SDS-PAGE原理及結(jié)果分析技巧課件

SDS原理及結(jié)果分析技巧本次課件將介紹SDS技術(shù)的原理和步驟，并分享結(jié)果分析的基本原則、常見技巧、問題和注意事項。SDS的定義什么是SDS?SDS，即聚丙烯酰胺凝膠電泳，是一種分離蛋白質(zhì)的常用方法。SDS的作用？SDS可以將復雜的蛋白質(zhì)混合物分離出各個單一的蛋白質(zhì)分子，有利于后續(xù)的蛋白質(zhì)分析和研究。為什么需要電泳?蛋白質(zhì)在電場中會帶電并在凝膠中移動，根據(jù)蛋白質(zhì)分子量的不同，分離效果尤為顯著。SDS的原理1樣品處理將待分離的蛋白樣品添加SDS和還原劑，使之均質(zhì)并去除與蛋白質(zhì)分子量無關(guān)的影響因素。2凝膠制備制備聚丙烯酰胺凝膠，將凝膠浸泡在緩沖液中，直到完全交換緩沖液。利用緩沖液在凝膠中形成pH梯度。3電泳分離將SDS處理后的蛋白質(zhì)樣品注入凝膠孔中，依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量，自下而上分離。SDS的步驟SDS試劑和材料SDS電泳儀、蛋白質(zhì)分子量標準品、緩沖液、聚丙烯酰胺凝膠、樣品及處理試劑。SDS的實驗過程樣品預處理、凝膠制備、裝載樣品、電泳、染色及解析結(jié)果。蛋白質(zhì)分析軟件利用軟件分析和解析SDS的光密度曲線，獲取蛋白質(zhì)的分子量和含量等重要信息。結(jié)果分析的基本原則1確認實驗重復性結(jié)果比較前應該確保實驗的可重復性，包括條件和等量樣品。2正確選擇染色方法染色的方法不同會影響蛋白質(zhì)條帶的清晰度。3標準品的鑒定和確定選擇合適的分子量標準品確定要檢測的蛋白質(zhì)分子量范圍。結(jié)果分析的常見技巧條帶密度密度越高，代表含量越豐富；密度越低則代表含量越少。比較分析對比兩個或以上樣品的分離情況和分子量等信息。精細分析利用一些特殊的處理和分析方法，深入研究某一結(jié)果，如半定量分析、分析帶的異質(zhì)性、修改成像等。結(jié)果分析的常見問題條帶分離不清晰檢查凝膠和樣品的處理，或更換蛋白質(zhì)分子量標準品。偽斑問題某些樣品因為分子構(gòu)型較為特異，在SDS中易產(chǎn)生偽斑。條帶移動不一致可能是電泳緩慢或電場不對稱等原因，可檢查設(shè)備和電泳條件。結(jié)果分析的注意事項1安全在SDS實驗中要注意安全，如穿戴實驗服、手套、護目鏡等。2質(zhì)量管理在分析結(jié)果前要對實驗重復