DB34T4625-2023石榴脫毒苗木繁育技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB61安 徽 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB34/T4625—2023石榴脫毒苗木繁育技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsforvirus-eliminatedtissuecultureseedlingpropagationofpomegranate20232023100720231107安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前 言GB/T《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由安徽中以農(nóng)業(yè)科技有限公司提出。本文件由安徽省林業(yè)局歸口。石榴脫毒苗木繁育技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于果用、觀賞石榴品種的脫毒苗木繁育。（GB6000主要造林樹(shù)種苗木質(zhì)量分級(jí)GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則LY/T1893石榴苗木培育技術(shù)規(guī)程DB34/T3410石榴生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1外植體explants植物組織培養(yǎng)中作為離體培養(yǎng)材料的器官或組織的片段。3.2石榴組培tissuecultureofpomegranates利用石榴莖尖等組織作為外植體，在無(wú)菌條件下通過(guò)人工培育出完整植株的過(guò)程。3.3莖尖脫毒virus-eliminatedofplantshoottip采用莖尖接種的離體培養(yǎng)方式，達(dá)到脫除植物病毒的目的。3.4褐化browning4環(huán)境要求養(yǎng)室需要嚴(yán)格無(wú)菌，所處環(huán)境要求具備可以自動(dòng)殺菌、控溫、控光等條件。準(zhǔn)備室用于藥品和培養(yǎng)基配置、器具洗滌及滅菌等，面積≥15m2，溫度為20℃～28℃。緩沖室用于室外與接種室或培養(yǎng)室的隔離緩沖區(qū)間，應(yīng)具備換衣區(qū)、風(fēng)淋區(qū)，面積≥2m2。接種室單間接種室面積≥10m2，高度≤3m；接種室要求嚴(yán)格無(wú)菌，應(yīng)具備超凈工作臺(tái)，室內(nèi)應(yīng)吊裝紫外1m70W·cm-2；2d～3d1，1～2121℃～2650%～70%。培養(yǎng)室用于組培苗的培養(yǎng)，面積≤50m2，方便隔離和消殺；培養(yǎng)室要求嚴(yán)格無(wú)菌，應(yīng)具備培養(yǎng)架，室內(nèi)1m70W·cm-2；1月～2月進(jìn)行1162000Lux～5000Lux；暗培養(yǎng)8h，22℃～26℃。煉苗室22℃～2850%～70%1000Lux～5000。4.6移栽溫室應(yīng)具有遮光設(shè)施，遮陽(yáng)率25%～50%、溫度15℃～25℃、相對(duì)濕度50%～70%、自然光照，光照過(guò)于強(qiáng)烈時(shí)采取遮光措施。5組培技術(shù)組培技術(shù)路線：外植體選取→莖尖接種→擴(kuò)繁培養(yǎng)→生根培養(yǎng)→病毒檢測(cè)→煉苗→移栽。5d～7d。WPM6-BAIBAa)莖尖接種培養(yǎng)基：WPM+0.4mg·L-1～0.8mg·L-16-BA+6.0g·L-1瓊脂+25.0g·L-1蔗糖+0.6g·L-1活性炭；b)WPM+0.4mg·L-1～0.6mg·L-16-BA+6.0g·L-1+25.0g·L-1蔗糖+0.2g·L-1c)WPM+0.5mg·L-1IBA+6.0g·L-125.0g·L-1接種1.0cm～2.0cm0.10%HgCl20.10mm～0.15mmd～40d。擴(kuò)繁用組培苗作為外植體，切去增生愈傷后，接種于擴(kuò)繁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25d～35d。生根1.0cm～1.5cm0.25cm～0.35cm，培養(yǎng)30d～40d。煉苗選取根長(zhǎng)0.6cm～0.8cm1000Lux～2000Lux1d～2d3000Lux～5000Lux2d～3d。移栽移栽32（草℃，相對(duì)濕度按照GB/T8321（所有部分）和LY/T1893的規(guī)定執(zhí)行。按照DB34/T3410的規(guī)定執(zhí)行。6病毒檢測(cè)如下：——石榴花葉病毒（PoMv,Pomegranatemosaicvirus）；——李壞死環(huán)斑病毒石榴花葉株系（PNRSV,Prunusnecroticringspotvirus,pomegranatemosaicstrain）。采用隨機(jī)取樣法，抽取移栽苗木進(jìn)行病毒檢測(cè)。以1千株為基數(shù)（＜1千株的，以1千株計(jì)算），1（含1萬(wàn)株1101千株增檢23～66.2.2出圃苗木抽樣采用隨機(jī)取樣法，抽取出圃苗木進(jìn)行病毒檢測(cè)。以1萬(wàn)株為基數(shù)（＜1萬(wàn)株的，以1萬(wàn)株計(jì)算），10萬(wàn)株內(nèi)（含10萬(wàn)株），每增加1萬(wàn)株增檢5株，≥10萬(wàn)株，每增加1萬(wàn)株增檢2株。6.3檢測(cè)方法推薦使用反轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)法（RT-PCR），選用試劑盒進(jìn)行RNA提取及RT-PCR檢測(cè)。推薦引物見(jiàn)表1。表1推薦RT-PCR法檢測(cè)病毒對(duì)象及引物序列檢測(cè)病毒名稱推薦引物序列石榴花葉病毒（PoMv）3′-GCATAGTGCTTCCGTTCAC5′-TGCAGAATTACTGCCCATAGAAAC李壞死環(huán)斑病毒石榴花葉株系（PNRSV）3′-CTGTACCACACTGAAAATATATGTTATCAAG5′-CTTGATAACATATTTTCAGTGTCCATACAG-80移栽苗移栽苗木檢測(cè)，其帶有檢測(cè)對(duì)象的病毒株允許率≤0.1%。出圃苗出圃苗木檢測(cè)，其帶有檢測(cè)對(duì)象的病毒株允許率＜0.3%。7質(zhì)量要求按照GB6000的規(guī)定執(zhí)行。按照GB6000的規(guī)定執(zhí)行。量要求見(jiàn)表2。7.