng)立刻采用初步方法，隨著調(diào)查的病因進(jìn)一步清晰，隨時(shí)補(bǔ)充或修正方法?？刂品椒ㄖ匾婕埃?.2.1病人的隔離治療全部符合診療原則和病例定義的病人必須接受正規(guī)的隔離治療。隔離期為發(fā)病后5天。4.2.2切斷傳輸途徑在未明確傳輸因素以前，開(kāi)始時(shí)能夠采用比較廣泛的控制方法，從有可能引發(fā)傳輸?shù)亩鄠€(gè)因素著手；隨著調(diào)查的進(jìn)一步，根據(jù)調(diào)查的成果，能夠作適宜的調(diào)節(jié)，采用更具針對(duì)性的控制方法，重點(diǎn)針對(duì)一種或數(shù)個(gè)重要的危險(xiǎn)因素開(kāi)展防控方法，同時(shí)需注意不能從一種傳輸介質(zhì)污染到另外一種傳輸介質(zhì)，以發(fā)生免疫情新的進(jìn)一步擴(kuò)散。切斷傳輸途徑的重要方法為加強(qiáng)宣傳教育、避免揉眼睛、加強(qiáng)洗手、避免與患者的親密生活接觸、避免通過(guò)文具和毛巾等物品間接接觸傳輸。要做好病人家庭、學(xué)校、幼兒園、病人工作單位食具、家具、被褥、玩具、課桌椅、辦公桌、辦公用品等的消毒。4.2.3保護(hù)易動(dòng)人群（1）開(kāi)展健康教育和健康增進(jìn)工作，做到勤洗手。（2）對(duì)親密接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察：凡與急性出血性結(jié)膜炎病例有明確或者可能接觸者，一旦發(fā)現(xiàn)接觸者中有出現(xiàn)類似癥狀，立刻按照病人解決。4.3現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急監(jiān)測(cè)和效果評(píng)定（1）疫情監(jiān)測(cè)：對(duì)疫情發(fā)生地的醫(yī)療單位發(fā)現(xiàn)病人及時(shí)報(bào)告，對(duì)疫情發(fā)生單位和村莊、居民區(qū)每天上門(mén)開(kāi)展病人主動(dòng)搜索；親密接觸者的癥狀監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)病人及時(shí)隔離治療；疫情發(fā)生地周邊地區(qū)的疫情監(jiān)測(cè)等。（2）開(kāi)展在健康教育前和后人群的急性出血性結(jié)膜炎防治知識(shí)和行為變化狀況的評(píng)定。（3）控制效果評(píng)定：在最后1例病人發(fā)病后經(jīng)1個(gè)最長(zhǎng)潛伏期未出現(xiàn)新發(fā)病例，闡明各項(xiàng)方法是貫徹的，控制效果是好的。5附件附件1：急性出血性結(jié)膜炎個(gè)案調(diào)查表附件2：急性出血性結(jié)膜炎防止控制技術(shù)指南（試行）附件3：急性出血性結(jié)膜炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)附表1急性出血性結(jié)膜炎病例個(gè)案調(diào)查表病例編碼□□□□□□□□□□□1普通狀況1.1姓名：1.2身份證號(hào)碼:□□□□□□□□□□□□□□□□□□1.3出生日期：年月日□□□□□□□□（如出生日期不詳，實(shí)足年紀(jì)歲月天）□□□□□□1.4性別：⑴男⑵女□1.5職業(yè)：□□⑴幼托小朋友⑵散居小朋友⑶學(xué)生⑷教師⑸醫(yī)務(wù)人員⑹餐飲業(yè)⑺商業(yè)服務(wù)⑻工人⑼民工⑽農(nóng)民⑾牧民⑿漁(船)民⒀干部職工⒁保育保姆⒂離退人員⒃家務(wù)待業(yè)⒄其它1.6文化程度□⑴學(xué)齡前小朋友⑵小學(xué)⑶初中⑷高中或中專⑸大學(xué)及以上⑹文盲⑺不詳1.7現(xiàn)居住地或工作學(xué)習(xí)單位：縣（區(qū)）鄉(xiāng)（街道）村（社區(qū)）聯(lián)系電話1.8家長(zhǎng)或監(jiān)護(hù)人姓名：1.9病人屬于□⑴本縣區(qū)⑵本其它縣區(qū)⑶我省其它地⑷外?、筛郯呐_(tái)⑹外籍1.10病例分類⑴疑似病例⑵臨床診療病例⑶實(shí)驗(yàn)室確診病例□1.11發(fā)病日期：年月日□□□□□□□□1.12初診日期：年月日□□□□□□□□1.13初診單位：1.15確診日期：年月日□□□□□□□□1.16確診單位：2重要臨床體現(xiàn)2.1發(fā)熱：⑴正常⑵＜38℃⑶＜39℃⑷≥39℃□2.2眼刺癢：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.3眼瞼沉重：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.4畏光流淚：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.5灼熱：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.6視物不清：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.7腫脹：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.8乏力：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.9粘液分泌物：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.10膿性分泌物：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.11結(jié)膜充血：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□2.12病程：天□2.13其它3.流行病學(xué)調(diào)查3.1病前2天接觸同類病人：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□3.2與患者關(guān)系：⑴家庭組員⑵同事或同窗⑶玩伴⑷其它□3.3家庭內(nèi)毛巾：⑴分開(kāi)⑵不分開(kāi)□3.4家庭內(nèi)臉盆：⑴分開(kāi)⑵不分開(kāi)□3.5家庭人數(shù)：人□3.6乘坐公交車：⑴有⑵無(wú)□次數(shù)：重要乘坐幾路車：3.7乘坐出租車：⑴有⑵無(wú) □次數(shù)：3.8游泳：⑴有⑵無(wú) □3.9發(fā)病期間在家隔離：⑴是⑵否⑶不詳□3.10與否常洗手：⑴是⑵否□3.11與否打電話：⑴公用電話⑵家庭電話⑶單位電話 ⑷以上都有□3.12與否使用電腦：⑴公用電腦⑵家庭電腦⑶單位電腦 ⑷以上都有□3.13公共場(chǎng)合乘坐電梯：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□大概次數(shù)： 3.14飯店就餐：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□大概次數(shù)： 3.15舞廳或街頭跳舞：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□大概次數(shù)：3.16有否去過(guò)網(wǎng)吧：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□大概次數(shù)： 3.17有無(wú)打保齡球：⑴有⑵無(wú)⑶不詳□大概次數(shù)： 3.18其它重要公共場(chǎng)合：4.調(diào)查小結(jié)調(diào)查人： 調(diào)查日期：附件2急性出血性結(jié)膜炎防止控制技術(shù)指南（試行）急性出血性結(jié)膜炎(acutehemorrhagicconjunctivitis)也稱為流行性出血性結(jié)膜炎，是重要由腸道病毒引發(fā)的，以結(jié)膜高度充血，常見(jiàn)結(jié)膜下出血及角膜上皮點(diǎn)狀剝脫為重要臨床特性的傳染病。普通可在2～3周痊愈，屬于自限性疾病，預(yù)后良好。該病全年均可發(fā)病，多見(jiàn)于夏秋季，各年紀(jì)組人群均可發(fā)病。重要通過(guò)接觸傳輸，傳染性極強(qiáng)，傳輸速度快，人群普遍易感，易造成流行或暴發(fā)。為指導(dǎo)各地做好急性出血性結(jié)膜炎疫情控制工作，制訂本指南。一、病原學(xué)腸道病毒70型（Enterovirustype70,EV70）和柯薩奇病毒（Coxsackievirus）A組24型變種（CA24v）是急性出血性結(jié)膜炎的重要病原體。腺病毒11型也可引發(fā)該病。EV70屬微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae），含有腸道病毒的理化及生物學(xué)特性。病毒呈球形，直徑22nm～30nm，基因組為單鏈RNA，蛋白外殼呈對(duì)稱排列的20面體，無(wú)包膜。病毒在敏感細(xì)胞胞漿內(nèi)繁殖。EV70的分離培養(yǎng)需用人胚腎細(xì)胞、人胚結(jié)膜組織或HeLa細(xì)胞較難分離。不同流行期病毒基因常有變異，可引發(fā)世界范疇大流行。CA24v也屬微小RNA病毒科，生物學(xué)特性基本同EV70，可用HeLa細(xì)胞等多個(gè)傳代細(xì)胞培養(yǎng)，易分離。曾引發(fā)亞洲、中南美等地區(qū)大流行。CA24v和EV70適合在溫暖、潮濕的環(huán)境中生存與傳輸，均耐酸、耐乙醚、耐碘苷。75%的酒精是有效的消毒劑。二、流行病學(xué)（一）傳染源患者是本病的重要傳染源，其眼部分泌物及淚液均含有病毒。發(fā)病后2周內(nèi)傳染性最強(qiáng)。該病潛伏期普通為12-48小時(shí)，最長(zhǎng)可達(dá)6天。（二）傳輸途徑該病重要是通過(guò)接觸被患者眼部分泌物污染的手、物品或水等而發(fā)病，部分患者的咽部或糞便中也存在病毒。（三）人群易感性人群普遍易感，各年紀(jì)組均可感染發(fā)病。能夠由不同型別病毒單獨(dú)感染發(fā)病，也可發(fā)生兩種病毒混合感染。病后免疫持久性差，患者病愈后，能夠被不同病毒感染而再次發(fā)病，亦可能在間隔數(shù)年后被同一種病毒再次感染而發(fā)病。（四）流行特性該病曾在世界范疇內(nèi)發(fā)生多次流行。1969年本病首先在西非加納暴發(fā)流行，沿西海岸迅猛蔓延到非洲大部分國(guó)家，幾乎同時(shí)，印度尼西亞、新加坡、日本、印度等也暴發(fā)流行，很快涉及亞洲大部分國(guó)家及歐洲、中東國(guó)家，澳州、美洲也有流行報(bào)道。1971年我國(guó)初次發(fā)生該病的流行，除邊遠(yuǎn)地區(qū)外，遍及涉及香港、臺(tái)灣在內(nèi)的全國(guó)各省。此后，在80年代和90年代，諸多國(guó)家、地區(qū)及我國(guó)都有多次地區(qū)性小規(guī)模流行?？滤_奇病毒A組24型與腸道病毒70型（EV70）能夠同時(shí)或先后引發(fā)流行。該病全年均可發(fā)病，有明顯的季節(jié)特點(diǎn)，以夏秋季多見(jiàn)。易在人口稠密、衛(wèi)生條件差的地區(qū)流行，在托幼機(jī)構(gòu)、學(xué)校、工廠公司等人群聚集的地方易發(fā)生暴發(fā)流行。醫(yī)院門(mén)診的交叉感染和口腔器械消毒不嚴(yán)格，也可造成傳輸。三、病例的診療和治療各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員可參考《急性出血性結(jié)膜炎診療方案》（附件1），進(jìn)行診療。四、疫情報(bào)告出血性結(jié)膜炎是我國(guó)傳染病法規(guī)定報(bào)告報(bào)告的丙類傳染病。各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)病例及暴發(fā)疫情時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照《中華人民共和國(guó)傳染病法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理方法》的規(guī)定，進(jìn)行疫情報(bào)告。五、流行病學(xué)調(diào)查疾病防止控制機(jī)構(gòu)接到暴發(fā)疫情報(bào)告后，可開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，重點(diǎn)調(diào)查分析引發(fā)暴發(fā)、流行的危險(xiǎn)因素，闡明疾病傳輸?shù)奶攸c(diǎn)，以提高疫情控制方法的針對(duì)性。六、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)生急性出血性結(jié)膜炎暴發(fā)或流行時(shí)，各地可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，開(kāi)展急性出血性結(jié)膜炎病原學(xué)檢測(cè)工作，掌握流行毒株的特性。標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)輸和檢測(cè)可參考《急性出血性結(jié)膜炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案》。七、防止控制方法該病沒(méi)有特異性的防止方法。發(fā)生疾病暴發(fā)或流行時(shí)，各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)在做好病例管理工作的同時(shí)，主動(dòng)開(kāi)展健康教育，指導(dǎo)公眾做好個(gè)人防止，保持良好個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣。（一）對(duì)病人進(jìn)行規(guī)范治療，避免眼部并發(fā)癥發(fā)生，病人普通不需住院治療。（二）病人病后7～10天內(nèi)，應(yīng)盡量居家治療休息，減少公共場(chǎng)合活動(dòng)。（三）病人接觸過(guò)的物品應(yīng)擦拭消毒、煮沸消毒或開(kāi)水澆燙。病人的洗漱用品要嚴(yán)格做到與其它家庭組員或同居室人員分開(kāi)，不能混用，避免交叉污染。如接觸病人使用過(guò)的物品，應(yīng)充足清潔或消毒手部。（四）發(fā)生疾病暴發(fā)或流行時(shí)，學(xué)校和托幼機(jī)構(gòu)要強(qiáng)化晨檢制度，工廠等集體機(jī)構(gòu)要建立健康檢視制度。一旦發(fā)現(xiàn)病人，應(yīng)規(guī)定病人脫離學(xué)習(xí)、工作環(huán)境，居家治療休息。（五）醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)預(yù)檢分診和消毒方法的貫徹。醫(yī)務(wù)人員檢治病人后，必須認(rèn)真消毒雙手，未對(duì)雙手消毒前，不得再接觸其它病人。診療病人過(guò)程中所使用的儀器、物品要擦拭消毒。疾病流行期間，醫(yī)院應(yīng)專辟診室或診臺(tái)接診病人，避免交叉感染。（六）加強(qiáng)對(duì)游泳池、浴池、剪發(fā)室、旅館的衛(wèi)生管理與監(jiān)督。勸阻患者進(jìn)入公共場(chǎng)合或參加社交活動(dòng)。暴發(fā)流行期間，有關(guān)管理部門(mén)可根據(jù)疫情控制需要，關(guān)閉游泳池、浴池等公共場(chǎng)合。（七）平時(shí)要加強(qiáng)健康教育，普及手衛(wèi)生和愛(ài)眼護(hù)眼知識(shí)，養(yǎng)成勤洗手、不共用毛巾臉盆等個(gè)人生活用品的衛(wèi)生習(xí)慣。（八）普通不適宜采用集體滴眼藥等方式，進(jìn)行該病的群體防止。

附件3急性出血性結(jié)膜炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)一、病毒的分離與鑒定（一）標(biāo)本的采集、運(yùn)輸和保存1.患眼結(jié)膜囊淚液、分泌物是分離CA24v、EV70的重要標(biāo)本。標(biāo)本采集應(yīng)在起病1～3天以內(nèi)。2.用滅菌棉拭子涂擦翻轉(zhuǎn)的上、下瞼結(jié)膜并拭取淚液立刻投入裝有滅菌生理鹽水或Eagle液或0.5%水解乳蛋白Hanks液2mL的小試管中，貼好標(biāo)簽，置冰壺內(nèi)攜至實(shí)驗(yàn)室或低溫（-20℃～-70℃）凍存。（二）病毒分離1.取出標(biāo)本，無(wú)菌條件下揉洗棉拭子，壓擠出標(biāo)本液，加10％青霉素、鏈霉素（原濃度青霉素、鏈霉素各1萬(wàn)u/mL），置4℃作用4h后用作病毒分離。2.細(xì)胞培養(yǎng)用生長(zhǎng)單層的HeLa細(xì)胞或人胚肺二倍體細(xì)胞或其它敏感細(xì)胞，生長(zhǎng)液為10%牛血清Eagle液，含青霉素100u/mL，鏈霉素100u/mL，pH7.2-7.4。3.傾去細(xì)胞管內(nèi)生長(zhǎng)液。每細(xì)胞管接種標(biāo)本液0.2mL吸附10min。每份標(biāo)本液接種4個(gè)細(xì)胞管。加維持液（含2%牛血清的Eagle液，PH7.2～7.4）0.8mL/管。余標(biāo)本液置-20℃或-70℃凍存。細(xì)胞對(duì)照管4管，每管加維持液1.0mL。

37℃溫箱靜置培養(yǎng)。每日光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞病變。3-4天更換維持液一次，持續(xù)觀察7天。4.細(xì)胞管出現(xiàn)細(xì)胞病變，體現(xiàn)為細(xì)胞圓縮、分散、胞漿內(nèi)顆粒增加，最后細(xì)胞自管壁脫落，為分離陽(yáng)性成果。細(xì)胞病變達(dá)“+++-++++”時(shí)，將細(xì)胞收留凍存于-20℃或-70℃，備TCID50滴定及病毒鑒定。第1代培養(yǎng)見(jiàn)可疑細(xì)胞病變時(shí)繼續(xù)傳代，待細(xì)胞病變穩(wěn)定出現(xiàn)后-20℃或-70℃凍存。第1代培養(yǎng)培養(yǎng)7日不出現(xiàn)細(xì)胞病變時(shí)持續(xù)盲傳2代，如仍無(wú)細(xì)胞病變則分離成果為陰性。（三）病毒TCID50滴定1.陽(yáng)性細(xì)胞管凍融3次。rpm離心10分鐘，吸取上清，加Eagle液10倍系列稀釋為10-1至10-8病毒液，各加入細(xì)胞板內(nèi)，每孔25μl，每稀釋度4孔細(xì)胞。2.每孔加細(xì)胞懸液25μl，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照（25μl稀釋液+25μl細(xì)胞懸液），37℃培養(yǎng)7天，觀察細(xì)胞病變。3.按Reed-Muench法計(jì)算出分離病毒株的TCID50。（四）病毒鑒定（微量中和實(shí)驗(yàn)）1.將CA24v或EV70的原則血清稀釋至20個(gè)單位（例如：血清效價(jià)為1:160時(shí)，進(jìn)行1:8稀釋）。2.在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入20個(gè)單位的原則抗血清25μl和100個(gè)