致病菌的檢驗(yàn)革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌

第14章革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌產(chǎn)芽胞細(xì)菌是一群差異很大的細(xì)菌，本章僅介紹獸醫(yī)上具有重要意義的芽胞桿菌科(Bacillaceae),目前主要包括6個(gè)屬,與獸醫(yī)有關(guān)的是屬Ⅰ和Ⅲ。

屬Ⅰ：芽胞桿菌屬(Bacillus)

屬Ⅱ：芽胞乳桿菌屬(Sporolactobacillus)

屬Ⅲ：梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium),也稱(chēng)梭菌屬

屬Ⅳ：脫硫臘腸樣芽胞桿菌屬(Desulfotomaculum)

屬Ⅴ：芽胞八疊球菌屬(Sporocarina)

屬Ⅵ：顫螺菌屬(Oscillospira)1精選ppt第一節(jié)芽胞桿菌屬〔Bacillus〕一群需氧、能產(chǎn)芽胞的革蘭氏陽(yáng)性大桿菌。共40多種，其中對(duì)人畜致病的較少，僅炭疽芽胞桿菌(Bacillusanthracis)具強(qiáng)烈致病性，侵害草食動(dòng)物及人，引起動(dòng)物和人類(lèi)炭疽病。類(lèi)炭疽桿菌(形態(tài)與炭疽桿菌相似)是實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的污染菌，偶爾也能致病。蠟狀芽胞桿菌(S.cereus)的某些菌株可產(chǎn)腸毒素，引致食物中毒；其他多為腐生菌，主要存在于土壤、水和灰塵中，如枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。本節(jié)重點(diǎn)介紹炭疽芽胞桿菌。2精選ppt炭疽芽胞桿菌〔B.anthracis〕該菌俗稱(chēng)炭疽桿菌，人畜共患病原體，在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)上都相當(dāng)重要，是引起人類(lèi)、各種家畜和野生動(dòng)物炭疽〔Anthrax〕的病原。3精選pptG+大桿菌，長(zhǎng)而粗大，菌體平直，兩端平截。長(zhǎng)3.0~8.0μm，寬1.0~1.5μm；無(wú)鞭毛。在組織和血液中單在或短鏈狀，培養(yǎng)后形成竹節(jié)狀長(zhǎng)鏈。該菌在組織或含血液培養(yǎng)基中可形成莢膜。有氧條件下形成芽孢，位于菌體中央，不膨出菌體。無(wú)鞭毛。一、形態(tài)及染色特性4精選ppt體內(nèi)外培養(yǎng)有較大形態(tài)差異?！?〕體內(nèi)〔即病料中，如血液、組織〕形態(tài)：①單在或短鏈狀(一般約2~5個(gè))，似竹節(jié)狀；②形成莢膜；不形成芽胞；③相連的菌端平截或微凹，游離端鈍圓，本菌屬的其他細(xì)菌接頭鈍圓，如蠟狀芽胞桿菌。5精選ppt〔2〕體外〔培養(yǎng)基〕形態(tài)：①長(zhǎng)鏈狀〔幾十或上百個(gè)〕；②形成橢圓形芽胞，位于菌體中央或近中央，直徑小于菌體；③普通培養(yǎng)基上不形成莢膜。一、形態(tài)及染色特性6精選ppt〔3〕炭疽桿菌特征形態(tài)：①慢性局部炭疽病料:菌體形態(tài)常不典型，呈細(xì)長(zhǎng)彎曲或捻轉(zhuǎn)的桿狀；②血瓊脂、血清瓊脂或碳酸氫鈉瓊脂上，10~20%CO2條件下可形成莢膜；③病料腐敗后，碳疽芽孢桿菌菌體分解，但莢膜抗腐敗能力較強(qiáng)，莢膜仍可殘留，稱(chēng)為“菌蛻〞。一、形態(tài)及染色特性7精選ppt二、培養(yǎng)特性1.需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度30-37℃，pH7.2-7.6，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。強(qiáng)毒株形成灰白色不透明、大而扁平、外表枯燥；無(wú)毒或弱毒株形成稍小而隆起、外表較為光滑濕潤(rùn)、邊緣比較整齊的光滑型菌落。

強(qiáng)毒株菌落8精選ppt2.血瓊脂：一般不溶血，個(gè)別菌株輕微溶血；而該屬其他成員多有明顯溶血；3.液體肉湯培養(yǎng)基：24h呈絮狀沉淀生長(zhǎng)，上清透明清朗，不形成菌膜和菌環(huán)；9精選ppt4.明膠穿刺培養(yǎng)，呈倒松樹(shù)狀，外表液化呈漏斗狀。明膠穿刺培養(yǎng)10精選ppt5.在含0.5IU/ml青霉素的培養(yǎng)基中，可形成串珠反響，與其它需氧芽孢桿菌區(qū)別。當(dāng)青霉素加至10IU/mL時(shí)，炭疽桿菌生長(zhǎng)受抑，不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，而該屬其他細(xì)菌一般不被抑制。串珠反響：在含青霉素0.5IU/ml的培養(yǎng)基中，幼齡炭疽桿菌因細(xì)胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生質(zhì)體相互連接成串。11精選ppt三、生化特性

生化試驗(yàn)不是炭疽桿菌的主要鑒定工程?？闪私庖韵聝?nèi)容：分解葡萄糖，V.P陽(yáng)性，復(fù)原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚、H2S，H2O2酶陽(yáng)性。12精選ppt四、抵抗力

1、繁殖體：抵抗力不強(qiáng)，同一般無(wú)芽孢桿菌。常用消毒劑均能于短時(shí)間內(nèi)將其殺死。2、芽胞體：抵抗力非常強(qiáng)，對(duì)熱、枯燥等具有較強(qiáng)的抵抗力；室溫枯燥可存活十年，枯燥背光處可存活40年以上。在動(dòng)物皮毛上能活數(shù)年，混入泥土中可存活數(shù)年至數(shù)十年，每到春夏時(shí)期地面長(zhǎng)出青草時(shí)，可將泥中的芽胞帶至地面，牛羊食入而受感染。3、牧場(chǎng)一旦被芽胞感染，傳染性可保持20-30年。煮沸1h或干熱140℃3h可殺滅芽孢。炭疽桿菌的芽胞對(duì)碘敏感，1:2500碘液10min即可殺死芽胞。13精選ppt1.結(jié)構(gòu)抗原(1)莢膜抗原：多肽，僅見(jiàn)于有毒菌株，與毒力和抗吞噬有關(guān)。(2)菌體抗原：多糖，與細(xì)菌毒力無(wú)關(guān)。性質(zhì)穩(wěn)定，加熱煮沸甚至高壓蒸汽處理抗原性不被破壞。在病畜皮毛或腐敗臟器中經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間煮沸仍能與特異性抗體反響形成環(huán)狀沉淀，稱(chēng)為Ascoli反響。(3)芽胞抗原：由芽胞的外膜和皮質(zhì)組成，具免疫原性。2.保護(hù)性抗原〔PA〕是炭疽毒素〔PA、LF、EF〕的組成成分之一，具有免疫原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。五、抗原結(jié)構(gòu)14精選ppt六、致病性動(dòng)物吃─→含本菌芽胞的飼料或青草─→腸出芽增殖→血→敗血癥，脾腫大發(fā)黑→炭疽(病程短而急，數(shù)日死亡)。1、易感性〔1〕綿羊、牛、鹿最易感——急性敗血性，尸僵不全、血凝不良、天然孔出血，臌氣；脾急劇腫脹至3~4倍；

〔2〕馬屬、駱駝、豬、山羊次之——多為慢性局部感染,如咽部；

〔3〕狗、貓及食肉動(dòng)物抵抗力強(qiáng)——多表現(xiàn)腸炭疽；

〔4〕禽類(lèi)通常無(wú)易感性；

〔5〕人類(lèi)：因侵入途徑不同而出現(xiàn)不同病癥。15精選ppt2、毒力因子〔1〕莢膜：炭疽桿菌的莢膜能抵抗宿主吞噬細(xì)胞的吞噬，有利于在機(jī)體內(nèi)生存、繁殖和擴(kuò)散?！?〕炭疽毒素：主要由3種成分構(gòu)成。①水腫因子(edemafactor，EF):脂蛋白

②致死因子(lethalfactor，LF):蛋白質(zhì)

③保護(hù)性抗原(protectiveantigen，PA):一種輔酶。

此3種成分單獨(dú)對(duì)動(dòng)物無(wú)毒性。前2種成分混合注射家兔或豚鼠皮下可致皮膚水腫；后2種混合注射可致肺部出血水腫，并使豚鼠致死；3種混合注射可出現(xiàn)炭疽典型中毒病癥。炭疽毒素主要是增強(qiáng)微血管的通透性，改變血液循環(huán)動(dòng)力學(xué)，血液呈高凝狀態(tài)，引起DIC和感染性休克。16精選ppt3、致病類(lèi)型

可致人畜共患的急性、熱性、敗血性傳染病。所致疾病分皮膚、肺、腸和敗血性炭疽四種。

〔1〕皮膚炭疽：最常見(jiàn)。病菌經(jīng)皮膚小傷口進(jìn)入，經(jīng)12-36h局部出現(xiàn)小癤，繼之形成水泡，膿皰，最后中心形成炭色壞死焦痂，"炭疽"之名由此而得?；颊哂懈邿?、寒戰(zhàn)。輕癥2-3周治愈，重癥開(kāi)展成敗血癥而死亡。

〔2〕肺炭疽：由于吸入炭疽芽胞所致。病初似感冒病癥，進(jìn)而呈嚴(yán)重的支氣管肺炎，痰中帶血并伴有全身中毒等病癥，2-3天內(nèi)可死于中毒性休克。

〔3〕腸炭疽：因食入未煮透的病畜肉制品所致。有連續(xù)性嘔吐和便血，全身中毒病癥嚴(yán)重，2-3天內(nèi)死于毒血癥。17精選ppt七、微生物學(xué)診斷

1、標(biāo)本采集

按不同病型采取標(biāo)本，動(dòng)物尸體僅能割尾、耳或舌尖。一般常取水泡、膿皰內(nèi)容物、焦痂、咯痰、糞及血液、腦脊液等。檢驗(yàn)時(shí)必須注意：〔1〕病料鏡檢時(shí)一般有莢膜，如無(wú)莢膜那么別離培養(yǎng)后接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物再進(jìn)行形態(tài)檢查?！?〕注意與類(lèi)似的細(xì)菌鑒別，如蠟狀芽胞桿菌等?！?〕對(duì)疑似炭疽死亡的家畜嚴(yán)禁剖檢，因其血液不凝，血濺流地面，血中細(xì)菌遇空氣即生成芽胞，芽胞在土壤中可存活數(shù)十年，造成該地區(qū)長(zhǎng)期的疫源。如必須檢驗(yàn)時(shí)，只可取獸耳或尾，密封送檢，死獸焚毀或深埋。18精選ppt2.細(xì)菌學(xué)檢查〔１〕鏡檢：大桿菌，兩端平截，竹節(jié)狀〔２〕別離培養(yǎng)：用普通瓊脂或血瓊脂〔３〕純培養(yǎng):鏡檢、串珠試驗(yàn)、生化試驗(yàn)〔４〕動(dòng)物試驗(yàn)：將檢驗(yàn)材料制成懸液或純培養(yǎng)物給小鼠注射，24-36h小鼠死于敗血癥。19精選ppt3.血清學(xué)檢查抗原檢測(cè)〔１〕Ascoli沉淀反響將病獸皮革或尸體組織切碎，加水煮沸過(guò)濾，取濾液滴加于小管內(nèi)的免疫血清，室溫或37℃放置10min，如見(jiàn)兩液接觸面出現(xiàn)白色沉淀環(huán)即為陽(yáng)性，說(shuō)明濾液中有該菌的多糖抗原。此法可對(duì)腐敗尸體及皮革進(jìn)行追補(bǔ)診斷，但特異性不高，可出現(xiàn)假陽(yáng)性。

20精選ppt3.血清學(xué)檢查

〔２〕間接血凝試驗(yàn)〔３〕協(xié)同凝集試驗(yàn)〔４〕串珠熒光抗體檢查〔５〕瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)抗體檢查比較恢復(fù)期和急性期血清特異性抗體升高情況，確診或流行病學(xué)調(diào)查。21精選ppt1、防─病畜尸體應(yīng)燃燒或深埋于2米以下。毛、革必須消毒處理。對(duì)易感染家畜進(jìn)行Ⅱ號(hào)炭疽芽胞苗、無(wú)毒炭疽芽胞苗預(yù)防接種。對(duì)疫區(qū)牧民、屠宰員、獸醫(yī)和皮毛等加工人員以及接觸牲畜的其他有關(guān)人員，應(yīng)預(yù)防接種人用炭疽減毒活疫苗。2、治─青霉素等抗生素作為首選藥物，必要時(shí)可用特異性高免血清進(jìn)行緊急預(yù)防接種。炭疽痊愈動(dòng)物可獲得堅(jiān)強(qiáng)免疫，再次感染者很少。八、免疫防治22精選ppt第二節(jié)梭菌屬〔Clostridium〕該屬細(xì)菌多數(shù)嚴(yán)格厭氧，革蘭氏染色陽(yáng)性，形成芽孢，芽孢直徑往往比菌體粗，使菌體膨脹成梭狀，但并非梭菌屬的細(xì)菌均為梭狀，如破傷風(fēng)梭菌，芽孢位于菌體頂端，菌體呈鼓槌狀。該屬細(xì)菌能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶，致病性強(qiáng)，包括產(chǎn)氣莢膜梭菌、腐敗梭菌、諾維梭菌、肉毒梭菌和破傷風(fēng)梭菌等。23精選ppt一產(chǎn)氣莢膜梭菌〔Cl.perfringens〕舊名魏氏梭菌，在自然界分布很廣。一定條件下，可引起多種嚴(yán)重疾患，局部組織出現(xiàn)壞死、水腫、產(chǎn)氣。24精選ppt革蘭氏陽(yáng)性粗大梭菌，3-4×1-1.5μm。單獨(dú)或成雙排列，有時(shí)成短鏈。芽胞卵圓形，寬度不比菌體大，位于中央或末端。培養(yǎng)時(shí)芽胞少見(jiàn)，須在無(wú)糖培養(yǎng)基中才能生成芽胞。在膿汁、壞死組織或感染動(dòng)物臟器涂片可見(jiàn)明顯莢膜，無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。

無(wú)芽孢有芽孢有莢膜1、形態(tài)及染色特征

25精選ppt厭氧程度不如破傷風(fēng)梭菌要求高。

(1)血液瓊脂平板:菌落較大、灰白色、不透明，邊緣呈鋸齒狀，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)是θ毒素的作用，而外環(huán)不完全溶血是a毒素所致。

(2)皰肉培養(yǎng)基:肉渣不被消化，有時(shí)呈肉紅色。2、培養(yǎng)特性26精選ppt(3)牛乳培養(yǎng)基:分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時(shí)生成大量氣體，將凝固的酪蛋白沖成海棉狀碎塊。管內(nèi)氣體常將覆蓋在液體上的凡士林層向上推擠，這種現(xiàn)象稱(chēng)為“暴烈發(fā)酵〞，是本菌的特點(diǎn)之一。2、培養(yǎng)特性27精選ppt血平板上，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)完全溶血，外環(huán)不完全溶血。28精選ppt3、生化特性

能分解多種糖類(lèi)，發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。分解水楊苷不穩(wěn)定，不發(fā)酵甘露糖;能液化明膠，復(fù)原硝酸鹽，產(chǎn)生硫化氫；不產(chǎn)生吲哚，不能消化已凝固的蛋白質(zhì)和血清。29精選ppt

產(chǎn)氣莢膜梭菌既能產(chǎn)生強(qiáng)烈的外毒素，又有多種侵襲性酶，并有莢膜，構(gòu)成其強(qiáng)大的侵襲力，引起感染性疾病。毒素的毒性雖不如肉毒毒素和破傷風(fēng)毒素強(qiáng)，但種類(lèi)多，有12種外毒素(αβγδεηθικλμν)和具有毒性作用的多種侵襲性酶(卵磷脂酶、纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、膠原酶和DNA酶)，構(gòu)成強(qiáng)大的侵襲力。在各種毒素和酶中，以α毒素最為重要，α毒素是一種卵磷脂酶，能分解卵磷脂，損傷多種細(xì)胞的細(xì)胞膜，引起溶血、組織壞死，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，使血管通透性增高，造成水腫。

θ毒素有溶血和破壞白細(xì)胞的作用，膠原酶能分解肌肉和皮下的膠原組織，使組織崩解，透明質(zhì)酸酶能分解細(xì)胞間質(zhì)透明質(zhì)酸，有利于病變擴(kuò)散。4、致病因子與致病性

30精選ppt本菌能由消化道或創(chuàng)傷侵入機(jī)體內(nèi)，引起人類(lèi)和動(dòng)物的多種疾病，其中最重要的是氣性壞疽。根據(jù)細(xì)菌產(chǎn)生外毒素的種類(lèi)差異，可將產(chǎn)氣莢膜梭菌分成A、B、C、D、E、F6個(gè)型。A型：人氣性壞疽和食物中毒；B型：羔羊痢疾；C型：綿羊猝死，人壞死性腸炎D型：牛腸毒血癥；E型：犢牛、羔羊腸毒血癥。31精選ppt(1)直接涂片鏡檢：G+大桿菌，并有莢膜;(2)別離培養(yǎng)：接種血平板，有雙層溶血環(huán);(3)純培養(yǎng)：引起牛奶暴烈發(fā)酵;(4)動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠、家兔或鴿，出現(xiàn)“泡沫肝〞;(5)腸毒素檢查：取回腸內(nèi)容物，加適量滅菌生理鹽水稀釋?zhuān)?jīng)離心沉淀后取上清液分成兩份，一份不加熱，一份加熱，分別靜脈注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加熱組動(dòng)物常于數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，而加熱組動(dòng)物不死亡。5、微生物學(xué)診斷32精選ppt二破傷風(fēng)梭菌〔Cl.tetani〕破傷風(fēng)梭菌大量存在于人和動(dòng)物腸道中，由糞便污染土壤，是引起人畜破傷風(fēng)的病原,經(jīng)傷口感染引起疾病。具有芽孢，其芽孢廣泛存在于各類(lèi)土壤中。本病以骨骼肌發(fā)生強(qiáng)直性痙攣的病癥為特征，此菌也稱(chēng)為強(qiáng)直梭菌。33精選ppt破傷風(fēng)梭菌菌體細(xì)長(zhǎng)，長(zhǎng)4-8μm，寬0.3-0.5μm，周身鞭毛，芽胞呈圓形，在動(dòng)物體內(nèi)外均能形成，位于菌體頂端，直徑比菌體寬大，似鼓槌狀，是本菌形態(tài)上的特征。繁殖體為革蘭氏陽(yáng)性，形成芽胞的菌體易轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。

1、形態(tài)學(xué)特性

34精選ppt2、培養(yǎng)特性破傷風(fēng)梭菌專(zhuān)性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為37℃pH7.0～7.5；普通瓊脂平板：24-48h形成直徑1mm以上的不規(guī)那么菌落，中心緊密，周邊疏松，似羽毛狀，易在培養(yǎng)基外表遷徒擴(kuò)散;血液瓊脂平板：明顯溶血環(huán)；皰肉培養(yǎng)基：肉湯渾濁，肉渣局部被消化，微變黑，產(chǎn)生氣體，生成甲基硫醇〔有腐敗臭味〕及硫化氫。35精選ppt3、生化特性與抵抗力生化特性一般不發(fā)酵糖類(lèi)，能液化明膠，產(chǎn)生硫化氫，形成吲哚，不能復(fù)原硝酸鹽。對(duì)蛋白質(zhì)有微弱消化作用。抵抗力本菌繁殖體抵抗力與其他細(xì)菌相似，但芽胞抵抗力強(qiáng)大。在土壤中可存活數(shù)十年，能耐煮沸40-50min。對(duì)青霉素敏感，磺胺類(lèi)有抑菌作用。36精選ppt破傷風(fēng)梭菌芽胞廣泛分布于自然界中；自然條件下，其易感性為：馬＞豬、牛、羊、犬，人也易感，禽類(lèi)及變溫動(dòng)物不易感。此菌產(chǎn)生兩種毒素破傷風(fēng)痙攣毒素：引起神經(jīng)興奮性異常增高和骨骼肌痙攣。是一種神經(jīng)毒素，為蛋白質(zhì)，由十余種氨基酸組成，不耐熱，分子量15萬(wàn)，可被腸道蛋白酶破壞，故口服毒素不起作用。破傷風(fēng)毒素的毒性非常強(qiáng)烈，僅次于肉毒毒素。

破傷風(fēng)溶血素：不耐熱，對(duì)氧敏感，可溶解馬及家兔的紅細(xì)胞，