肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型的建立

肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型的建立

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，乳房增生是一種非炎癥和腫瘤的增生性疾病。許多國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，其病因與分泌功能障礙和心理因素密切相關(guān)。這是乳腺癌的危險(xiǎn)因素之一。它被認(rèn)為是早期化療，因此引起了人們的關(guān)注。在中醫(yī)文獻(xiàn)中乳腺增生病與“乳癖”的描述相似,在明代,陳實(shí)功就認(rèn)為此病“由思慮傷脾,惱怒傷肝,郁結(jié)而成也”,指出本病的發(fā)生與肝氣郁結(jié)有關(guān)。本研究初步建立了肝郁氣滯證乳腺增生大鼠模型,并觀察了該模型大鼠血清中激素水平的變化,現(xiàn)總結(jié)如下:1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠,雌性,未孕,體質(zhì)量180~220g,由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào):SYXK(蘇)2002-0053。1.2黃體酮注射液苯甲酸雌二醇注射液,每支2mg,由上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):051122;黃體酮注射液,每支20mg,由浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):050916。E2、P、PRL、T、ACTH放免試劑盒均由南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院提供。1.3高速離心系統(tǒng)自動(dòng)放免儀由南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院提供;臺(tái)式高速離心機(jī)由上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn);DHG-9053A型電熱恒溫干燥箱由上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠生產(chǎn);DHZ-C型大容量恒溫振蕩器由上海精勝儀器廠生產(chǎn)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1模型設(shè)計(jì)2.1.1外加黃體酮5.按照文獻(xiàn)復(fù)制大鼠乳腺增生模型:肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg(體質(zhì)量),1次/d,連續(xù)20天。繼而改用黃體酮5mg/kg(體質(zhì)量),1次/d,連續(xù)5天。對(duì)照組每只肌注生理鹽水0.2mL,連續(xù)注射25天,停藥后飼養(yǎng)10天。2.1.2教育時(shí)間安排按照文獻(xiàn)改進(jìn)、復(fù)制不可預(yù)知的慢性應(yīng)激刺激肝郁氣滯大鼠模型:斷食、斷水24小時(shí)各5次;冰水游泳5分鐘,共5次;45℃熱環(huán)境5分鐘,共5次;160次/min水平震蕩30分鐘,共5次;夾尾刺激1分鐘,共5次;24小時(shí)明暗顛倒,共5次。上述刺激每日1種,隨機(jī)安排,使大鼠不能預(yù)知次日的刺激,以避免產(chǎn)生適應(yīng),刺激時(shí)間共35天。2.2預(yù)測(cè)模型的復(fù)制SD未孕雌性大鼠,正常光照條件,自由飲水、飲食,在本實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為4組:(1)正常對(duì)照組8只,封閉盒整群飼養(yǎng),每日肌注生理鹽水0.2mL;(2)EP組8只,封閉盒整群飼養(yǎng),按2.1.1法復(fù)制乳腺增生模型;(3)S組8只,封閉盒單只飼養(yǎng),按2.1.2法復(fù)制肝郁氣滯模型;(4)EP+S組8只,封閉盒單只飼養(yǎng),按2.1.1法復(fù)制乳腺增生模型,同時(shí)按程序施加造模刺激。2.3指標(biāo)報(bào)告2.3.1血清品質(zhì)測(cè)定各組大鼠在末次處理后,禁食12小時(shí),于眼眶后靜脈叢取血2mL,37℃水浴15分鐘,于2000r/min離心15分鐘后分離血清,采用放免法測(cè)定血清E2、P、PRL、T含量。2.3.2血漿acth含量測(cè)定各組大鼠在末次處理后,禁食12小時(shí),于眼眶后靜脈叢取血1mL,置肝素抗凝管中,及時(shí)搖勻防止凝血,于1500r/min離心5分鐘分離血漿,采用放免法測(cè)定血漿ACTH含量。2.4統(tǒng)計(jì)方法3結(jié)果3.1對(duì)大鼠血中兩種指標(biāo)的影響表1顯示,EP組大鼠血中E2、PRL水平升高,P、T水平降低,與正常對(duì)照組比較差異明顯(P<0.05);S組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與正常對(duì)照組比較差異明顯(P<0.05);EP+S組大鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,與正常對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01);EP+S組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與EP組相比差異明顯(P<0.05)。4肝郁氣功證模型的構(gòu)建西醫(yī)認(rèn)為,周期性的性激素分泌失調(diào)與乳腺組織對(duì)激素的敏感性增高是乳腺增生的主要發(fā)病機(jī)制。一方面,乳腺增生患者體內(nèi)雌激素分泌增多,孕激素分泌不足;另一方面,患者體內(nèi)泌乳素水平升高,泌乳素對(duì)乳腺組織有直接刺激作用,其還可抑制黃體期孕酮的分泌,刺激雌二醇的合成,從而導(dǎo)致雌孕激素比例失調(diào)。在雌激素持續(xù)刺激下,使乳腺組織增殖過(guò)度,導(dǎo)致乳腺增生。而中醫(yī)理論認(rèn)為發(fā)生乳腺增生病是由于肝失疏泄,沖任失調(diào)而致氣血運(yùn)行不暢,氣滯血瘀痰凝結(jié)聚而成。古人認(rèn)為“婦人之病,多起于郁”,這是由婦女易為情志變化的心理特點(diǎn)所決定的。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道,情緒的不穩(wěn)定與女性乳房小葉增生有一定關(guān)系。近年來(lái),在對(duì)乳腺增生及乳腺癌與人的個(gè)性的關(guān)系進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn),乳腺增生的患者大多具有緊張、不安、易怒等個(gè)性特征。隨著醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變,乳腺增生病因的研究已突破了“內(nèi)分泌障礙所致乳腺實(shí)質(zhì)增生”純生物學(xué)的定論,而更重視其社會(huì)、心理的致病性。應(yīng)激理論與中醫(yī)七情學(xué)說(shuō)類似,不良生活事件所形成的心理應(yīng)激的實(shí)質(zhì)是情志病因,同時(shí)中醫(yī)認(rèn)為情志與肝的關(guān)系最為密切,在對(duì)心理應(yīng)激的調(diào)節(jié)過(guò)程中肝起著決定性的作用。慢性應(yīng)激動(dòng)物模型也常被用作抑郁癥的動(dòng)物模型,因此用慢性應(yīng)激的方法制作肝郁氣滯證模型比較符合中醫(yī)臨床實(shí)際。在本研究中,筆者把造模雌鼠孤養(yǎng),同時(shí)隨機(jī)給予不同應(yīng)刺激,包括斷食、斷水、冰水游泳、45℃熱環(huán)境、60次/min水平震蕩、夾尾、24小時(shí)明暗顛倒。一方面可使動(dòng)物不能預(yù)知未來(lái)的刺激,避免適應(yīng)現(xiàn)象的發(fā)生;另一方面更好地模擬臨床情志異常引發(fā)肝郁氣滯證的過(guò)程。傳統(tǒng)的乳腺增生病模型多采用外源性雌激素造模,這僅適用于乳腺增生“病”這個(gè)“病”的模型,而“病”“證”結(jié)合的動(dòng)物模型更符合現(xiàn)代中醫(yī)研究的需要。本研究的結(jié)果顯示:S組雌鼠血中應(yīng)激激素ACTH、性激素E2水平升高,與正常對(duì)照組比較有明顯的差異,表明本研究所用的不可預(yù)知的應(yīng)激刺激可明顯升高下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸活性,同時(shí)可刺激雌性大鼠雌激素的分泌。病癥結(jié)合模型組,即EP+S組雌鼠血中E2、PRL、ACTH水平升高,P、T水平降低,與正常對(duì)照組有顯著性差異,同時(shí)該組大鼠血中E2、ACTH水平升高,與EP組相