野菊花總黃酮對宮頸炎模型大鼠作用機(jī)制的研究

野菊花總黃酮對宮頸炎模型大鼠作用機(jī)制的研究

野生菊花是薔薇科植物野菊的干燥枝條。具有清熱解毒、清火平肝的功效。它可以用來治療傷口、腫脹、目紅、腫脹和頭痛。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,野菊花主要含有黃酮、揮發(fā)油、萜類等成分,具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛等功效。有研究報道,野菊花治療宮頸炎的總有效率為90.7%,其抗炎作用的有效成分為野菊花黃酮類化合物。為初步探討野菊花總黃酮治療宮頸炎的藥理學(xué)作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),本文觀察了宮頸炎模型大鼠用野菊花總黃酮治療后白介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化,現(xiàn)報道如下。1材料和方法1.1實驗材料1.1.1藥物與試劑野菊花。內(nèi)容2.健康SD大鼠(雌性未孕)60只[動物許可證號:SYXK(鄂)2010-0057],體重180g~200g,購于科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。1.1.2藥物與試劑野菊花購自武漢同仁堂藥店,經(jīng)鑒定為菊科植物野菊的頭狀花序;納米銀抗菌凝膠(豫食藥監(jiān)械生產(chǎn)許可20100173號);苯酚膠漿(自制,取苯酚5g和阿拉伯樹膠15g,加蒸餾水20mL使溶解成膠漿,室溫保存)。IL-1β、TNF-α藥盒均購自北京華英生物技術(shù)研究所。1.1.3實驗設(shè)備GC-911-γ放射免疫計數(shù)器(中國科技大學(xué)實業(yè)總公司),BP211D型電子天平(德國Sartorius公司)。1.2實驗方法1.2.1膠漿的制備取1kg野菊花,用15倍量50%乙醇提取3次,每次2h,合并提取液并減壓回收溶劑,得黃綠色粉末(測得總黃酮含量為65%),加入阿拉伯樹膠15g,加蒸餾水20mL溶解,配制成含生藥為15g/kg、30g/kg、60g/kg(分別為人臨床給藥有效劑量的5、10、20倍)的膠漿,備用。納米銀抗菌凝膠用阿拉伯樹膠、蒸餾水配制成膠漿,備用。1.2.2大鼠陰道初始模型模型的制備60只SD大鼠常規(guī)飼養(yǎng)7d后,給藥前稱體質(zhì)量,隨機(jī)選取10只大鼠作為正常組,除正常組外其余大鼠均用灌胃針頭經(jīng)陰道注入0.2mL苯酚膠漿造模,并予自制醫(yī)用無菌棉堵塞陰道口,1次/3d,連續(xù)5次。第4次后若大鼠陰道口出現(xiàn)紅腫、充血或有膿性物流出則認(rèn)為模型復(fù)制成功。繼續(xù)造模1次,造模成功后第3天50只大鼠按體重隨機(jī)分為模型組,野菊花總黃酮低、中、高劑量組(15g/kg、30g/kg、75g/kg),納米銀抗菌凝膠組(30g/kg)5組,每組10只。除正常組、模型組外,其余各組動物用1mL注射器吸取相應(yīng)藥液(0.1mL/200g)注入陰道深處,每天2次。正常組、模型組予以等量基質(zhì)。每天觀察記錄外陰變化,連續(xù)給藥12d后處死。取出子宮組織,剔除子宮上的脂肪和系膜,取宮頸(子宮陰道部開口至雙子宮分叉處)稱重,并計算臟器指數(shù)。1.3統(tǒng)計方法結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示,組間比較采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗。2結(jié)果2.1色黏稠混合物模型組動物大多數(shù)陰道及宮頸口有黃色或白色的黏稠分泌物,少數(shù)出血。經(jīng)野菊花總黃酮和納米銀抗菌凝膠治療后,多數(shù)動物陰道及宮頸口潔凈,少數(shù)有少量白色分泌物。2.2各組患者頸臟器指數(shù)比較結(jié)果見表1。由表1可以看出,與正常組比較,模型組宮頸臟器指數(shù)明顯升高;與模型組比較,野菊花總黃酮高、中、低劑量組及納米銀抗菌凝膠組宮頸臟器指數(shù)明顯降低(P<0.05)。說明野菊花總黃酮可以降低大鼠宮頸臟器指數(shù)。2.3野菊花總黃酮對大鼠血清中il-1、pge2和tnf-水平的影響與正常組比較,模型組IL-1β、PGE2和TNF-α含量明顯升高;與模型組比較,野菊花總黃酮各劑量組與納米銀抗菌凝膠組IL-1β、PGE2和TNF-α水平明顯下降(P<0.05),提示野菊花總黃酮能降低宮頸炎模型大鼠血清中IL-1β、PGE2、TNF-α水平。結(jié)果見表2。3宮頸炎模型大鼠血清中il-1、pge2和tnf-表達(dá)的互動關(guān)系宮頸炎是婦科常見病,臨床病理檢查可見病變處大量炎細(xì)胞浸潤及炎性充血、水腫,甚至出現(xiàn)黏膜潰瘍。本文宮頸炎模型大鼠病理學(xué)檢查可見陰道、宮頸黏膜下有大量炎細(xì)胞浸潤、水腫、充血,少數(shù)黏膜出現(xiàn)潰瘍,提示大鼠宮頸炎模型復(fù)制成功。實驗中,模型動物體重均減輕,可能與炎癥致大鼠進(jìn)食量減少等因素有關(guān)。藥理學(xué)研究表明,炎癥的發(fā)生和免疫反應(yīng)具有相關(guān)性。其中IL-1β是重要的炎癥介質(zhì),是前炎癥網(wǎng)鏈中的一級細(xì)胞因子;TNF-α是啟動炎癥的重要細(xì)胞因子,在炎癥反應(yīng)中起核心作用,其持續(xù)升高會導(dǎo)致系列生理病理改變,IL-1β和TNF-α等一起構(gòu)成炎癥介質(zhì)網(wǎng);PGE2是體內(nèi)產(chǎn)生的前列腺素物質(zhì)中的一種,在炎癥初期急劇升高可抑制巨噬細(xì)胞的活性、氧自由基的產(chǎn)生,促進(jìn)腫瘤壞死因子(TNF-α)mRNA表達(dá)及抑制各種感染相關(guān)因子的反應(yīng),從而下調(diào)免疫反應(yīng)。本實驗結(jié)果表明,宮頸炎模型大鼠血清中的IL-1β、PGE2和TNF-α的水平都較正常組有顯著性升高(P<0.05),提示模型大鼠有炎癥或損傷產(chǎn)生,表明其免疫系統(tǒng)受到抑制。各給藥組大鼠經(jīng)過治療后,測得血清中的IL-1β、PGE2和TNF-α含量與模型組大鼠相比明顯降低(P<0.05),提示在宮頸炎的發(fā)生發(fā)展中,外用野菊花總黃酮可減少炎癥的發(fā)生,其機(jī)理可能是通過抑制部分炎