黃芩中總黃酮提取條件的優(yōu)化

黃芩中總黃酮提取條件的優(yōu)化

黃鼠狼是臨床常用的中藥。它具有清熱除濕、清火解毒、抗菌、抗癌、消炎等功效。有效成分是以黃酮類(lèi)化合物為代表的黃酮類(lèi)化合物。黃芩的提取液在整個(gè)紫外區(qū)域均有較好吸收,特別是在UVB區(qū)有更強(qiáng)的吸收,具有廣譜防曬作用,是優(yōu)良的天然植物防曬劑。筆者采用新型提取工藝超聲萃取法從黃芩中提取總黃酮,與傳統(tǒng)的索氏提取法相比具有提出率高、提取時(shí)間短、免去高溫對(duì)提取成分的影響及操作簡(jiǎn)單、副產(chǎn)品少、產(chǎn)物易分離提純的優(yōu)點(diǎn)。1材料和方法1.1儀器與檢測(cè)方法島津AEL!200型電子分析天平,KQ3200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),DGG!9030型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司),UV!3600紫外!可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津),標(biāo)準(zhǔn)分樣篩,研缽。黃芩藥材購(gòu)自南京市益豐大藥房,無(wú)水乙醇為分析純,水為蒸餾水。1.2方法1.2.1超聲萃取時(shí)間202020黃芩40目粗粉)4份,每份1.00g,分別加入60%(V/V)乙醇水溶液(以下簡(jiǎn)稱(chēng)60%乙醇)50ml,浸泡1h后,50℃超聲萃取,提取時(shí)間分別為10、20、30、40min,過(guò)濾,濾液定容至100ml。分別精確吸取1.00ml濾液于25ml容量瓶中,用60%乙醇定容。用1cm的石英比色皿以60%乙醇作參比,測(cè)定其在200~400nm的紫外吸收光譜。1.2.2乙醇溶液的提取精確稱(chēng)取樣品3份,每份1.00g,分別加入50%、60%、70%乙醇50ml,浸泡1h后,50℃超聲萃取30min,過(guò)濾,濾液定容至100ml。分別精確吸取1.00ml濾液于25ml容量瓶中,用相應(yīng)濃度的乙醇溶液定容。紫外吸收光譜測(cè)定同“1.2.1”。1.2.3乙醇的超聲萃取精確稱(chēng)取樣品4份,每份1.00g,分別加入15、20、25、50ml60%的乙醇,浸泡1h后,50℃超聲萃取30min,過(guò)濾,濾液定容至100ml。分別移取1.00ml于25ml容量瓶中,以60%乙醇定容。紫外吸收光譜測(cè)定同“1.2.1”。1.2.4超聲萃取液的制備精確稱(chēng)取樣品4份,每份1.00g,分別加入60%乙醇50ml,浸泡1h后,超聲萃取30min,溫度分別為30、40、50、60℃,過(guò)濾,濾液定容至100ml。分別精確吸取1.00ml濾液于25ml容量瓶中,用60%乙醇定容。紫外吸收光譜測(cè)定同“1.2.1”。1.2.5超聲萃取法精確稱(chēng)取樣品3份,每份1.00g,加入50ml60%乙醇,分別浸泡1、2、3h后,50℃超聲萃取30min,過(guò)濾。濾液定容至100ml。分別移取1.00ml于25ml容量瓶中,用60%乙醇定容。紫外吸收光譜測(cè)定同“1.2.1”。1.2.6萃取時(shí)間的選擇精確稱(chēng)取樣品1.00g,加入50ml60%乙醇,浸泡1h后50℃超聲萃取30min,過(guò)濾。再向樣品中加入50ml60%乙醇,同樣條件下進(jìn)行2次萃取,2次萃取液均定容至100ml。分別移取1.00ml于25ml容量瓶中,用60%乙醇定容。紫外吸收光譜測(cè)定同“1.2.1”。2結(jié)果與分析2.1萃取效率的測(cè)定以萃取劑乙醇濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),分別選取260、280、300、320、340、360、380nm7個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值對(duì)乙醇濃度作圖,如圖1所示。由圖1可見(jiàn),以60%乙醇作萃取劑時(shí)所得萃取液在所選各個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值最高,即提取效率最高,這是由黃芩中所含天然化合物的種類(lèi)、極性、含量決定的。另外,試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn),當(dāng)乙醇濃度為50%或更低時(shí),萃取液粘稠,難以過(guò)濾,可能是樣品中的多糖類(lèi)成分溶于低濃度乙醇水溶液的緣故。2.2浸泡時(shí)間的測(cè)定以浸泡時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),分別選取260、280、300、320、340、360、380nm7個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值對(duì)浸泡時(shí)間作圖,如圖2所示。由圖2可見(jiàn),浸泡時(shí)間越長(zhǎng),吸光度值越小。2.3萃取時(shí)間的確定以萃取時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),分別選取260、280、300、320、340、360、380nm7個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值對(duì)相應(yīng)萃取時(shí)間作圖(圖3)。由圖3可見(jiàn),超聲時(shí)間為30min時(shí),萃取液在各波長(zhǎng)下的吸光度值均較高,若延長(zhǎng)萃取時(shí)間反而出現(xiàn)吸光度下降的現(xiàn)象,說(shuō)明不同超聲時(shí)間,萃取效率不同。因此最佳提取時(shí)間為30min。2.4萃取劑用量的確定以料液比(g/ml)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),分別選取260、280、300、320、340、360、380nm7個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值對(duì)料液比作圖,如圖4所示。由圖4可見(jiàn),隨料液比值增大,吸光度值增大。說(shuō)明萃取劑用量過(guò)小時(shí),萃取效率低,會(huì)損失大量的有效成分,但若萃取劑用量過(guò)大,則會(huì)給濃縮工作帶來(lái)負(fù)擔(dān)。因此該試驗(yàn)選取最大料液比為1∶50。2.5超聲溫度的影響以超聲萃取溫度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),分別選取260、280、300、320、340、360、380nm7個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值對(duì)超聲溫度作圖,如圖5所示。由圖5可見(jiàn),從30℃升至50℃時(shí),黃芩萃取液在各波長(zhǎng)下的吸光度值均隨溫度升高而增大,說(shuō)明加熱可提高黃芩中防曬活性成分的溶解度,從而提高萃取效率,但當(dāng)溫度升高至60℃時(shí),吸光度值已無(wú)太大變化,而在260、280和300nm3個(gè)波長(zhǎng)下反而下降比較大,可能是較高溫度下萃取劑對(duì)黃芩藥材中不同化學(xué)成分的溶解度發(fā)生變化所致。因此,提取防曬劑的適宜溫度應(yīng)為50℃。2.6萃取次數(shù)對(duì)紫外吸收特性的影響2次超聲萃取后萃取液的吸光度值及其比值如表1所示。由表1可見(jiàn),雖然2次萃取仍具有一定的紫外吸收性能,但在同一波長(zhǎng)處的吸光度值僅約相當(dāng)于1次萃取的10%,卻要增加1倍的溶劑。因此,考慮成本因素,采用1次萃取即可。2.7黃鼠的超聲萃取方法與兩種方法的比較2.7.1黃鼠的超聲萃取光譜2.7.2吸光度值的測(cè)定超聲萃取和索氏提取2種方法提取黃芩中總黃酮,其提取液在260~380nm波長(zhǎng)下對(duì)應(yīng)的吸光度值見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn),索氏提取法中提取液的吸光度值比超聲萃取法的吸光度值低,原因是超聲波的強(qiáng)烈振動(dòng)所具有的特殊作用,有利于溶劑滲入植物粉末中,加速其中的有效成分溶出和擴(kuò)散,從而提高了提取率,因而超聲波萃取法提取率高,時(shí)間短。3紫外光譜測(cè)定總得性比該試驗(yàn)確定了超聲萃取黃芩中防曬活性成分的最佳提取條件是:以60%的乙醇水溶液為萃取劑,料液比1∶50(g/ml),在50℃超聲萃取30min?？紤]到成本因素,萃取1次即可得到較為滿(mǎn)意的結(jié)果。超聲萃取與索氏提取相比操作方便,提取時(shí)間短,效率高。試驗(yàn)中用乙醇作溶劑,具有無(wú)毒、無(wú)異味、無(wú)殘留、安全性好等優(yōu)點(diǎn)。由黃芩的紫外掃描圖可知,在200~400nm的紫外吸收光譜有2