微生物檢驗(yàn)分枝放線菌

分枝桿菌

放線菌

諾卡菌1整理課件Mycobacterium是一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，含有分枝菌酸，有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而得名。具有抗酸性，故又稱抗酸桿菌(acid-fastbacillus)。人結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌非洲分枝桿菌2整理課件第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌3整理課件莢膜：CR3結(jié)合、降解大分子物質(zhì)、保護(hù)、抑制溶酶體融合脂質(zhì)：索狀因子、磷脂、硫酸腦苷脂、蠟質(zhì)D蛋白質(zhì):超敏反響、結(jié)核結(jié)節(jié)的形成傳播途徑：呼吸道、消化道、損傷的皮膚疾?。憾喾N臟器的結(jié)核病，肺結(jié)核最為多見。4整理課件免疫性：高感染率，低發(fā)病率。抗體無保護(hù)作用帶菌免疫細(xì)胞免疫

細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，抗酸染色后結(jié)核分枝桿菌呈紅色，背景呈藍(lán)色。菌體外有莢膜。5整理課件專性需氧改進(jìn)羅氏培養(yǎng)基生長(zhǎng)緩慢外表枯燥、不透明的菜把戲粗糙型菌落液體培養(yǎng)時(shí)生成菌膜6整理課件抵抗力較強(qiáng)。耐枯燥，在枯燥的痰內(nèi)生存6～8個(gè)月，對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力較強(qiáng)，在3％HCl或6％H2SO4中不被殺死，對(duì)濕熱敏感,在70％～75％乙醇中數(shù)分鐘即被殺死。7整理課件結(jié)核分枝桿菌不發(fā)酵糖類，有毒株中性紅試驗(yàn)均陽性，無毒株那么為陰性，并失去索狀生長(zhǎng)現(xiàn)象。H2O2煙酸硝酸鹽人型結(jié)核分枝桿菌+++牛型結(jié)核分枝桿菌+--8整理課件〔1〕DirectSmear

2.MorphologicExaminations

報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)-全視野未找到抗酸菌1+100個(gè)視野發(fā)現(xiàn)3～9個(gè)2+100個(gè)視野發(fā)現(xiàn)10～99個(gè)3+每個(gè)視野發(fā)現(xiàn)1～9個(gè)4+每個(gè)視野發(fā)現(xiàn)10個(gè)以上9整理課件〔2〕濃縮集菌涂片檢查法如果直接涂片鏡檢不易檢出結(jié)核桿菌，應(yīng)采用濃縮集菌涂片檢查法，以提高結(jié)核桿菌的檢出率。將標(biāo)本離心，取沉淀涂片，或采用漂浮集菌法，集菌后標(biāo)本經(jīng)反復(fù)屢次使涂層加厚，一般取3~4個(gè)接種環(huán)，枯燥固定后染色鏡檢。10整理課件3.核酸檢測(cè)用PCR法快速診斷結(jié)核分枝桿菌感染,特異性與敏感性均大于95％。４.抗原檢測(cè)：用ELISA法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原，可快速得知是否感染結(jié)核分枝桿菌．５.抗PPDIgG的檢測(cè)用ELISA法檢測(cè)患者血清中抗PPDIgG，可作為活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌感染的快速診斷方法，陽性率為80％～90％。11整理課件６.別離培養(yǎng)專性需氧、羅氏培養(yǎng)基、8w

前處理目的：去除雜菌，痰液均質(zhì)化。方法：挑取5ml痰液至已經(jīng)標(biāo)記的50ml離心試管中；參加等量的2%N-乙酰半胱氨酸-氫氧化鈉〔NACL-NaOH〕前處理液〔去污染〕；漩渦振蕩20秒；靜置15分鐘，切勿超過20分鐘；參加無菌PBS〔PH6.8〕至約50mL，蓋緊蓋子；離心3000r/min，15分鐘；倒掉上清液；添加1-3mlPBS〔PH6.8〕以中和PH至6.8.12整理課件無菌毛細(xì)管吸取消化后標(biāo)本0.1ml，滴加于中性羅氏培養(yǎng)基，將接種過的斜面來回晃動(dòng)，使菌液均勻鋪于斜面上，斜面朝上放37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。每一標(biāo)本同時(shí)接種2支。接種后第一周每天觀察一次，此后每周觀察一次。陽性結(jié)果經(jīng)涂片證實(shí)隨時(shí)報(bào)告。假設(shè)7天內(nèi)報(bào)告陽性，那么為快速生長(zhǎng)菌，超過7日那么為緩慢生長(zhǎng)菌。陰性結(jié)果至8周報(bào)告。必要時(shí)可延長(zhǎng)。13整理課件７.鑒定(1)PCR反向膜探針雜交E LISA法(PCR雜交梳)(2)DNA探針(3)16srRNA基因序列測(cè)定(4)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)

14整理課件８.藥物敏感性試驗(yàn)將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基上，同時(shí)做不含藥物的對(duì)照組。經(jīng)過培養(yǎng)，含有藥物的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目是對(duì)照組的75％以上，那么認(rèn)為該菌對(duì)該藥物濃度為完全耐藥，如無菌落生長(zhǎng)那么為敏感。15整理課件四、免疫學(xué)診斷1、結(jié)核菌素試驗(yàn)原理：純蛋白衍生物(PPD)，是用三氯醋酸沉淀結(jié)核菌培養(yǎng)濾液后的純化物。注入皮內(nèi)后如受試者已感染結(jié)核，那么結(jié)核菌素與致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合，形成遲發(fā)型超敏反響性炎癥。16整理課件應(yīng)用：

①選擇BCG接種對(duì)象及測(cè)定接種效果，結(jié)核菌素反響陰性者應(yīng)接種BCG；

②結(jié)核菌素試驗(yàn)對(duì)嬰幼兒可做診斷結(jié)核病之用；

③在末接種BCG的人群中作結(jié)核分枝桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查；

④可借用其測(cè)定腫瘤病人的細(xì)胞免疫功能。17整理課件2、結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè)3、結(jié)核分支桿菌抗體檢測(cè)4、全血干擾素釋放試驗(yàn)ESAT、CFP-1018整理課件第二節(jié)非典型分枝桿菌指結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌。因具有抗酸性，故又稱非典型抗酸性菌。廣泛分布于外環(huán)境和人及動(dòng)物的機(jī)體中。已發(fā)現(xiàn)50種以上能引起人類疾病，引起的肺部感染。19整理課件特點(diǎn)1、對(duì)人類的致病性比MTB低。2、機(jī)體免疫力低下時(shí)作為繼發(fā)性疾病發(fā)生。3、與結(jié)核分支桿菌發(fā)生混合感染4、對(duì)抗結(jié)核藥物天然耐藥光產(chǎn)色分枝桿菌暗產(chǎn)色分枝桿菌不產(chǎn)色分枝桿菌迅速生長(zhǎng)分枝桿菌20整理課件—、光產(chǎn)色分枝桿菌特點(diǎn)是在暗處不產(chǎn)生色素，光照1h后能在48h內(nèi)，菌落轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色。對(duì)人有致病性的是：1．堪薩斯分枝桿菌廣泛分布于水和土壤中，能引起肺內(nèi)外結(jié)核樣的病變。2．海分枝桿菌為水中的腐生菌。通過皮膚微小創(chuàng)口侵入，引起所謂的“游泳池肉芽腫〞。3．猿分枝桿菌先后從猿和人體別離出此菌。21整理課件二、暗產(chǎn)色分枝桿菌有光或無光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色。對(duì)人有致病性的為：1．瘰痢分枝桿菌25℃-37℃均可生長(zhǎng)，35℃最為適宜，45℃那么不能生長(zhǎng)。可引起人淋巴結(jié)炎或肺部感染。2．斯氏分枝桿菌37℃時(shí)為暗產(chǎn)色，25℃時(shí)為光產(chǎn)色。本菌引起成人肺部的慢性感染。22整理課件三、不產(chǎn)色分枝桿菌不能產(chǎn)生色素。對(duì)人有致病性的是：1．鳥-胞內(nèi)復(fù)合分枝桿菌(MAC/MAIC)AIDS患者易感染，對(duì)抗結(jié)核藥物不敏感或產(chǎn)生耐藥。2．潰瘍分枝桿菌通過創(chuàng)傷感染，四肢伸側(cè)形成無痛性潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。3．蟾蜍分枝桿菌為蟾蜍肉芽腫的病原菌。多引起老年男性的慢性肺部感染。23整理課件四、迅速生長(zhǎng)分枝桿菌在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度快，生長(zhǎng)溫度為25℃-45℃，對(duì)人有致病性的是：1．偶發(fā)分枝桿菌可引起人局部或肺部感染，對(duì)現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均有耐藥性。2．龜分枝桿菌可引起人的軟組織病變及手術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。24整理課件第三節(jié)麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)病的病原菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、粘膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫病理變化和細(xì)菌檢查結(jié)果等將麻風(fēng)分為瘤型、結(jié)核樣型和界限類綜合征等三種病型。

25整理課件抗酸桿菌，呈束狀或團(tuán)狀排列，G+無鞭毛、莢膜和芽胞。麻風(fēng)分枝桿菌為典型的胞內(nèi)寄生菌，有該菌存在的細(xì)胞胞質(zhì)呈泡沫狀稱麻風(fēng)細(xì)胞．用藥后細(xì)菌可斷裂為顆粒狀、鏈桿狀等，著色不均勻，叫做不完全菌。26整理課件微生物學(xué)檢驗(yàn)顯微鏡檢查：在鏡檢時(shí)應(yīng)注意與結(jié)核分枝桿菌桿菌形態(tài)相鑒別．麻風(fēng)分枝桿菌多呈束狀或成團(tuán)聚集．結(jié)核分枝桿菌多散在．麻風(fēng)分枝桿菌菌體粗直，兩端尖細(xì)，而結(jié)核分枝桿菌那么細(xì)長(zhǎng)略彎曲且有分枝現(xiàn)象．活組織切片：抗酸染色及病理學(xué)檢查27整理課件

放線菌屬

與

諾卡菌屬

28整理課件主要致病菌——衣氏放線菌〔A.israelii)屬于正常菌群。在機(jī)體抵抗力減弱、口腔衛(wèi)生不良、拔牙或外傷時(shí)引起內(nèi)源性感染，導(dǎo)致軟組織的化膿性炎癥。假設(shè)無繼發(fā)感染那么大多呈慢性無痛性過程，并常伴有多發(fā)性瘺管形成，排出黃色硫磺樣顆粒，此即為放線菌病。最為常見的是面頸部感染。放線菌屬29整理課件致病性與免疫性放線菌：正常菌群所致疾病：1.內(nèi)源性感染(放線菌病)：軟組織肉芽腫性炎癥(慢性,無痛,多發(fā)性瘺管,排出硫磺樣顆粒)2.齲齒和牙周炎免疫性：細(xì)胞免疫30整理課件G+、非抗酸性絲狀菌培養(yǎng)困難，厭氧或微需氧硫磺樣顆?！簿洹硥浩蚪M織切片，顯微鏡下可見顆粒呈菊花狀生物學(xué)性狀31整理課件硫磺樣顆粒(sulfurgranule)32整理課件培養(yǎng)：厭氧或微需氧氣體環(huán)境：5％CO2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板溫度與時(shí)間：37℃，24～48h菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)那么結(jié)節(jié)狀或臼齒狀菌落,初別離(粗糙)生化特性:溶血(-)葡萄糖(+)甘露醇(+)吲哚(-)過氧化氫酶試驗(yàn)(-)33整理課件微生物學(xué)檢查主要：硫磺樣顆?！材撝?痰,分泌物〕有顆粒：壓片鏡檢:菊花狀排列的菌絲無顆粒：分枝菌絲，斷裂的菌細(xì)胞必要：厭氧培養(yǎng)〔緩慢，37℃培養(yǎng)2w以上〕34整理課件諾卡菌屬1.需氧2.含分枝菌酸3.分布：土壤中，多數(shù)：非致病菌4.致病菌：星形諾卡菌〔N.asteroides〕巴西諾卡菌〔N.brasiliensis〕豚鼠諾卡菌〔N.caviae〕35整理課件生物學(xué)性狀形態(tài)：與以色列放線菌相似革蘭染色：陽性抗酸染色：陽性脫色時(shí)間延長(zhǎng)陰性(與TB區(qū)別)硫磺樣顆粒:滲出液、痰或膿汁中有時(shí)可見淡黃、紅色或黑色小顆粒。

36整理課件營(yíng)養(yǎng)要求：不高〔沙氏或普通瓊脂培養(yǎng)基〕氣體環(huán)境：需氧，有氣生菌絲培養(yǎng)溫度：室溫或37℃生長(zhǎng)速度：緩慢生長(zhǎng)，約1周色素：星形諾卡菌：黃色或深橙色，無白色菌絲巴西諾卡菌：有白色菌絲菌絲斷裂：5天后鏡檢可見鏈球狀或鏈桿狀〔放線菌屬：24h開始)培養(yǎng)特征：菌落：有皺褶、顆粒狀37整理課件致病性侵入途徑：呼吸道或皮膚創(chuàng)傷所致疾?。褐Z卡菌病〔nocard