豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定的開題報(bào)告

豬流行性腹瀉病毒S1蛋白親和肽的篩選與鑒定的開題報(bào)告一、研究背景豬流行性腹瀉病毒（PorcineEpidemicDiarrheaVirus，PEDV）是一種對(duì)豬的腸道粘膜產(chǎn)生廣泛破壞的病毒。自2010年起，PEDV在世界范圍內(nèi)爆發(fā)了多次疫情，導(dǎo)致了豬肉產(chǎn)業(yè)的重大損失。目前，豬流行性腹瀉病毒疫苗的研制還沒(méi)有得到實(shí)質(zhì)性突破，因此尋找PEDV發(fā)生的分子機(jī)理和有效治療方法是一項(xiàng)重要的研究工作。豬流行性腹瀉病毒主要通過(guò)口鼻路傳播，其S1蛋白是PEDV進(jìn)入宿主細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)蛋白。因此，研究S1蛋白的功能和與宿主細(xì)胞的相互作用關(guān)系將有助于闡明PEDV的病理生理機(jī)制，為研究PEDV的預(yù)防和治療提供新的思路。二、研究?jī)?nèi)容本研究將通過(guò)親和肽技術(shù)篩選和鑒定豬流行性腹瀉病毒S1蛋白的結(jié)構(gòu)域，并探究其在PEDV的感染和復(fù)制中的作用。具體研究步驟如下：1.設(shè)計(jì)并合成一系列可能與PEDVS1蛋白結(jié)合的親和肽；2.采用質(zhì)粒表達(dá)酵母系統(tǒng)表達(dá)并純化目標(biāo)蛋白；3.通過(guò)ELISA方法篩選具有高親和力的肽，并進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)（Westernblot）以驗(yàn)證其親和性；4.通過(guò)對(duì)S1蛋白進(jìn)行突變，評(píng)估親和肽與S1蛋白之間相互作用的位置和機(jī)制；5.探究親和肽與S1蛋白之間的相互作用對(duì)PEDV感染和復(fù)制的影響。三、研究意義本研究的主要意義如下：1.通過(guò)親和肽技術(shù)篩選和鑒定PEDVS1蛋白的結(jié)構(gòu)域，為闡明PEDV分子機(jī)制和疫苗研制提供新思路；2.揭示親和肽與S1蛋白之間的相互作用關(guān)系，為開發(fā)PEDV的抗病毒藥物提供新理論支持；3.提高科學(xué)家們對(duì)豬流行性腹瀉病毒的認(rèn)識(shí)，為控制和治療這種病毒病提供更多的科學(xué)依據(jù)。四、研究方法1.合成親和肽：根據(jù)PEDVS1蛋白序列設(shè)計(jì)親和肽并進(jìn)行化學(xué)合成；2.質(zhì)粒表達(dá)酵母系統(tǒng)：將目標(biāo)蛋白編碼序列克隆到酵母表達(dá)載體上，通過(guò)酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目標(biāo)蛋白；3.ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）：用于篩選具有高親和力的親和肽；4.蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）：用于驗(yàn)證親和肽與S1蛋白之間的相互作用；5.突變分析：通過(guò)對(duì)S1蛋白進(jìn)行突變，評(píng)估親和肽與S1蛋白之間相互作用的位置和機(jī)制；6.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：探究親和肽與S1蛋白之間的相互作用對(duì)PEDV感染和復(fù)制的影響。五、研究進(jìn)度本研究的預(yù)計(jì)完成時(shí)間為12個(gè)月，其中各項(xiàng)工作的進(jìn)度如下：1.親和肽的設(shè)計(jì)和合成：2個(gè)月；2.酵母表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建和蛋白純化：4個(gè)月；3.ELISA和Westernblot實(shí)驗(yàn)：3個(gè)月；4.突變分析：1個(gè)月；5.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：2個(gè)月。六、參考文獻(xiàn)1.Sun,R.,Qiao,S.,&Yin,Y.(2016).StructuralandfunctionalanalysesofporcineepidemicdiarrheavirusS1protein.VirolSin,31(1),7-15.2.Hou,Y.L.,Zhao,T.Y.,Yu,J.Y.,Zhou,Y.J.,Su,J.,Qin,G.M.,etal.(2017).Structuralcharacterizationofthereceptor-bindingdomainofporcineepidemicdiarrheavirusspikeprotein.byusingabacteriallyexpressedprotein.JVirol,91(17),e00361-00317.3.Sundberg,E.J.(2008).Identifyi