鎖陽水提物andcy對缺氧小鼠物質(zhì)代謝和心腦組織結(jié)構(gòu)的影響

鎖陽水提物andcy對缺氧小鼠物質(zhì)代謝和心腦組織結(jié)構(gòu)的影響

cyboroncyboron，csr）也被稱為cyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncygophylacea的根是完全寄生的種子。分布于甘肅、新疆、青海和內(nèi)蒙古等半荒漠或荒漠地帶。我們的前期實(shí)驗(yàn)證明鎖陽水提物PartⅢ具有良好的抗缺氧能力。本實(shí)驗(yàn)研究鎖陽PartⅢ對缺氧小鼠大腦含水量、腦和心肌組織蛋白含量的影響,并觀察心腦細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動物清潔級BALB/C小白鼠,♂,體重(20±2)g,由蘭州生物制品研究所實(shí)驗(yàn)動物中心提供,飼養(yǎng)于蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)科。1.2真空低壓艙fic公司Vitalab21半自動生化分析儀,荷蘭VitalScientific公司;真空低壓艙由實(shí)驗(yàn)室自行改裝;HP-8453紫外分光光度計(美國惠普公司);IECMICROMAX離心機(jī)(美國ThermoElectron公司);BP210S電子天平(荷蘭賽多利斯有限公司)。1.3藥物和試劑人參皂苷(吉林宏久生物科技股份有限公司,批號041006-Z)?？捡R斯亮藍(lán)G-250,0.1N鹽酸及其余試劑均為國產(chǎn)分析純。1.4最佳水提物的制備Ⅲ的制備:取2kg鎖陽粉碎物按生藥∶水=1∶8(m/v)的比例浸泡30min后煎煮1h,過濾;殘渣繼續(xù)按上法再提取2次,合并3次濾液靜置過夜。上清液減壓干燥后得鎖陽水提物,得率為35.2%。再取上述水提物200g復(fù)溶,其中沉淀部分(PartⅠ)干燥后得率為21.17%。上清部分加至大孔樹脂柱,先用水洗至流出液為無色,再換用95%的乙醇洗脫,分別得到水洗脫物(PartⅡ)和95%的乙醇洗脫物(PartⅢ),得率為別為49.59%和19.77%。本研究的試驗(yàn)用藥為PartⅢ,經(jīng)初步鑒定主要含酚類和少量的皂苷,臨用前用蒸餾水配成15mg/ml的藥液,4℃保存。1.5小鼠急性毒性及生化指標(biāo)檢測BALB/C小鼠40只,分為空白對照組,缺氧模型組,缺氧+鎖陽PartⅢ組和缺氧+人參皂苷組,每組10只。試驗(yàn)用藥和陽性對照藥劑量均為300mg/(kg·d)×7,空白對照組和缺氧模型組給予同體積的蒸餾水。于末次灌胃后1h,將所有小鼠置自制的減壓裝置內(nèi),調(diào)整壓力,在30min內(nèi)將裝置內(nèi)壓力逐步減至0.04MPa(相當(dāng)于海拔7000m),維持6h,完成預(yù)定缺氧時間后將裝置內(nèi)壓力升至正常大氣壓,取出小鼠迅速摘眼球取血,之后斷頭處死取大腦和心臟,洗凈,稱重后加入0～4℃的生理鹽水制成10%組織勻漿進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)的測定?？瞻讓φ战M置常氧室溫低氧裝置附近(相當(dāng)于海拔1520m)。1.6腦水分析用干濕質(zhì)量法測定腦含水量,取左半腦稱重,置50℃烘干至恒重。按公式計算含水量:腦含水量(%)=(濕重量-干重量)/濕重量×100%。1.7測定大腦和心肌的含量用考馬斯亮藍(lán)法測定腦勻漿和心肌勻漿總蛋白含量,結(jié)果以mg/ml表示。1.8心腦病理的mri觀察取缺氧后小鼠心腦,洗凈殘血,中性福爾馬林固定,制作心、腦石蠟切片,常規(guī)HE染色,顯微鏡下觀察心、腦細(xì)胞的病理改變。1.9統(tǒng)計處理各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用xˉ±sxˉ±s表示,組間差異的顯著性用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。2結(jié)果2.1鎖陽氣調(diào)劑對小鼠腦含水量的影響Ⅲ對缺氧小鼠大腦含水量、腦和心肌蛋白含量的影響:由表1可見,急性減壓法模擬高原缺氧可使小鼠腦含水量比空白對照組明顯增加,與缺氧模型組比較,鎖陽PartⅢ處理的小鼠腦含水量比較明顯降低(P<0.01)。同時,與空白對照組相比,用鎖陽PartⅢ處理的小鼠腦組織蛋白含量亦無明顯的變化,但心肌蛋白含量則顯著升高(P<0.01),人參皂苷亦有類似趨勢。見圖1。2.2小鼠腦形態(tài)改善Ⅲ對缺氧小鼠腦組織細(xì)胞形態(tài)的影響:鎖陽PartⅢ處理后可以明顯改善小鼠腦組織細(xì)胞形態(tài),表現(xiàn)為細(xì)胞排列較缺氧模型組緊密,大部分細(xì)胞水腫減輕,核與胞質(zhì)界限較清晰;整個腦組織結(jié)構(gòu)變化不大,結(jié)構(gòu)層次較清楚。2.3小體法制備心肌組織病理學(xué)Ⅲ對缺氧小鼠心肌組織細(xì)胞形態(tài)的影響:鎖陽PartⅢ可以減輕心肌膜血管擴(kuò)張和肌細(xì)胞腫大程度,使細(xì)胞界限變得清晰,心肌纖維排列緊密,紋理較清楚。人參皂苷亦有類似作用。見圖2。3鎖陽培養(yǎng)對小鼠腦含水量及心肌組織蛋白的影響動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),缺氧缺血可致能量代謝障礙,Na+/K+泵功能異常,細(xì)胞內(nèi)外離子平衡失調(diào),鈉水潴留;興奮性氨基酸受體激活,使Na+、Ca2+進(jìn)一步內(nèi)流引起細(xì)胞內(nèi)鈉鈣積聚,造成細(xì)胞源性水腫,嚴(yán)重者導(dǎo)致細(xì)胞破裂。缺氧缺血還可以破壞血腦屏障,血液中的成分滲入腦實(shí)質(zhì),造成血管源性水腫。缺氧缺血后腦組織出現(xiàn)水腫已經(jīng)得到公認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,將小鼠暴露在相當(dāng)于海拔7000m的低壓艙中,小鼠腦含水量較常氧對照組動物顯著增加(P<0.05),說明該模型可誘發(fā)動物出現(xiàn)急性腦水腫,這與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致。用鎖陽PartⅢ處理的小鼠,其腦含水量明顯比單純?nèi)毖踅M降低,說明鎖陽PartⅢ可緩減缺氧狀態(tài)下小鼠腦水腫的程度,對高原缺氧性腦損傷具有一定的保護(hù)作用。同時,我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)小鼠經(jīng)急性模擬高原缺氧暴露后心肌組織蛋白含量無明顯變化,此點(diǎn)與文獻(xiàn)報道的不同。預(yù)先給予鎖陽PartⅢ可顯著增加心肌蛋白的含量,在一定程度上可能會增強(qiáng)心肌功能。人參皂苷也有類似的作用。我們通過制作病理組織切片,用光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),模擬高原低壓缺氧6h,單純?nèi)毖踅M小鼠腦組織和心肌組織都出現(xiàn)了血管擴(kuò)張和組織結(jié)構(gòu)受損,細(xì)胞明顯水腫及空泡化現(xiàn)象嚴(yán)重,細(xì)胞核邊緣化,嚴(yán)重的有細(xì)胞融解,甚至破裂等病理變化。