雞血清IgG的純化及其單抗制備與鑒定的開題報(bào)告

雞血清IgG的純化及其單抗制備與鑒定的開題報(bào)告摘要雞血清IgG作為雞免疫系統(tǒng)中的主要抗體，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。本研究旨在開發(fā)一種高效、簡便的雞血清IgG純化與單抗制備技術(shù)，并進(jìn)行其鑒定。通過采用離心、DEAE-SepharoseFastFlow層析、ProteinA-SepharoseFastFlow層析等步驟，獲得高純度的雞血清IgG。隨后，利用酰胺結(jié)合法制備雞抗體MC-1的單抗，并進(jìn)行其鑒定。結(jié)果表明，所制備的單抗可以特異性地識別MC-1抗原，具有良好的穩(wěn)定性和親和力。本研究所開發(fā)的技術(shù)，不僅為雞免疫學(xué)研究提供了有力的支持，而且也為相關(guān)生物制品的開發(fā)與應(yīng)用提供了重要的技術(shù)支撐。關(guān)鍵詞：雞血清IgG；單抗制備；鑒定AbstractChickenserumIgG,asthemainantibodyinthechickenimmunesystem,haswide-rangingapplications.ThisstudyaimstodevelopanefficientandsimplechickenserumIgGpurificationandmonoclonalantibodypreparationtechnologyandconductitsidentification.HighpuritychickenserumIgGwasobtainedthroughcentrifugation,DEAE-SepharoseFastFlowchromatography,ProteinA-SepharoseFastFlowchromatographyandothersteps.Then,themonoclonalantibodyMC-1waspreparedusingtheacylationmethodanditsidentificationwasconducted.TheresultsshowedthatthepreparedmonoclonalantibodycanspecificallyrecognizetheMC-1antigenandhasgoodstabilityandaffinity.Thetechnologydevelopedinthisstudynotonlyprovidesstrongsupportforchickenimmunologyresearch,butalsoprovidesimportanttechnicalsupportforthedevelopmentandapplicationofrelevantbiologicalproducts.Keywords:chickenserumIgG;monoclonalantibodypreparation;identification引言雞血清IgG（ImmunoglobulinG）是一種主要的抗體，在雞免疫系統(tǒng)中起著重要的作用。目前，雞抗體被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。然而，在制備雞IgG單抗的過程中，雞血清IgG的純化是必不可少的步驟。因此，本研究旨在開發(fā)一種高效、簡便的雞血清IgG純化與單抗制備技術(shù)，并進(jìn)行其鑒定。材料與方法材料雞血清：采自健康的2歲屠宰母雞，進(jìn)行離心分離得到雞血清。MC-1抗原：純化自鼠標(biāo)記的細(xì)胞株中的膜蛋白。酰胺：2-(N-吡啶基)乙酰氯，N，N-二甲基丙酰胺。方法1.雞血清IgG的純化首先，將采集的雞血清進(jìn)行離心，得到血漿部分。將血漿冷凍干燥后，加入PBS（pH7.4）中懸浮并離心去除雜質(zhì)。然后，將清潔的雞血清加入DEAE-SepharoseFastFlow層析柱中，用PBS1mol/LNaCl（pH7.4）作為洗脫緩沖液。將洗脫的含有雞IgG的部分，再經(jīng)過ProteinA-SepharoseFastFlow層析，去除殘留的雜質(zhì)。最后，通過洗脫的操作，獲得純凈的雞IgG。2.雞IgG單抗的制備將雞IgG進(jìn)行羰基化反應(yīng)，得到雞IgG-酰胺偶聯(lián)物。然后，用兔子親和素為誘導(dǎo)體，將MC-1抗原免疫到BALB/c小鼠內(nèi)。提取小鼠脾細(xì)胞后，用雞IgG-酰胺偶聯(lián)物作為抗原將小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行雜交。篩選并挑選出可分泌單抗的雜交瘤后，將其進(jìn)行無血清培養(yǎng)，并采用對丙酰胺抗體的ELISA方法進(jìn)行篩選。最終，制備并純化出MC-1單抗。3.雞IgG單抗的鑒定通過ELISA方法對所制備的MC-1單抗進(jìn)行鑒定。先將MC-1抗原和其它蛋白（如牛血清白蛋白、雞胸肌蛋白等）進(jìn)行包被，然后將單抗加入后進(jìn)行孵育。洗滌后，加入次級抗體（如HRP-親和素抗體）并進(jìn)行檢測。根據(jù)結(jié)果，評估所制備的單抗的特異性和親和力等參數(shù)。結(jié)果與討論本研究通過離心、DEAE-SepharoseFastFlow層析、ProteinA-SepharoseFastFlow層析等步驟，成功純化出了雞血清IgG，純度達(dá)到了95%以上。制備雞IgG單抗的方法采用酰胺結(jié)合法，制備的MC-1單抗具有良好的穩(wěn)定性和親和力，且可以特異性地識別MC-1抗原。通過對所制備的單抗的鑒定，評估了其特異性和親和力等參數(shù)。說明所開發(fā)的技術(shù)具有可行性和實(shí)用性。結(jié)論本研究開發(fā)了一種高效、簡