血清eb病毒抗體檢測在鼻咽癌中的應(yīng)用

血清eb病毒抗體檢測在鼻咽癌中的應(yīng)用

血液病毒（ebv）是一種常見的人類感染，與各種傷口的感染密切相關(guān)的dna病毒。由于人類容易感染EB病毒,EB病毒感染導(dǎo)致的相關(guān)疾病,特別是惡性腫瘤的發(fā)病越來越受到研究人員的關(guān)注。自外國醫(yī)學(xué)研究人員OldLJ等報告使用免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)確認(rèn)EB病毒和鼻咽癌的血清學(xué)有關(guān)以來,后來諸多研究均發(fā)現(xiàn)抗EB病毒殼抗原的免疫球蛋白對鼻咽癌診斷有特異性。近年來,隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展和在臨床上的大量應(yīng)用,國內(nèi)外學(xué)者對鼻咽癌患者血清EB病毒抗體診斷方法作了大量研究。1關(guān)于血清病毒對抗的研究1.1eb病毒抗體檢測長期的臨床研究發(fā)現(xiàn)EB病毒感染人體后,被病毒感染的人體細(xì)胞具有EB病毒的基因組,并產(chǎn)生相應(yīng)的各種抗原,已確定的被病毒感染細(xì)胞可合成抗原有:(1)核抗原(EBvirusasso-ciatednuclearantigen,EBNA);(2)膜抗原(membraneantigenofEpstien-Barrvirus,MA);(3)早期抗原(earlyintracellularantigen,EA);(4)衣殼抗原(EBviruscapsidantigen,VCA);(5)淋巴細(xì)胞識別膜抗原(LYDMA)。由于抗原產(chǎn)生后機(jī)體會出現(xiàn)相應(yīng)的抗體,通過血清EB病毒抗體的檢測可為臨床診斷提供依據(jù),目前有大量報道顯示測定單個EB病毒抗原的抗體相比聯(lián)合測定多個抗體對鼻咽癌的診斷的特異性及靈敏度偏低,不能為臨床診斷提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),為提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性,現(xiàn)多采用多個抗體聯(lián)合檢測及聯(lián)合分析的方法。近年來,隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展及對鼻咽癌認(rèn)識的提高,檢測EB病毒以輔助診斷鼻咽癌的方法越來越多,如免疫熒光和免疫酶法、酶中和分析、免疫印跡、免疫斑點(diǎn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)等,其中建立使用的ELISA及PCR檢測EB病毒最受重視,ELISA相比其他檢測方法在鼻咽癌檢測、篩查方面特異性和敏感度均較高,操作更加簡單、快捷,且能自動化運(yùn)行、檢驗(yàn)結(jié)果易判斷。因此,此方法能有效提高工作效率,又能保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。1.2elisa法檢測正常血清學(xué)診斷肺癌對于鼻咽癌,EB病毒不同抗體其特異性與靈敏度存在差異。賈寧人等對EBV感染后產(chǎn)生的急性反應(yīng)蛋白衣殼抗原蛋白(VCA)的血清抗體進(jìn)行了檢測,觀察表明抗VCA-IgA抗體在鼻咽癌組的陽性率高達(dá)69.2%,抗鼻咽癌組VCA-IgM表現(xiàn)為低陽性率,僅有7.7%。陳云等用ELISA法定量檢測血清標(biāo)本中EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA抗體水平,研究顯示,聯(lián)合檢測EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA診斷鼻咽癌,其陽性預(yù)測值達(dá)到99%,但陰性預(yù)測值只有43%。李筱莉等收集300例鼻咽癌患者血清、鼻咽良性疾病91例及可能與EB病毒感染有關(guān)的其他癌癥患者100例,用ELISA法檢測血清VCA-IgA、EA-D-IgG和EA-D-IgA3種抗體發(fā)現(xiàn),聯(lián)合檢測VCA-IgA和EA-D-IgG有互補(bǔ)作用,二者平行聯(lián)合檢測可提高鼻咽癌血清學(xué)診斷及篩查的敏感性,序列聯(lián)合檢測可提高鼻咽癌血清學(xué)篩查的特異性。郭麗萍等聯(lián)合檢測EB病毒VCA-IgA和Rta-IgG抗體用于篩查鼻咽癌高危人群,研究表明從序列測定獲得的雙項(xiàng)陽性血清中篩查到的鼻咽癌比率高于單項(xiàng)VCA-IgA陽性血清。梁惠陶等采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測健康人群EB病毒IgA抗體,檢查得出IgA抗體陽性率隨著年齡的增長而增多。臨床還報道,采用比較新的檢驗(yàn)技術(shù)如用重組的EB病毒抗原對鼻咽癌進(jìn)行血清學(xué)診斷,這些重組抗原有DNA聚合酶、胸苷激酶、核苷酸還原酶及復(fù)制激活劑Zta等。實(shí)驗(yàn)室采用ELISA檢測EBNA1-IgA、EBNA1-IgG和Zta-IgG進(jìn)行鼻咽癌篩查的文獻(xiàn)報道比較多,然而,各臨床文獻(xiàn)報道的檢測分析結(jié)果存在一定差異。胡維維等對EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgA、Zta-IgG、VCA-p18-IgA和VCA-p18-IgG6種酶聯(lián)免疫吸附檢測在血清學(xué)診斷鼻咽癌中的應(yīng)用,探討哪種ELISA組合更為有效,研究表明臨床血清學(xué)診斷鼻咽癌,首選Zta-IgG或EBNA1-IgA;同時檢測兩種ELISA,宜采用Zta-IgG、EBNA1-IgA或Zta-IgG、EBNA1-IgG;三種ELISA同時檢測,可以提高特異度。因此推薦ZtaIgG、EBNA1-IgA、EBNA1-IgG或Zta-IgG、EBNA1-IgG、Zta-IgA3項(xiàng)。易冰等研究用ELISA法檢測血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p18-IgG、Zta-IgA和Zta-IgG等6種抗體水平,比較不同抗體組合時中山籍貫和外省籍貫兩類人群樣本的抗EB病毒抗體譜的差別,結(jié)果顯示中山原住居民感染的EB病毒常常處于激活狀態(tài),而外省籍貫的中山臨時市民感染的EB病毒處于潛伏期時表達(dá)的EBNA1水平更高。程偉民等采用ELISA檢測血清中EBNA1/IgA、EBNA1/IgG和Zta/IgG,結(jié)果顯示EBNA1IgA、EBNA1/IgG和Zta/IgG的敏感度分別為85%、83%和79%;三者組合的敏感度最高,為92%;EBNA1/IgA、EBNA1/IgG和zta/IgG的特異度分別為86%、86%和80%;三者組合的特異度最高,為93%。EBNA1/IgA、EBNA1/IgG和zta/IgG的聯(lián)合應(yīng)用可以評估人群患鼻咽癌的危險度。易翔等用免疫印跡法檢測鼻咽癌病人血清中抗EB病毒Zta-IgG抗體,結(jié)果顯示鼻咽癌組血清Zta-IgG陽性率為91.7%,對照組中10.7%Zta-IgG陽性,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。免疫印跡法檢測鼻咽癌患者血清中Zta-IgG抗體有較高的敏感性和特異性,可以作為鼻咽癌患者診斷篩選的指標(biāo)。沈亞華等對在中山市人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的12991名成人用ELISA法同時檢測血清中的EBNA1-I-gA、EBNA1-IgG、Zta-IgG三種抗體水平,結(jié)果顯示鼻咽癌檢出率分別為76.98/100000,7.698/100000和0/10,低危人群鼻咽癌檢出率最低。ZE-BRA蛋白是調(diào)節(jié)EBV從潛伏狀態(tài)進(jìn)入復(fù)制狀態(tài)的關(guān)鍵。NPC細(xì)胞中ZE-BRA蛋白表達(dá)提示EBV處于活躍的復(fù)制狀態(tài)。鄭裕明等在應(yīng)用ELISA法檢測鼻咽癌新發(fā)病例、鼻咽癌治療后復(fù)診病例、EB病毒VCA/IgA抗體陽性及陰性正常人群中的ZE-BRA/IgG抗體,研究結(jié)果顯示,鼻咽癌新發(fā)病例ZE-BRA/IgG的陽性率為92.7%,顯著高于其他各組(P<0.001),結(jié)果提示ELISA法檢測ZE-BRA/IgG診斷鼻咽癌的特異性較常規(guī)免疫酶法檢測明顯提高;同時亦發(fā)現(xiàn),VCA/IgA抗體陰性人群中,有2%的個體呈現(xiàn)ZE-BRA/IgG抗體陽性,這是否是其體內(nèi)EB病毒抗原表達(dá)形式的差異所致,值得進(jìn)一步研究。有研究者還采用ELISA方法檢測早期基因BRLF1基因編碼的Rta蛋白。ChangY等用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白,發(fā)現(xiàn)異位的Rta蛋白能夠誘導(dǎo)LMP1在上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中表達(dá)。朱文良等應(yīng)用Rta蛋白作為抗原,用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白抗體IgG,靈敏度達(dá)82.12%,特異度為91.78%,結(jié)果表明Rta-IgG具有比較高的靈敏度和特異度,可以用于鼻咽癌的臨床檢測和篩查。蔡永林等用ELISA檢測Rta/IgG、EBNA1/IgA抗體,提示EB病毒Rta/IgG抗體表達(dá)與鼻咽癌分期無關(guān)。2血漿ebv-dna檢測鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA分子水平與腫瘤的分期和臨床進(jìn)展有明顯相關(guān)性,深入的研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者血漿存在著游離于細(xì)胞外的大量的EBV-DNA,并發(fā)現(xiàn)EBV-DNA隨著腫瘤消長的變化而變化,故認(rèn)為血漿EBV-DNA是腫瘤EB病毒裂解釋放到血漿中去。LeungSF等在比較鼻咽癌患者血漿EBV-DNA和VCA-IgA檢出敏感性研究中發(fā)現(xiàn),EBV-DNA檢出敏感性為95%,研究結(jié)果提示鼻咽癌患者血清EBV-DNA的敏感性和特異性均高于VCA-IgA,可用于作為診斷鼻咽癌的重要指標(biāo),與李杰報道相似。張力等采用熒光定量PCR的方法檢測鼻咽癌患者放射治療后血漿EB病毒(EBV)DNA水平,結(jié)果表明,在10例復(fù)發(fā)或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中,6例患者血漿中可檢測到高水平的EBV-DNA,而在臨床緩解組的15例患者中,僅1例患者的血漿中檢測到低濃度的EBV-DNA,并且他們在隨后的隨訪中又發(fā)現(xiàn),疾病復(fù)發(fā)的患者在出現(xiàn)明顯的臨床癥狀的6個月前就已有血漿EBVDNA水平的升高。祝曉芬等應(yīng)用Real-timePCR方法檢測EB病毒DNA含量,100例初治鼻咽癌患者、106例放療后及40例健康對照者,結(jié)果顯示血漿中游離EB病毒DNA在初診鼻咽癌者、放療后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)鼻咽癌者三組檢出的陽性率分別為90.7%、96.5%和100.0%,而健康者的陽性率僅為7.5%,持續(xù)臨床緩解者10%陽性;血漿EB病毒DNA定量檢測對初診鼻咽癌患者的診斷敏感性為97.0%,特異性為92.0%;另有3例持續(xù)臨床緩解而血漿EB病毒DNA水平升高的鼻咽癌患者,在隨后的6個月隨訪中,最終出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,說明血漿EBV-DNA定量檢測是篩選NPC患者的敏感有效方法。TwuCW等對114例鼻咽癌患者血清EBV-DNA進(jìn)行檢測分析,發(fā)現(xiàn)治療前高水平的EBV-DNA比低水平者在4年總生存率和無復(fù)發(fā)生存率上的差異明顯。廖莉婭等分別采用實(shí)時熒光定量PCR法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測34例NPC患者和30例健康體檢者的EBV-DNA和EBVCA-IgA,34例鼻咽癌患者EBV-DNA陽性率為58.82%,EBVCA-IgA陽性率為44.12%,兩者同時陽性為32.35%;30例健康體檢者EBV-DNA陽性率為10%,EBV-CA-IgA陽性率為3.33%,兩者同時陽性為3.33%。結(jié)果提示患者血液白細(xì)胞EBV-DNA作為EB病毒的一種抗原物質(zhì),比EBVCA-IgA更能反映EBV在患者體內(nèi)的實(shí)際情況,更適合在臨床實(shí)驗(yàn)室使用。3樣品