唐古特紅景天化學(xué)成分的測定

唐古特紅景天化學(xué)成分的測定

唐古特紅景天是薔薇科科的一種多年生草本植物或灌木植物，通常有濃密的肉根。主要分布在四川西部、甘肅、寧夏、青海等地。1973年，干燥的根系和根莖被列入中國藥店的藥物標(biāo)準(zhǔn)。1000多年前，人們使用它來治療跌倒、傷害、糖尿病和陽痿等癥狀。它被稱為“高原人參”和“雪山仙女草”。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),從不同種類的紅景天中分離得到的化學(xué)成分有40余種,包括苷類、黃酮類、酚類、酶類、揮發(fā)油類、氨基酸類、香豆素類、礦物質(zhì)、微量元素等,其中最重要的活性成分為紅景天苷(salidroside)及苷元酪醇(P-tyrosol).現(xiàn)代藥理研究表明,紅景天的活性成分具有預(yù)防腫瘤、抗疲勞、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)、抗衰老、防輻射等作用.劉志偉,余華,陳長武,王偉軍等人將紅景天應(yīng)用于功能食品的開發(fā),研制出紅景天茶,紅景天補(bǔ)酒,紅景天飲料等產(chǎn)品.徐寶軍,武藝等人還對紅景天化妝品的開發(fā)進(jìn)行了研究.隨著人們生活質(zhì)量的提高和健康意識的增強(qiáng),具有一定保健功能的天然產(chǎn)品越來越受青睞.我國西部作為紅景天植物資源的主產(chǎn)區(qū),儲量大,品種多,可為紅景天的研究提供便利條件.我國紅景天屬植物種類繁多,王莉等,周元川,Li等對小叢紅景天、薔薇紅景天、云南紅景天、西藏紅景天的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、藥理藥效等方面進(jìn)行了研究.目前,國內(nèi)外關(guān)于唐古特紅景天化學(xué)成分的研究很少且報道不多.本試驗擬通過不同溶劑對唐古特紅景天主要成分進(jìn)行提取分析并測定紅景天中紅景天苷的含量,以期為唐古特紅景天的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供依據(jù).1材料和方法1.1儀器與設(shè)備7890A-5975C型GC-MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司);6A系列HPLC高效液相色譜儀(日本島津公司);RE2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);DS-2510DT超聲波儀(上海奧譜勒儀器有限公司);HX502TD電子天平(慈溪市天東衡器廠);AL104電子天平(上海梅特勒-托利多儀器上海有限公司);HG101-3A電熱鼓風(fēng)干燥箱(南京騰飛實驗儀器有限公司);回流裝置.1.2有機(jī)微孔濾膜、硅膠乙醇(分析純)、正丁醇(分析純)、乙酸乙酯(分析純)、二氯甲烷(分析純)、四氯化碳(分析純)、三氯甲烷(分析純)、甲醇(色譜純)、高純水(自制)、0.45μm有機(jī)微孔濾膜、硅膠.1.3大花紅景天葉片的制備唐古特紅景天采于甘肅省肅北蒙古族自治縣鹽池灣國家級自然保護(hù)區(qū).唐古特紅景天的根莖用高純水洗凈,在100℃條件下烘干,粉碎后過120目篩備用.大花紅景天根莖粉末過120目篩備用.紅景天苷(Salidroside)對照品購自上海源葉生物科技有限公司(批號:110818,200404).1.4測試方法1.4.1超聲波-超聲波法分別準(zhǔn)確稱取10.00g樣品5份置于5個250mL燒杯中,各加入100mL蒸餾水.將5個燒杯同時放入超聲波儀中提取75min,溫度控制在60℃左右.將提取液抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮至微粘稠狀,密封保存?zhèn)湎乱徊嚼?1.4.3質(zhì)譜條件色譜條件:色譜柱:HP-1701毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm);電子捕獲檢測器,檢測器溫度300℃,進(jìn)樣口溫度250℃,恒溫條件下柱溫180~220℃;載氣為He(>99.999%),流速為1mL/min;升溫程序:初溫40℃,保留1min,然后以3℃/min升溫至120℃;再以4℃/min升溫至250℃,保留20min.不分流進(jìn)樣.質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子化源(ESI);掃描模式:正離子模式;檢測方式:選擇反應(yīng)檢測(SRM);電噴霧電壓:2500V;毛細(xì)管柱溫:350℃;干燥器溫度:400℃;碰撞氣:高純度氮氣;傳輸線溫度:280℃;溶劑延遲5min,離子源溫度:150℃;四極桿溫度:100℃;反應(yīng)氣:甲烷,流量:2mL/min;電子能量70eV,質(zhì)量掃描范圍15~550m/z.1.4.4紅景天苷的提取、濃縮、分離稱取紅景天根莖粉末20.00g于蒸餾燒瓶中,逐次加70%乙醇100mL連續(xù)回流提取3次,每次1.5h(5組平行),將提取液趁熱真空減壓抽濾得粗提物,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮,回收乙醇,將濃縮液用超純水溶解,乙酸乙酯萃取3次,合并水層,再用正丁醇萃取3次,合并正丁醇層,將所得液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮,回收正丁醇,將濃縮液用乙醇溶解,三氧化二鋁拌柱,濕法裝柱,乙醇-氯仿(3∶1)洗脫,得紅景天苷粗品,再將所得樣液硅膠拌柱,濕法裝柱,乙醇-氯仿250mL(3∶1)洗脫,得紅景天苷分離物.將所得純品過0.45μm有機(jī)微孔濾膜,待測.1.4.5標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備精密稱取紅景天苷對照品17.4mg,用超純水溶解并定容于10mL容量瓶中,作為對照品儲備液.精確量取儲備液2mL用超純水定容至100mL容量瓶中,取上述溶液28.8mL用超純水定容至100mL,即得試驗所需對照液10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液.1.4.6膠結(jié)充填劑濃度檢測用高效液相色譜進(jìn)行檢測,檢測條件:色譜柱為XDB-Cs、5μm、4.6×150mmC8柱,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相:甲醇-水(15∶85)線性梯度淋洗;流速1.0mL/min,柱溫35℃;檢測波長275nm;理論塔板數(shù)不低于2000,檢測器為二極管陣列.2結(jié)果與分析2.1唐古特紅景天提取液的化學(xué)成分從圖1、表1可以看出,利用GC-MS聯(lián)用儀對正丁醇萃取的唐古特紅景天提取液成分檢測共得出17種成分,這些成分中大多是醇類物質(zhì),有11種,其中相對含量最高的是己醇,為1.97%.2.2醇類和黃酮類物質(zhì)的含量從圖2、表2中看出,對唐古紅景天乙醇萃取層中的成分共檢測出16種,為醇類和黃酮類物質(zhì),醇類11種,其中相對含量最高的是己醇,為2.89%;黃酮類5種,相對含量最高的是3-甲基-2-(H)-呋喃酮,為1.87%.2.3酯類物質(zhì)中各化學(xué)成分的檢測從圖3、表3中看出,GC-MS聯(lián)用儀對唐古紅景天乙酸乙酯萃取層中的成分檢測結(jié)果顯示,共有21種物質(zhì)被檢出,大都是酯類和有機(jī)酸類物質(zhì).酯類有10種,相對含量最高的是1,2-苯二羥酸異辛酯,為0.97%,有機(jī)酸類有6種,相對含量最高的是二十四基乙酸,為1.77%.2.4中共檢出烷烴類的含量從圖4、表4中看出,極性較弱的唐古紅景天二氯甲烷萃取液中共有13種被檢出物質(zhì),其中有11種烷烴類,相對含量最高的是十一烷,為2.47%,其他兩種是乙酸正丁酯,相對含量為0.27%;10-甲基萘,相對含量為0.79%.2.5古紅景天四氯化碳萃取液的檢出價值從圖5、表5中可以看出,極性最弱的唐古紅景天四氯化碳萃取液也有13種被檢出物質(zhì),大多是烷烴類,有11種,其中相對含量最高的是三十一烷,為0.65%.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的出峰時間分別準(zhǔn)確量取3、5、10、20、40mL的紅景天苷對照溶液,于高效液相色譜儀上檢測,結(jié)果如圖6所示.根據(jù)上圖可看出其重疊性非常好,說明檢測紅景天苷的出峰時間基本一致.由儀器檢測所得的5個標(biāo)樣的峰面積分別是131.4、164.2、331.2、627.2、1306.6(mV·min).峰面積與濃度有很好的線性關(guān)系.峰面積(y)與紅景天苷濃度(x)的線性關(guān)系為y=32.043x+12.249(R2=0.9985,圖7).2.7大花紅景天的含量計算由圖8可知,大紅景天中紅景天苷峰面積為2368.8(mV·min),根據(jù)所得線性方程計算可得所提大花紅景天濃度為73.54mg/L,大花紅景天提取液的體積為250mL.根據(jù)提取液的體積可計算出紅景天中紅景天苷的含量為0.92%.2.8紅景天苷重現(xiàn)性測定取大花紅景天平行樣品5份,分別進(jìn)行HPLC測定,紅景天苷含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.01823%,低于2%.說明按本文方法測定紅景天苷的重現(xiàn)性良好、方法可靠(表6).2.9唐古特紅景天中紅景天苷的含量由圖4可知,唐古特紅景天中紅景天苷峰面積為2911.6(mV·min).根據(jù)所得線性方程計算得所提濃度為90.5mg/L,唐古特紅景天提取液的體積為250mL.根據(jù)提取液的體積可計算出唐古特紅景天中紅景天苷的含量為1.13%.3紅景天主要化學(xué)成分的種類見表1本試驗通過GC-MS聯(lián)用儀對5種不同極性溶劑萃取紅景天提取液的各成分檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)被檢得物質(zhì)中有以下幾大類主要物質(zhì),分別為醇類、黃酮類、酯類、有機(jī)酸類和烷烴類.其中醇類物質(zhì)有17種(24.58%),烷烴類18種(14.78%),黃酮類5種(8.96%),有機(jī)酸類6種(8.45%),酯類10種(5.71%),其他物質(zhì)8種(3.48%).通過檢測各物質(zhì)種類的含量可了解其在藥材方面的應(yīng)用范圍,也可以了解紅景天中某種物質(zhì)的提取效率和價值.試驗表明,唐古特紅景天中含有大量的烷烴、醇、酮、酯類等物質(zhì),從而使得其有濃郁的香味.經(jīng)測定大花紅景天中紅景天苷的含量為0.92%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RS