雙特異性抗體與抗體融合蛋白

雙特異性抗體2021/5/91雙特異性抗體概述構建策略應用2021/5/92概述雙特異性抗體：抗體兩個結(jié)合點表現(xiàn)為不同的特異性，即分別結(jié)合不同表位。如，一個結(jié)合靶細胞（如腫瘤細胞），另一結(jié)合藥物或免疫效應細胞（如蓖麻毒素、抗癌藥物、細胞毒性細胞）2021/5/93雙特異性抗體2021/5/942021/5/95雙特異性抗體的功用：提高療效，減少副作用。主要用于靶向治療。2021/5/96構建策略雙特異性抗體的靶標一個結(jié)合治療靶標，另一個指向體內(nèi)效應細胞T細胞

TCRCD3CD22021/5/97構建策略雙特異性抗體的靶標一個結(jié)合治療靶標，另一個指向體內(nèi)效應細胞吞噬細胞/APCFcγR、CR2021/5/98構建策略雙特異性抗體的靶標一個結(jié)合治療靶標，另一個指向體內(nèi)效應細胞NK細胞

FcγR、CD562021/5/99雙特異性抗體的效應靶效應細胞靶分子

效應T細胞TCR/CD3,CD2殺傷腫瘤細胞NK細胞FcγRIII,CD44,CD56,CD38殺傷腫瘤細胞病毒感染細胞中性粒細胞FcγRI,CR3,FcαRI殺傷腫瘤細胞病毒感染細胞單核巨噬細胞FcγRI,CR3,FcαRI殺傷腫瘤細胞病毒感染細胞樹突狀細胞FcγR抗原遞呈紅細胞CR1免疫粘附2021/5/910構建策略雙特異性抗體的構建方法雜化雜交瘤技術將具有某種特異性（如抗瘤細胞）的McAb細胞株與具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白）的小鼠脾細胞進行融合，即產(chǎn)生出雜化雜交瘤細胞株的二價瘤體。2021/5/911

雜化雜交瘤技術產(chǎn)生的雙特異性抗體2021/5/912雜化雜交瘤分泌的抗體形式

保持原特異性抗體分子：

L1H1-H1L1，L2H2-H2L2

重鏈特異性相同的配對抗體分子：

L1H1-H1L2，L1H2-H2L1L2H1-H1L2，L1H2-H2L2

重鏈、輕鏈特異性不同的配對抗體分子：

L1H1-H2L2，L1H2-H1L2L1H1-H2L1，L2H2-H1L2

2021/5/913只有L1H1-H2L2才是所需的雙特異性抗體2021/5/914雜化雜交瘤方法的不足產(chǎn)量低，僅占10%

產(chǎn)物需篩選，費時費力瘤株不穩(wěn)定2021/5/915構建策略雙特異性抗體的構建方法化學交聯(lián)法

Nisonoff和Rivers最早開始研究化學交聯(lián)無需經(jīng)過細胞融合，比較簡便易行。通常利用重鏈與輕鏈這間的二硫鏈經(jīng)還原和再氧化，將兩種不同特異性抗體的半分子結(jié)合在一起?；蛴秒p功能交聯(lián)劑，如鄰苯酸酯等，把兩個抗體半分子交聯(lián)在一起。2021/5/916化學交聯(lián)的雙特異性抗體2021/5/917構建策略雙特異性抗體的構建方法化學交聯(lián)法用于制備雙功能抗體的McAb可以是完整分子，也可是經(jīng)胃酶水解獲得F（abˊ）2片段。后者在減少鼠源免疫原性方面，效果較好。2021/5/918構建策略雙特異性抗體的構建方法基因工程技術利用分子生物學技術設計產(chǎn)生雙功能抗體常見有四種構建形式，多為小分子抗體。2021/5/919末端半胱氨酸殘基（Cys）共價交聯(lián)在兩種scFv分子C末端分別帶上自由的Cys，通過常規(guī)二硫鍵共價交聯(lián)，形成雙特異性抗體

VLAVHALCysVLBVHBLCys-S-S-2021/5/920單鏈雙特異性抗體將兩種scFv分子基因用linker連接在一起，然后表達形成雙特異性抗體

VLAVHALVLBVHBLL2021/5/921微型雙特異性抗體利用專門二聚化結(jié)構將兩種scFv分子連接在一起，形成雙特異性抗體如利用fos和jun基因的亮氨酸拉鏈序列：

VLAVHALfosVLBVHBLjun2021/5/922雙體型雙特異性抗體將兩種不同抗體的VH和VL用較短的linker連接形成兩種不同單鏈，當它們共表達時，其相互間連接在一起，形成雙特異性抗體

1993，Holliger

2021/5/923雙特異性抗體的應用免疫診斷腫瘤放射顯影腫瘤藥物殺傷腫瘤的免疫殺傷乳腺癌、淋巴母細胞白血病、神經(jīng)膠質(zhì)瘤2021/5/924抗體免疫偶聯(lián)物2021/5/925抗體免疫偶聯(lián)物概述小分子藥物與抗體偶聯(lián)物毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物應用2021/5/926概述抗體免疫偶聯(lián)物將單抗與“彈頭”藥物偶聯(lián)在一起，以提高藥物作用的特異性，主要用于腫瘤治療。如，Mylotarg—抗CD33單抗偶聯(lián)加里奇霉素，治療老年人急性髓細胞性白血病，2000年上市。2021/5/927與單抗偶聯(lián)的常用“彈頭”藥物類別名稱植物毒素蓖麻毒素，相思豆毒素，皂角苷微生物毒素綠膿桿菌外毒素，白喉毒素抗代謝藥物氨基蝶呤，甲氨蝶呤，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶，5-氟脫氧尿苷蒽環(huán)類藥物阿霉素柔紅霉素嗎啉阿霉素烷基化藥物順鉑苯丙氨酸氮芥絲裂霉素C抗有絲分裂藥物長春花堿秋水仙堿鬼臼毒素抗生素博萊霉素加里奇霉素平陽霉素2021/5/928小分子藥物與抗體偶聯(lián)物

一個單抗可偶聯(lián)一個至數(shù)十個小分子藥物?？贵w分子中的多個基團可以用于連接，如巰基，氨基，羥基，胍基，羧基，糖基等。2021/5/929小分子藥物與抗體偶聯(lián)物直接偶聯(lián)物將藥物與單抗直接連接在一起不同的小分子藥物往往需選擇不同的交聯(lián)劑。2-亞胺四氫噻吩(2-IT)可在具氨基的化合物上引入巰基2021/5/930小分子藥物與抗體偶聯(lián)物直接偶聯(lián)物將藥物與單抗直接連接在一起不同的小分子藥物往往需選擇不同的交聯(lián)劑。SPDP(N-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯)可將巰基引入抗體如，阿霉素與抗子宮內(nèi)膜腺癌單抗偶聯(lián)，效果提高57倍2021/5/931小分子藥物與抗體偶聯(lián)物直接偶聯(lián)物將藥物與單抗直接連接在一起不同的小分子藥物往往需選擇不同的交聯(lián)劑。PDPH(3-(2-吡啶二硫基)-丙酰肼)可將巰基引入抗體2021/5/932小分子藥物與抗體偶聯(lián)物直接偶聯(lián)物將藥物與單抗直接連接在一起不同的小分子藥物往往需選擇不同的交聯(lián)劑。戊二醛可將藥物與單抗的伯氨基僑聯(lián)如，柔紅霉素與單抗偶聯(lián)2021/5/933小分子藥物與抗體偶聯(lián)物直接偶聯(lián)物將藥物與單抗直接連接在一起不同的小分子藥物往往需選擇不同的交聯(lián)劑。活潑酯可將含羧基藥物與抗體的氨基相偶聯(lián)2021/5/934小分子藥物與抗體偶聯(lián)物間接偶聯(lián)物將藥物先與大分子載體相連，然后大分子載體再偶聯(lián)到單抗。Poly-Lys可將含羧基的小分子藥物偶聯(lián)到載體。2021/5/935小分子藥物與抗體偶聯(lián)物間接偶聯(lián)物將藥物先與大分子載體相連，然后大分子載體再偶聯(lián)到單抗。Poly-Glu可將含氨基的小分子藥物偶聯(lián)到載體。2021/5/936小分子藥物與抗體偶聯(lián)物間接偶聯(lián)物將藥物先與大分子載體相連，然后大分子載體再偶聯(lián)到單抗。Dextran可將含氨基的小分子藥物偶聯(lián)到載體。如，將平陽霉素與抗乳腺癌/肝癌單抗偶聯(lián)2021/5/937小分子藥物與抗體偶聯(lián)物間接偶聯(lián)物將藥物先與大分子載體相連，然后大分子載體再偶聯(lián)到單抗。脂質(zhì)體脂質(zhì)體與藥物融合，再與抗體連接成免疫脂質(zhì)體如，阿霉素2021/5/938小分子藥物與抗體偶聯(lián)物偶聯(lián)要點與存在問題小分子藥物與單抗偶聯(lián)應有一定空間距離需提高偶聯(lián)產(chǎn)率偶聯(lián)基團應避開藥物活性基團保留單抗靶向性多個藥物分子偶聯(lián)簡單，易重復不形成抗體、藥物或偶聯(lián)物聚合物2021/5/939毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。同型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個相同反應功能基團。雙功能異氰酸酯親脂性偶聯(lián)劑如，將白喉毒素與抗瘤單抗偶聯(lián)2021/5/940毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。同型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個相同反應功能基團。脂肪二醛通過其醛基與藥物/單抗的氨基偶聯(lián)2021/5/941毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。同型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個相同反應功能基團。二馬來酰亞胺衍生物巰基偶聯(lián)劑

2021/5/942毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。同型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個相同反應功能基團。特點與不足步驟簡單，流程短。副反應產(chǎn)物多，均一性差，產(chǎn)率低。2021/5/943毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。異型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個不同反應功能基團。SPDP先與抗體（藥物）氨基反應形成化合物，再與藥物（抗體）巰基反應形成偶聯(lián)物。如，相思豆毒素、蓖麻毒素、力達霉素與抗瘤單抗偶聯(lián)2021/5/944毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。異型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個不同反應功能基團。苯丁酸氮芥衍生物先與抗體氨基反應形成化合物，再與藥物氨基反應形成偶聯(lián)物。2021/5/945毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。異型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個不同反應功能基團。馬來酰亞胺活潑酯先與藥物氨基反應形成化合物，再與抗體巰基反應形成偶聯(lián)物。2021/5/946毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。異型雙功能偶聯(lián)劑具有兩個不同反應功能基團。特點反應溫和，易控制，產(chǎn)物均一性好，產(chǎn)率高。2021/5/947毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物

毒素和多肽類抗腫瘤藥物分子量較大，具有較強的腫瘤殺傷活性，但選擇性差。免疫偶聯(lián)物的純化由于反應產(chǎn)物是混合物，故需進行分離純化常用方法有:凝膠過濾、親和層析、離子交換層析、高效液相色譜。2021/5/948毒素及大分子多肽藥物與抗體偶聯(lián)物研究趨勢連接可控性，高產(chǎn)率，高產(chǎn)物均一性。選擇性連接抗體和藥物某一特定基團偶聯(lián)物在體內(nèi)穩(wěn)定循環(huán)，并能在腫瘤部位激活或釋放2021/5/949抗體偶聯(lián)藥物的研究與應用單抗-藥物的臨床試驗研究亦有20多年歷史存在諸多問題2021/5/950單抗-藥物的臨床腫瘤治療試驗腫瘤抗體藥物有效率毒性結(jié)腸抗結(jié)腸N-乙酰美法侖3/9血清病抗結(jié)腸新制癌霉素3/8白血病增多肺抗GA733-2甲氨蝶呤1/11發(fā)燒/厭食/腹瀉/腹痛肺與結(jié)腸抗GA733-2長春花堿0/13胃腸毒性/腹痛卵巢與結(jié)腸抗CEA長春堿酰胺0/4無成神經(jīng)細胞抗成神經(jīng)細胞瘤柔紅霉素3/7骨髓抑制其它聯(lián)合阿霉素5/23發(fā)燒/皮疹/寒戰(zhàn)/骨髓抑制聯(lián)合絲裂霉素0/19血小板減少/腹瀉/胃腸毒性2021/5/951抗體偶聯(lián)藥物的研究與應用單抗-毒素的臨床試驗研究廣泛，具一定效果，但與期望尚有距離。2021/5/952單抗-毒素的臨床腫瘤治療試驗腫瘤抗體藥物有效率毒性結(jié)腸抗結(jié)腸蓖麻毒素A鏈0/17血管滲漏/腎和神經(jīng)毒性小細胞肺癌抗NCAM蓖麻毒素1/19血管滲漏黑色素瘤抗gp240蓖麻毒素A鏈4/20血管滲漏卵巢OVB3綠膿桿菌毒素A0/23CNS毒性腦抗轉(zhuǎn)鐵蛋白白喉毒素8/15無多種實體瘤抗Ley蓖麻毒素A鏈2/32血管滲漏B細胞淋巴瘤抗CD22蓖麻毒素A鏈6/26發(fā)燒霍奇金淋巴瘤抗CD25蓖麻毒素A鏈1/12血管滲漏CLL抗CD5蓖麻毒素A鏈4/14血管滲漏皮膚TCL抗CD5蓖麻毒素A鏈0/8血管滲漏2021/5/953抗體融合蛋白2021/5/954抗體融合蛋白概述重組免疫毒素基因工程抗體-酶基因工程抗體-細胞因子抗體-超抗原免疫粘連素2021/5/955概述抗體融合蛋白將抗體（片段）與其它效應蛋白基因融合，構建融合表達載體，然后在合適的表達系統(tǒng)生產(chǎn)融合蛋白。融合蛋白具均一性，易生產(chǎn)2021/5/956重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達重組免疫毒素的構建常用毒素白喉毒素及其衍生物白喉桿菌所產(chǎn)生，修飾延長因子,阻斷蛋白合成毒性極強,1-2個分子即可殺死1個細胞。腫瘤細胞敏感體內(nèi)水解為A/B兩片段，A為毒性部分，B為結(jié)合部分2021/5/957重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達重組免疫毒素的構建常用毒素假單胞桿菌外毒素及其衍生物不可逆修飾延長因子,阻斷蛋白合成毒性很強單鏈，分結(jié)合部與毒性部位2021/5/958重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達重組免疫毒素的構建常用毒素蓖麻毒素及其衍生物滅活核糖體，抑制蛋白合成體內(nèi)水解為A/B兩鏈,A為毒性部分,B為結(jié)合部分2021/5/959重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達重組免疫毒素的構建構建重組免疫毒素常用抗體片段的C端與毒素融合

2021/5/960重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達臨床試驗與研究血液惡性腫瘤靶向IL-2受體的免疫毒素多數(shù)T/B細胞型白血病與淋巴瘤都過度表達IL-2受體亞基CD25

如，抗CD25單抗-假單胞桿菌外毒素衍生物（臨床）2021/5/961重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達臨床試驗與研究血液惡性腫瘤靶向CD22的免疫毒素約70%B細胞型淋巴瘤和白血病為CD22陽性如，抗CD22單抗-假單胞桿菌外毒素衍生物（臨床前）2021/5/962重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達臨床試驗與研究血液惡性腫瘤其他靶向血液抗原的免疫毒素

CD19,CD6,CD30,CD33,CD462021/5/963重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達臨床試驗與研究實體瘤抗LewisY重組疫毒素

LewisY存在于結(jié)腸癌，乳腺癌，胃癌，肺癌，膀胱癌表面。如，抗LewisY單抗-假單胞桿菌外毒素衍生物，對結(jié)腸癌和乳腺癌有確切療效。2021/5/964重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達臨床試驗與研究實體瘤抗Her2/neu重組疫毒素

Her2/neu在乳腺癌，肝癌，卵巢癌，胃癌，有高表達?？笻er2單抗-假單胞桿菌外毒素衍生物(臨床)2021/5/965重組免疫毒素

將單抗分子與毒素蛋白融合表達存在問題特異性非特異性毒性血管滲漏—內(nèi)皮細胞損傷免疫原性實體瘤滲透2021/5/966基因工程抗體-酶

把單抗分子與酶融合表達，使特定的催化效應靶向特定的部位?？贵w介導的酶-前藥療法酶集中于靶標部位，催化無或低活性的抗癌前藥轉(zhuǎn)化為胞毒性藥物，從而發(fā)揮藥物特異性釋放、活化，提高療效。抗CEA抗體-β-葡萄苷酸酶前藥—doxorubicin葡萄苷酸衍生物療效顯著提高2021/5/967基因工程抗體-酶

把單抗分子與酶融合表達，使特定的催化效應靶向特定的部位?？贵w介導的酶-前藥療法抗p97抗體-β-內(nèi)酰胺酶P97—黑瘤抗原前藥—7-(4-羧基丁酰胺)-頭孢菌素氮芥療效較化學偶聯(lián)物顯著提高2021/5/968基因工程抗體-酶

把單抗分子與酶融合表達，使特定的催化效應靶向特定的部位。基于核酸酶的融合蛋白核酸酶與單抗融合，靶向腫瘤細胞核糖核酸酶免疫毒素多種核糖核酸酶具抗瘤活性如，牛胰/牛精核糖核酸酶2021/5/969基因工程抗體-酶

把單抗分子與酶融合表達，使特定的催化效應靶向特定的部位。靶向溶栓劑血纖溶酶原激活劑與單抗融合，靶向凝血塊如，尿激酶血纖溶酶原激活劑/組織血纖溶酶原激活劑與血塊單抗融合20