穿破石中黃酮類(lèi)化合物提取分離、提取及鑒定

穿破石中黃酮類(lèi)化合物提取分離、提取及鑒定

破碎石是屬于?？普軐僦参锝Y(jié)構(gòu)的石頭（cudraniakonimet）。錯(cuò)誤的東西含量高，黃酮類(lèi)化合物安全、無(wú)害，在醫(yī)藥、食品加工等方面得到廣泛應(yīng)用。多項(xiàng)研究表明黃酮類(lèi)化合物除具有抗菌、消炎、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用外,在抗自由基和抗癌痛等疾病的治療效果更顯著。1材料和方法1.1材料表面1.1.1df-108s集熱式一浴鍋材料UV-1601紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀),DF-102S集熱式恒溫水浴鍋(鞏義市英峪華儀儀器制造),電子天平,移液管,冷凝回流裝置。1.1.2試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(含結(jié)晶水),95%乙醇(分析純),5%NaNO:,10%A1(NO3)3,4%NaOH等。1.2方法1.2.1提取方法筆者采用有機(jī)溶液提取法,有機(jī)溶液為乙醇溶液。簡(jiǎn)單步驟是:把干燥穿破石根研碎,在回流提取,將提取液過(guò)濾。1.2.2測(cè)量量法用分光光度法測(cè)量,研究表明,此方法操作簡(jiǎn)便、可靠。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品25.00mg(含結(jié)晶水),用30%微熱乙醇溶解,并完全移人50ml容量瓶中,用30%乙醇定容搖勻得濃度為0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。1.2.4加1.2.2回形法準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0、0.5、1.0、2.0、3.0ml分別置于10ml具塞的比試管中,用水稀釋至2.40ml,先加5%NaNO2溶液0.40ml,搖勻,放置6min,然后加10%A1(NO3)3溶液0.40ml,搖勻后放置6min,最后加4%NaOH溶液4.0ml,用水稀釋至10ml刻度,搖勻,放置15min。試劑為空白參比,在510mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程。1.2.5總黃酮含量的測(cè)定總黃酮含量測(cè)定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁一氫氧化鈉比色法精確吸取3份1ml樣液于3支具塞試管中,各加5%NaNO:溶液0.40ml,搖勻,放置6min。加10%A1(NO3)溶液0.40ml,搖勻,放置6min.加4%NaOH溶液4.0ml,加對(duì)應(yīng)濃度乙醇0.4ml,搖勻,放置10~15min。同時(shí)作試劑空白,以試劑空白作對(duì)照,在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,計(jì)算總黃酮含量。提取率(%)=C×V1×V2×100%/M×1000式中C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得出樣品總黃酮的濃度數(shù)值,單位為mg/ml,V1為提取液稀釋的體積,單位為ml;V2為樣液稀釋的體積,單位為ml;M為樣品的質(zhì)量,單位為g。1.2.6單因素考察:單因素對(duì)穿破石總黃酮得率的影響單因素試驗(yàn)分別以不同的乙醇濃度(50%、60%、70%、80%、90%)、料液比(1:2、1:3、1:4、1:5、1:6)、提取溫度(室溫60℃、70℃、90℃、100℃)、提取時(shí)間(1.0h、2.0h、2.5h、3.0h、4.0h)作為單因素,考察各單因素對(duì)穿破石總黃酮得率的影響。1.2.7正交試驗(yàn)正交試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,確定正交設(shè)計(jì)的各變量,以總黃酮得率為考察指標(biāo),通過(guò)正交分析對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化。2結(jié)果與分析2.1標(biāo)準(zhǔn)的蘆丁工作曲線(xiàn)由1.2.4所示方法進(jìn)行測(cè)定,由圖1可得回歸方程:A=5.736C+0.024R2=0.99942.2單因素試驗(yàn)的結(jié)果2.2.1黃酮總量溫度對(duì)黃酮總量的影響以濃度90%,物料比為1:3,回流1小時(shí)。如圖2所示由圖可知穿破石黃酮總量溫度的升高而增加,在溫度升到90℃時(shí)黃酮總量最高,之后會(huì)逐漸降低。2.2.2乙醇濃度對(duì)降低黃酮消耗的影響以溫度為70℃,物料比為1:3,回流1小時(shí)。如圖3所示如圖所示當(dāng)乙醇濃度為90%時(shí),提取的黃酮總量是最高的。2.2.3提取時(shí)間對(duì)黃酮含量的影響以溫度90℃,物液比為1:3,回流1小時(shí)。如圖4所示由圖4可知,2.5個(gè)小時(shí)是最佳的提取時(shí)間,穿破石總黃酮隨著提取時(shí)間的增加而增加。到2.5個(gè)小時(shí)后,再逐漸減少。2.2.4物液比的提取用15克穿破石分別以1:2,1:3,1:4,1:5,1:6的物液比提取。以70℃、70%乙醇熱回流1h。如圖5所示,物液比在1:2時(shí)穿破石黃酮含量最高。2.3熱回流法黃酮的正交試驗(yàn)結(jié)果以表1所示的條件設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn),每組試驗(yàn)以15g原料計(jì),試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。正交試驗(yàn)結(jié)果在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)熱回流法黃酮的主要因素(即物料比、乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),各水平因素見(jiàn)表1,試驗(yàn)結(jié)果如表2。由表2可知,提取溫度、乙醇濃度、提取時(shí)間、物料比、四種因素對(duì)黃酮提取量影響的主次順序?yàn)?物料比﹥乙醇濃﹥提取溫度﹥提取時(shí)間,而最優(yōu)秀的提取條件組合為:物料比1:2,乙醇濃度80%,提取溫度90℃,提取時(shí)間提取溫度90℃,提取時(shí)間。2.3最佳條件的合理性和可靠性在優(yōu)化組合條件下,進(jìn)行了三次平行驗(yàn)證性試驗(yàn),以考察最佳條件的合理性和可靠性,結(jié)果如表3所示。由表3可知,在優(yōu)化條件下,三次測(cè)量結(jié)果非常接近,說(shuō)明該提取工藝穩(wěn)定,適合于提取穿破石黃酮類(lèi)化合物。3乙醇濃度和提取溫度對(duì)黃酮提取率