膽草的抗菌成分研討

精品文檔-下載后可編輯膽草的抗菌成分研討本文：王蓓、梅文莉、左文健、曾艷波、劉國(guó)道、戴好富單位：海南大學(xué)園藝園林學(xué)院、中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所、海南省黎藥資源天然產(chǎn)物研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所

白花地膽草(ElephantopustomentosusLinn.)為菊科(Asteraceae)地膽草屬植物。地膽草屬植物全世界約有32種，廣泛分布于熱帶地區(qū)，我國(guó)有白花地膽草和地膽草2種，分布于華南和西南地區(qū)[1]。白花地膽草具有清熱、涼血、利濕的功效，是我國(guó)華南地區(qū)，尤其是港臺(tái)地區(qū)的常用民間藥[2]。前人對(duì)白花地膽草的化學(xué)成分研究集中在地上部分，其主要成分為倍半萜內(nèi)酯[3–4]。文獻(xiàn)報(bào)道其水煎煮液和乙醇提取液對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用[5]。我們對(duì)白花地膽草全草的化學(xué)成分和抗菌活性進(jìn)行了研究，從中分離得到9個(gè)化合物。本文報(bào)道其分離方法、結(jié)構(gòu)鑒定和生物活性結(jié)果。

1材料和方法

1.1材料植物樣品于2022年10月采自海南省昌江縣霸王嶺，經(jīng)中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所代正福副研究員鑒定為菊科地膽草屬白花地膽草(ElephantopustomentosusLinn.)，植物憑證標(biāo)本(ET202210)存放于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC51650由海南省藥品檢驗(yàn)所提供；煙草青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)由云南大學(xué)生物資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室莫明和教授提供。

1.2儀器和試劑北京泰克X-5型顯微熔點(diǎn)儀(溫度未校正)；APIQSTARPulsar質(zhì)譜儀；BruckerAV-400型超導(dǎo)核磁儀(TMS為內(nèi)標(biāo))；RudolphAutopolШ旋光儀；CO2培養(yǎng)箱(SheldonManufacturingInc.)；超凈工作臺(tái)(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng))；柱層析硅膠(200~300目)和薄層層析硅膠(青島海洋化工廠(chǎng))，SephadexLH-20(Merck公司)，四甲基偶氮唑鹽(MTT)，硫酸卡那霉素(上海生工有限公司)，硫酸鏈霉素(深圳華藥南方制藥有限公司)。

1.3提取和分離白花地膽草全草(19.7kg)曬干后加工成粗粉，用95%乙醇浸提3次。減壓濃縮至無(wú)乙醇味后得粗浸膏，將粗浸膏分散于水中成為懸濁液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚部分(124.0g)、乙酸乙酯部分(81.0g)和正丁醇部分(197.0g)。乙酸乙酯部分(81.0g)采用常壓干柱柱層析，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)洗脫，分段收集，薄層檢查，合并相同部分，濃縮收集得到5個(gè)組分(Fr.1~5)。Fr.1(31.4g)經(jīng)硅膠柱層析,以石油醚-乙酸乙酯(10∶1~0∶1)梯度洗脫，得到9個(gè)亞組分(Fr.1.1~Fr.1.9)。Fr.1.3(1.5g)經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯5∶1)得到化合物1(20.7mg)。Fr.1.4(2.6g)經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(6∶1)洗脫，甲醇重結(jié)晶得到化合物2(760.7mg)。Fr.1.5(1.1g)依次經(jīng)SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反復(fù)硅膠柱層析(石油醚-丙酮7∶1)得到化合物3(10.8mg)。Fr.1.6(3.1g)依次經(jīng)SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反復(fù)硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(6∶1)洗脫得到化合物4(11.7mg)，以石油醚-乙酸乙酯(2∶1)洗脫得到化合物5(23.6mg)。Fr.1.7(4.4g)依次經(jīng)SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)和反復(fù)硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(4∶1)洗脫分別得到化合物6(36.4mg)和化合物7(3.3mg)；Fr.2(7.6g)依次經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(3∶2)洗脫得到化合物8(20.7mg)。Fr.3(3.4g)經(jīng)反復(fù)SephadexLH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)洗脫，丙酮重結(jié)晶得到化合物9(13.7mg)。1.4抗菌活性測(cè)試方法通過(guò)濾紙片法[6]測(cè)定化合物的抗S.aureus和R.solanacearum活性。采用NA培養(yǎng)基，將兩種菌分別制成的菌懸液(1×105~1×107cfumL-1)，用棉簽將其均勻涂布于供試無(wú)菌培養(yǎng)皿中，制成含菌平板，待用?？筊.solanacearum活性

將單體化合物加入DMSO配成濃度為50.0mgmL-1的樣品溶液，選用直徑為6.0mm的滅菌濾紙片，分別加樣品溶液1.6μL，待溶劑揮干后放置于含R.solanacearum平板上，靜置20min，再放入培養(yǎng)箱37℃無(wú)光照培養(yǎng)，24h后測(cè)定其抑菌圈直徑(D)，包含濾紙片直徑6.0mm，以相同劑量的DMSO溶液為空白對(duì)照，取1.6μL濃度為50mgmL-1硫酸卡那霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。通過(guò)比較抑菌圈直徑大小，運(yùn)用t檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性差異評(píng)價(jià)?？筍.aureus活性

將單體化合物分別配成濃度為20.0mgmL-1的樣品溶液，取25μL于濾紙片上,待溶劑揮干后放置于含S.aureus平板上，取10μL濃度為0.64mgmL-1硫酸鏈霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)方法步驟和結(jié)果計(jì)算同上。1.5結(jié)構(gòu)鑒定表木栓醇(Epifriedelanol,1)

無(wú)色針晶(甲醇);分子式C30H52O;mp283℃~285℃;[α]25D。

2結(jié)果和討論

前人報(bào)道白花地膽草的化學(xué)成分主要是倍半萜內(nèi)酯，本文對(duì)白花地膽草的進(jìn)一步研究，從中分離鑒定出9個(gè)化合物，包括5個(gè)三萜:表木栓醇(1)、羽扇豆醇(2)、樺木酸(4)、熊果酸(5)、30-醛基羽扇豆醇(9)；1個(gè)酮:6-deoxyisojacreubin(3)；1個(gè)苯丙素:阿魏酸(6)；1個(gè)生物堿:3-甲酰吲哚(7)和1個(gè)脂肪酸:半