生物素化紫杉醇合成及人乳腺癌細胞株與紫杉醇耐藥株蛋白質(zhì)學差異分析的開題報告

生物素化紫杉醇合成及人乳腺癌細胞株與紫杉醇耐藥株蛋白質(zhì)學差異分析的開題報告開題報告一、研究背景及意義紫杉醇是目前應(yīng)用最廣泛的抗癌藥物之一，但其藥理作用機制尚未完全闡明。最近的研究表明，生物素化酶能夠?qū)⒆仙即嫁D(zhuǎn)化為紫杉醇生物素，從而增加紫杉醇在細胞中的穩(wěn)定性、生物利用度和抗腫瘤作用。因此，深入了解紫杉醇生物素化轉(zhuǎn)化的分子機制，對于解析紫杉醇抗腫瘤作用的機制、優(yōu)化其抗癌藥效、減少副作用具有重要的理論和應(yīng)用價值。另外，隨著臨床使用紫杉醇時間的推移，出現(xiàn)了紫杉醇耐藥的現(xiàn)象，影響了其抗癌治療效果。因此，研究紫杉醇耐藥的分子機制，是解決其臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的問題的重要途徑。二、研究內(nèi)容本研究將以人乳腺癌細胞株為研究對象，通過基因工程技術(shù)，構(gòu)建紫杉醇生物素化合成酶的表達載體，轉(zhuǎn)化至乳腺癌細胞株中，觀察其對于紫杉醇抗癌作用的影響，并考察其生物化學機制。同時，將采用蛋白質(zhì)組學技術(shù)，比較人乳腺癌細胞株和紫杉醇耐藥株中的差異蛋白質(zhì)，篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)的蛋白質(zhì)，尋找紫杉醇耐藥的分子機制。三、研究方法1.構(gòu)建表達紫杉醇生物素化合成酶的載體，轉(zhuǎn)化至人乳腺癌細胞株中。2.采用CCK-8法，檢測紫杉醇對人乳腺癌細胞株的抑制作用，比較轉(zhuǎn)化后細胞株和未轉(zhuǎn)化的細胞株的敏感性差異。3.利用Westernblot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)化細胞株中生物素化合成酶的表達以及相關(guān)蛋白的表達情況，探究其生物化學機制。4.采用2-DE技術(shù)構(gòu)建蛋白質(zhì)組，比對人乳腺癌細胞株和紫杉醇耐藥株的差異蛋白質(zhì)表達情況。5.利用MALDI-TOF/TOF技術(shù)鑒定篩選出的差異蛋白，分析其生物功能及其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。四、研究預期成果1.構(gòu)建表達紫杉醇生物素化合成酶的載體，并驗證其在人乳腺癌細胞株中的表達。2.獲得紫杉醇抗癌作用在生物素化轉(zhuǎn)化下的新機理。3.篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)之蛋白質(zhì)和相關(guān)分子通路，有望開發(fā)針對紫杉醇耐藥的新靶點。4.對人乳腺癌細胞株的基本生物學特性及分子機制進行了深入了解，為乳腺癌等其他惡性腫瘤的臨床治療提供了新思路。五、研究進度安排第一年：1.構(gòu)建載體并轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞株。2.初步驗證表達紫杉醇生物素化合成酶在細胞中的效果。3.利用Westernblot技術(shù)初步探究與生物素化轉(zhuǎn)化相關(guān)的蛋白質(zhì)表達情況。第二年：1.采用CCK-8法及熒光顯微鏡觀察細胞株對紫杉醇的敏感性結(jié)果。2.利用Westernblot技術(shù)深入研究生物素化轉(zhuǎn)化對于細胞中相關(guān)蛋白質(zhì)的表達調(diào)控情況。第三年：1.采用2-DE技術(shù)比對人乳腺癌細胞株和紫杉醇耐藥株的差異蛋白質(zhì)表達情況，篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)的蛋白質(zhì)。2.利用MALDI-TOF/TOF技術(shù)鑒定篩選出的差異蛋白，并分析其生物功能及其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。六、研究經(jīng)費預算本研究的經(jīng)費預算如下：1.實驗材料費：15萬元2.實驗設(shè)備費：30萬元3.人員費用：50萬元4.圖書資料費：5萬元總計100萬元七、研究團隊本研究團隊由生物化學、細胞生物學、蛋白質(zhì)組