【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法課件

實(shí)驗(yàn)二革蘭染色法

了解革蘭染色法的原理掌握革蘭染色的方法以及意義實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟆踞t(yī)學(xué)】革蘭染色法細(xì)菌形態(tài)檢查方法不染色標(biāo)本檢查

常用方法：壓滴法、懸滴法、暗視野映光法應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動(dòng)力和運(yùn)動(dòng)方式染色標(biāo)本的檢查

常用方法：革蘭染色法、抗酸染色法、特殊結(jié)構(gòu)染色法

應(yīng)用：觀察細(xì)菌大小、形態(tài)、排列、染色性、特殊結(jié)構(gòu)，鑒別細(xì)菌【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法細(xì)菌染色的方法單染法:采用一種染料染色,只能觀察細(xì)菌的形態(tài)和排列特征，不能觀察細(xì)菌的染色特性和進(jìn)行鑒別。復(fù)染法（鑒別染色）:采用兩種或兩種以上的不同染料進(jìn)行先后染色，使不同種類的細(xì)菌、同種細(xì)菌的不同結(jié)構(gòu)，分別染上不同的顏色，以便鑒別細(xì)菌?！踞t(yī)學(xué)】革蘭染色法革蘭染色法該染色法是用于細(xì)菌分類、鑒別最常用最重要的染色法。是丹麥細(xì)菌學(xué)家革蘭于1884年創(chuàng)建的,至今仍廣泛應(yīng)用。【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法革蘭染色法的原理★滲透學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)革蘭陽性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易滲透，而革蘭陰性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量少，脂類含量高，酒精易滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將結(jié)合的結(jié)晶紫碘復(fù)合物脫出?！锘瘜W(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸鎂鹽有關(guān)革蘭陽性菌細(xì)胞質(zhì)中的核糖核酸鎂鹽與結(jié)晶紫-碘結(jié)合形成更大的復(fù)合物，不易被酒精脫出。★等電點(diǎn)學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)

革蘭陽性菌等電點(diǎn)低（pI）為2~3，在中性或堿性環(huán)境中所帶負(fù)電荷多；革蘭陰性菌pI為4~5，所帶負(fù)電荷少，影響結(jié)合染色的多少【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法實(shí)驗(yàn)材料與方法材料:

菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌培養(yǎng)物

試劑：結(jié)晶紫染液、盧戈碘液

95%酒精、稀釋復(fù)紅

其他：玻片、接種環(huán)、酒精燈無菌生理鹽水、顯微鏡等方法：

細(xì)菌涂片的制作：涂片、干燥、固定

革蘭染色：初染、媒染、脫色、復(fù)染

油鏡使用：觀察染色結(jié)果并記錄【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法染色標(biāo)本檢查基本程序涂片干燥固定染色鏡檢【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法染色標(biāo)本檢查的基本程序涂片－→干燥－→固定－→染色－→鏡檢★涂片：接種環(huán)滅菌、平板取材、細(xì)菌涂布★干燥：自然干燥、熱空氣干燥★固定：通過火焰外焰三次殺死細(xì)菌，固定菌膜于玻片上★染色：初染、媒染、脫色、復(fù)染★鏡檢：顯微鏡油鏡使用【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法革蘭染色法（Gram染色）染液組成：結(jié)晶紫染液、盧戈碘液

95％乙醇、稀釋復(fù)紅染色方法：結(jié)晶紫初染盧戈碘液媒染95％乙醇脫色稀釋復(fù)紅復(fù)染1分鐘30S～1min1分鐘影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是脫色水洗水洗水洗水洗干燥1min【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法ProceduresofGramStaining初染媒染脫色復(fù)染結(jié)晶紫1分鐘盧戈氏碘液1分鐘95%酒精30秒稀釋復(fù)紅1分鐘【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法革蘭染色結(jié)果紫色－－革蘭陽性菌紅色－－革蘭陰性菌【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法染色結(jié)果【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法革蘭染色意義★有助于鑒別細(xì)菌★有助于選擇用藥★有助于了解細(xì)菌的致病性【醫(yī)學(xué)】革蘭染色法影響革蘭染色的因素操作因素★涂片的厚薄★脫色時(shí)間的長短染液因素★盧戈碘液放置時(shí)間過長★

95％乙醇揮發(fā)