生殖道慢性感染狀態(tài)下抗精子免疫應(yīng)答機(jī)制的研究

生殖道慢性感染狀態(tài)下抗精子免疫應(yīng)答機(jī)制的研究

女性慢性生殖器官炎是一種常見的婦科疾病。生殖道感染是引起不孕、異位妊娠的重要因素。本研究從免疫調(diào)控的角度,探討女性慢性生殖道炎癥與抗精子抗體(ASAb)的關(guān)系及機(jī)體免疫功能的變化,研究生殖道慢性感染狀態(tài)下抗精子免疫應(yīng)答產(chǎn)生的機(jī)制,為臨床防治抗精子免疫性不孕提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1慢性宮頸炎及/和慢性瞳體檢查2001年9月至2002年2月在本院就診的婦科病人,經(jīng)檢查診斷為慢性宮頸炎或/和慢性盆腔炎,有正常性生活,共50例。對照組10例,從婦科普查人群中選擇已婚并有正常性生活的女性,排除急慢性生殖道炎癥。1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》慢性宮頸炎和慢性盆腔炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。1.3病例選擇及分組1.3.1符合慢性宮頸炎、慢性盆腔炎的診斷,年齡20～45歲,性生活正常,可納入試驗(yàn)病例。1.3.2正常已婚女性,月經(jīng)史正常,婦科檢查無器質(zhì)性病變,排除急慢性生殖道炎癥,年齡20～45歲,可納入對照病例。1.4并發(fā)癥和致病性檢查1.4.1年齡在20歲以下或45歲以上,妊娠、哺乳婦女。1.4.2合并有心血管、肝腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病,精神病患者。1.4.3經(jīng)防癌檢查,發(fā)現(xiàn)有惡性變者。1.4.4不符合納入標(biāo)準(zhǔn)或未能接受本研究的全部檢查項(xiàng)目者。1.5測試指標(biāo)1.5.1宮頸粘液原的檢測包括細(xì)菌、真菌、解脲支原體(UU)與人型支原體(MH)培養(yǎng),沙眼衣原體(CT)檢測。1.5.2asab的測量采用ELISA法測定血清ASAb總Ig測定(德國IBL公司試劑盒)。1.5.3水田疾病采用紅細(xì)胞花環(huán)法測定CD3、CD4和CD8,并計(jì)算CD4/CD8比值(武漢生物研究所試劑盒)。1.5.4宮頸粘液2il-2采用ELISA法測定IL-2(深圳晶美公司試劑盒)。1.6統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS10.0L軟件。計(jì)量資料用χ2檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用t檢驗(yàn),相關(guān)分析用Pearson相關(guān)分析法。2結(jié)果2.1血清asa的陽性率見表1。2.2分離菌株在正合理合合的菌株中,未發(fā)現(xiàn)mh感染以及真菌感染50例慢性生殖道炎癥患者均做了細(xì)菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)、UU、MH培養(yǎng)以及CT的檢測。發(fā)現(xiàn)大腸桿菌2例,糞鏈球菌2例,CT陽性21例,UU陽性6例,CT+UU陽性5例,未發(fā)現(xiàn)MH感染及真菌感染。10例對照組婦女未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌、真菌或UU、MH、CT等,見表2。2.3兩組患者il-2水平分布檢測慢性生殖道炎癥患者中ASAb陽性(I組)與陰性(Ⅱ組)外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分布以及宮頸粘液IL-2水平,比較兩組間差異,并與對照組比較。見表3、4。與Ⅱ組及對照組比較,I組的CD8+顯著下降(P<0.05),而CD4+/CD8+比值升高,有非常顯著性差異(P<0.01)。Ⅱ組與對照組比較,各項(xiàng)數(shù)據(jù)的差異均無顯著性。3討論3.1asab的測定炎癥組ASAb陽性率高于對照組,但因?qū)φ战M樣本數(shù)過少,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著意義。而炎癥組的ASAb濃度均值顯著高于正常對照組(P<0.05)。為了比較不同部位的生殖道炎癥與抗精子免疫的關(guān)系,又把本組病人分成慢性宮頸炎、慢性盆腔炎、慢性宮頸炎兼盆腔炎組三組中,ASAb陽性率及濃度均值兩兩比較差異均無顯著性(P>0.05)。女性慢性生殖道感染可引起ASAb的產(chǎn)生。對女性而言,精子是同種異體抗原。在正常情況下,生殖道粘膜具有免疫清除作用,形成免疫防御,因此,一般不產(chǎn)生ASAb,而感染可導(dǎo)致局部粘膜屏障作用減弱,精子到達(dá)此處后可產(chǎn)生免疫應(yīng)答,出現(xiàn)ASAb。本實(shí)驗(yàn)支持了以往的研究結(jié)論。50例慢性生殖道炎癥患者病程在3個月到10年不等,其中病程在5年以上的患者其血清ASAb檢出陽性率略高,為50%,但與其它組相比差異無顯著性(P>0.05)。正常對照組中僅有1例檢出ASAb陽性,ASAb定量為78U/ml。其中可能的原因是,該婦女血清中非特異性物質(zhì)與反應(yīng)板抗原結(jié)合,故使測得的ASAb值較正常臨界值75U/ml稍高,或可能因?yàn)楝F(xiàn)使用的試劑盒主要檢測精子膜抗原所致的抗體,而精液中有多種抗原物質(zhì),復(fù)雜的精子抗原刺激機(jī)體可產(chǎn)生復(fù)雜的抗體,而直接影響生育力的抗體又僅是由精子的某些特異抗原所致。正常生育組產(chǎn)生的少量抗體可能并不影響其生育力。3.2厭氧菌培養(yǎng)、生殖感染檢測引起女性慢性生殖道炎癥的病原體較復(fù)雜,細(xì)菌較多,尤其是各種球菌,包括葡萄球菌,其次是大腸桿菌、陰溝桿菌等。它常和厭氧菌一道引起盆腔混合感染。在本實(shí)驗(yàn)中,大部分炎癥患者并未檢測到細(xì)菌培養(yǎng)的陽性結(jié)果,由于本院未開展厭氧菌培養(yǎng)和生殖道病毒檢測,故這些患者也應(yīng)考慮到有厭氧菌或病毒存在的可能。近年來,CT、UU所引起的泌尿生殖道感染在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢,慢性盆腔炎和/或慢性宮頸炎患者中,CT和UU已成為突出的致病病原體。其感染始發(fā)于下生殖道,沿粘膜上行,累及子宮、輸卵管及盆腔臟器,導(dǎo)致輸卵管炎癥、粘連阻塞,最終導(dǎo)致不孕。由于沙眼衣原體和解脲支原體的致病特點(diǎn),其感染常為亞臨床和隱匿性感染,癥狀較輕,臨床表現(xiàn)不典型,常無急性過程,不能及時(shí)診治,一旦出現(xiàn)癥狀多為慢性炎癥,因此治療上應(yīng)予重視。3.3局部感染與精子膜原原asab的關(guān)系CT或UU感染與ASAb呈明顯正關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.394(P=0.002,P<0.01)。其機(jī)制可能是:CT、UU感染可引起生殖道炎性疾病,影響生殖道局部的免疫防御,破壞生殖道粘膜完整性。也有人認(rèn)為,感染使具有免疫作用的細(xì)胞游離進(jìn)入生殖道與精子抗原接觸后產(chǎn)生ASAb,且感染可使局部非特異性免疫加強(qiáng),或是可能與存在同精子膜抗原有交叉反應(yīng)的微生物抗體有關(guān)。由于女性生殖道感染,尤其是CT、UU感染可能導(dǎo)致ASAb的產(chǎn)生,對于ASAb陽性所致不孕患者,首先應(yīng)檢查是否有生殖道的炎癥或損傷尚未治愈,尤其是否存在CT、UU感染,并進(jìn)行治療。3.4cd8+細(xì)胞炎癥婦女抗精子抗體陽性組(I組)與炎癥婦女抗精子抗體陰性組(Ⅱ組)、正常對照組比較:CD8+細(xì)胞減少,CD4+/CD8+比值升高,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著差異(P<0.01)。目前已知CD8+細(xì)胞在機(jī)體的免疫應(yīng)答過程中起著負(fù)調(diào)節(jié)作用,它既可抑制由B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫,也可抑制CD4+細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)性超敏反應(yīng)及增殖反應(yīng)。本研究提示CD8+細(xì)胞數(shù)量的減少可能在一定程度上解除了對機(jī)體體液免疫的抑制且增加了Th細(xì)胞的活性,CD8+細(xì)胞明顯減少和CD4+/CD8+比值明顯增加是此類患者發(fā)病的重要機(jī)制。3.5正相關(guān)因素炎癥組ASAb陽性患者宮頸粘液中IL-2水平顯著高于ASAb陰性患者及正常對照組(P<0.01)。ASAb陽性與IL-2的相關(guān)系數(shù)為0.577,P=0.0000,P<0.01,呈顯著正相關(guān)。人體內(nèi)CD4+的Th細(xì)胞可分為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞,IL-2是活化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子,IL-2的生物學(xué)活性極為重要,對機(jī)體IL-2水平的檢測是評估機(jī)體免疫活化狀態(tài)的一個敏感指標(biāo)。由此推測,精子抗原易于激活A(yù)SAb陽性患者體內(nèi)的Th淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-2等細(xì)胞因子,它們不僅可抑制Ts細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能,而且可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞對精子抗原的有效遞呈及Th細(xì)胞對精子抗原的雙識別,進(jìn)而激活B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生ASAb,ASAb反過來又可協(xié)同精子抗原刺激并激活Th細(xì)胞產(chǎn)生IL-2等因子,兩者形成正反饋,最終加重了對精子抗原的免疫病理反應(yīng)。3.6炎癥與asab3.6.1炎癥損傷生殖道粘膜,使精子抗原容易進(jìn)入體內(nèi)。3.6.2炎癥使大量的炎癥細(xì)胞,包括單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞聚集于生殖道粘膜,容易被精子抗原致敏。本文結(jié)果支持這一理論,慢性炎癥組患者外周血中CD4+升高,CD8+減少,CD4+/CD8+升高,宮頸粘液中IL-2升高,最后導(dǎo)致ASAb水平升高。3.6.3炎癥時(shí)微生物抗原與精子抗原整合,成為復(fù)合抗原,然后誘發(fā)抗復(fù)合抗原的抗體。3.6.4炎癥時(shí),致病微生物蛋白與人體內(nèi)蛋白可能有部分同源性,因此體內(nèi)產(chǎn)生抗微生物抗體時(shí),可與人精子抗原交叉,發(fā)生免疫反應(yīng)。女性慢性內(nèi)生殖器炎癥(宮頸炎或/和盆腔炎)患者血清ASAb濃度均值顯著高于