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乳腺癌病理診斷標(biāo)準(zhǔn)中的幾個(gè)問題1整理課件一、乳腺腫瘤WHO分類及預(yù)后腫瘤名稱后的編碼為:腫瘤學(xué)國(guó)際疾病分類編碼〔ICD-O〕生物學(xué)行為編碼為:0為良性腫瘤,1為交界性或生物學(xué)行為未定腫瘤,2為原位癌或上皮內(nèi)腫瘤Ⅲ級(jí),3為惡性腫瘤2整理課件1.上皮性腫瘤1.1浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌,非特殊性.310年生存率35%~50%1.1.1混合性癌1.1.2多型性癌1.1.3伴有破骨巨細(xì)胞的癌1.1.4伴有絨癌特征的癌1.1.5伴有黑色素特征的癌1.2浸潤(rùn)性小葉癌.3〔預(yù)后與浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌相似〕1.3小管癌.3〔預(yù)后極佳,與同齡無乳腺癌婦女相似〕1.4浸潤(rùn)性篩狀癌.3〔預(yù)后極佳,10年生存率90%~100%〕1.5髓樣癌〔合體細(xì)胞生長(zhǎng)結(jié)構(gòu)>75%,沒有腺管結(jié)構(gòu),中度~明顯彌漫淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),中度~明顯核多形性,完整的腫瘤組織學(xué)邊界〕.3〔預(yù)后比浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌好,10年生存率50%~90%〕1.6黏液癌及其他富于黏液的腫瘤.3〔10年生存率80%~100%〕1.6.1黏液癌1.6.2囊腺癌和柱狀細(xì)胞黏液癌1.6.3印戒細(xì)胞癌3整理課件1.7神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤.3〔組織學(xué)級(jí)別是最重要的預(yù)后指標(biāo)之一〕1.7.1實(shí)性神經(jīng)內(nèi)分泌癌1.7.2非典型類癌1.7.3小細(xì)胞/燕麥細(xì)胞癌1.7.4大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌1.8浸潤(rùn)性乳頭狀癌.3〔預(yù)后較好〕1.9浸潤(rùn)性微乳頭狀癌.3〔預(yù)后與血管浸潤(rùn)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)〕1.10大汗腺癌.3〔預(yù)后與非大汗腺癌無差異〕1.11化生性癌.31.11.1純上皮化生性癌.3〔大局部病例預(yù)后非常好〕1.11.1.1鱗狀細(xì)胞癌1.11.1.2伴有梭形細(xì)胞化生的腺癌1.11.1.3腺鱗癌1.11.1.4黏液表皮樣癌1.11.2上皮/間葉混合性癌.3〔高度侵襲性〕4整理課件1.12富于脂質(zhì)的癌.3〔不詳〕1.13分泌性癌.3〔在兒童和青少年有極好的預(yù)后,在年長(zhǎng)患者有浸潤(rùn)性行為〕1.14嗜酸細(xì)胞癌.3〔不詳〕1.15腺樣囊性癌.3〔低度惡性,單純切除可治愈〕1.16腺泡細(xì)胞癌.3〔不詳〕1.17富于糖原的透明細(xì)胞癌.3〔比浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌更具有侵襲性〕1.18皮脂腺癌.3〔不詳〕1.19炎癥性癌.3〔5年存活率25%~50%〕1.20小葉腫瘤1.20.1小葉原位癌.21.21導(dǎo)管內(nèi)增生性病變1.21.1通常型導(dǎo)管增生1.21.2平坦型上皮非典型增生〔DIN1A〕1.21.3非典型導(dǎo)管增生〔DIN1B〕1.21.4導(dǎo)管原位癌.2〔包括DIN1C、DIN2、DIN3或DCIS1級(jí)、DCIS2級(jí)、DCIS3級(jí)〕5整理課件1.22微小浸潤(rùn)導(dǎo)管癌〔無編碼.極少淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.臨床按DCIS處理〕1.23導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀腫瘤1.23.1中心型乳頭狀瘤.01.23.2外周型乳頭狀瘤.01.23.3非典型乳頭狀瘤1.23.4導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀癌.21.23.5囊內(nèi)乳頭狀癌.21.24良性上皮增生1.24.1包括各種類型腺病1.24.1.1硬化腺病1.24.1.2大汗腺腺病1.24.1.3盲管腺病1.24.1.4微腺管腺病1.24.1.5腺肌上皮腺病1.24.2放射性瘢痕/復(fù)合性硬化性病變1.24.3腺瘤1.24.3.1管狀腺瘤.01.24.3.2泌乳腺瘤.01.24.3.3大汗腺腺瘤.01.24.3.4多型性腺瘤.01.24.3.5導(dǎo)管腺瘤.06整理課件2.腺肌上皮病變2.1肌上皮增生2.2腺肌上皮腺病2.3腺肌上皮瘤.02.4惡性肌上皮瘤.3〔極少發(fā)生局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移〕3.間葉腫瘤3.1血管瘤.03.2血管瘤病3.3血管周細(xì)胞瘤.13.4假血管瘤樣間質(zhì)增生3.5肌纖維母細(xì)胞瘤.03.6纖維瘤病〔侵襲性〕.13.7炎癥性肌纖維母細(xì)胞瘤.13.8脂肪瘤.03.8.1血管脂肪瘤.03.9顆粒細(xì)胞瘤.03.10神經(jīng)纖維瘤.03.11神經(jīng)鞘瘤.03.12血管肉瘤.33.13脂肪肉瘤.33.14橫紋肌肉瘤.33.15骨肉瘤.33.16平滑肌瘤.03.17平滑肌肉瘤.37整理課件4.纖維上皮性腫瘤4.1纖維腺瘤.04.2葉狀腫瘤.1〔良性、惡性均可復(fù)發(fā)〕4.2.1良性.04.2.2交界性.14.2.3惡性.34.3導(dǎo)管周圍間質(zhì)肉瘤,低級(jí)別.34.4乳腺錯(cuò)構(gòu)瘤5.乳頭腫瘤5.1乳頭腺瘤.05.2汗腺瘤樣腺瘤.05.3乳頭派杰病.3〔預(yù)后取決于在其下方是否存在導(dǎo)管內(nèi)癌和乳腺深部組織的浸潤(rùn)癌〕6.惡性淋巴瘤6.1彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤.36.2Burkitt淋巴瘤.36.3結(jié)外MALT型邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤.36.4濾泡型淋巴瘤.37.轉(zhuǎn)移性腫瘤8.男性乳腺腫瘤8.1男性乳腺發(fā)育8.2癌8.2.1浸潤(rùn)癌.3〔預(yù)后與女性乳腺癌相似〕8.2.2原位癌.28整理課件二、標(biāo)準(zhǔn)的病理報(bào)告內(nèi)容9整理課件
1.標(biāo)本名稱〔腫塊切除、單純?nèi)榉壳谐⑷橄侔└倪M(jìn)根治、乳腺癌根治〕2.手術(shù)部位3.組織學(xué)類型4.分級(jí)〔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)〕5.腫塊大小〔cm〕6.血管、淋巴管侵犯情況7.乳頭是否受累8.腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況9.ER、PR、c-erbB-2等免疫組化檢測(cè)情況10整理課件分級(jí)方法對(duì)3項(xiàng)腫瘤主要特征進(jìn)行評(píng)判:表現(xiàn)腺體分化的腺管形成、核多形性以及核分裂計(jì)數(shù)。應(yīng)用1~3計(jì)分系統(tǒng)對(duì)每個(gè)因素進(jìn)行獨(dú)立的評(píng)估。將3組數(shù)值加在一起,可得到3~9的積分結(jié)果。其相應(yīng)的組織學(xué)級(jí)別如下:Ⅰ級(jí)〔grade1)--------高分化:3~5分Ⅱ級(jí)〔grade2)--------中分化:6~7分Ⅲ級(jí)〔grade3)--------低分化:8~9分11整理課件12整理課件免疫組化標(biāo)記分為兩類:A、診斷用標(biāo)記:如CD23、CD5、bcl-10、CD10、CK〔pan〕、CK18、CK20desmin、a-SMA、HHF-35。此類標(biāo)記結(jié)果只分〔+〕、〔-〕,不須劃分等級(jí),供病理科醫(yī)生診斷或鑒別診斷用。B、治療用或預(yù)后用標(biāo)記:如ER、PR、cerbB-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS、P63、P53、P27、P21。此類標(biāo)記結(jié)果不能只分〔+〕、〔-〕,必須劃分等級(jí),應(yīng)分為〔-〕、〔+〕、〔++〕、〔+++〕。臨床醫(yī)生據(jù)此指導(dǎo)化療用藥和判斷預(yù)后。13整理課件各家醫(yī)院檢測(cè)結(jié)果不一致的原因1.病理醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)缺乏,尤其是對(duì)每一種抗體的準(zhǔn)確的陽(yáng)性定位〔細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、細(xì)胞核〕缺乏足夠的認(rèn)識(shí),從而發(fā)生錯(cuò)誤判斷。例如:ER應(yīng)定位在細(xì)胞核,PR定位在細(xì)胞核,C-erbB-2應(yīng)定位在細(xì)胞膜。2.免疫組化的實(shí)驗(yàn)操作不標(biāo)準(zhǔn)。3.組織標(biāo)本固定不當(dāng)〔此與臨床醫(yī)生有關(guān)〕。4.組織脫水處理不當(dāng)〔機(jī)器質(zhì)量差、試劑未及時(shí)更換、程序未調(diào)到最正確狀態(tài)〕。14整理課件C-erbB-2細(xì)胞漿表達(dá)15整理課件ER漿表達(dá)ER漿表達(dá)ER+++16整理課件PR++17整理課件
三、乳腺癌中HER-2的檢測(cè)及其臨床意義18整理課件〔一〕HER-2概況◆Her-2:又名C-erbB-2,Her-2/neu定位于17q12.1-21◆Her-2屬于EGFR家族成員◆為原癌基因,編碼185KD的跨膜型酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體◆現(xiàn)有研究說明,在30%以上的人類腫瘤中存在Her-2基因的擴(kuò)增/過度表達(dá)(如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等〕其中25~30%的乳腺癌為Her-2基因的擴(kuò)增/過度表達(dá)。19整理課件國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的乳腺腫瘤
HER2陽(yáng)性情況
HER2StudynStagepositive,%Ross(2003)5003Ⅰ-Ⅲ22Owens(2004)6556Ⅰ-Ⅳ24Ross(2003)279Ⅳ26Penault-Llorca(2005)699Ⅳ30
20整理課件〔二〕HER-2/neu癌基因的致瘤機(jī)制◆抑制凋亡,促進(jìn)增殖;
HER-2過表達(dá)通過PI3K/AKT和Ras/Raf/MEK/MAPK通路抑制野生型P53蛋白,促進(jìn)P21waf1/cip1蛋白表達(dá)◆增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力;
HER-2下調(diào)和阻斷粘附分子整合蛋白、CD44等蛋白表達(dá)及粘附功能◆促進(jìn)腫瘤血管新生和淋巴管新生
HER-2過表達(dá)上調(diào)血管/淋巴管新生調(diào)控因子VEGF-A,-C,-D表達(dá)21整理課件
〔三〕、乳腺癌中HER-2擴(kuò)增/過度表達(dá)的臨床意義22整理課件1987年Slamon等首次報(bào)道乳腺癌原癌基因HER-2的擴(kuò)增,導(dǎo)致腫瘤易復(fù)發(fā),與患者總生存期短密切相關(guān).SlamonDJ,etal.Science.1987,235(4785):177-82.
23整理課件HER2陽(yáng)性患者的生存期比正常者縮短一半以上轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的中位生存期HER2陽(yáng)性 8-10個(gè)月HER2陰性 17-22個(gè)月SlamonDJetal.Science1987;235:177–8224整理課件
〔一〕無病生存期和總生存期短相關(guān),腫瘤預(yù)后差.在多變量分析結(jié)果中,HER2是腫瘤復(fù)發(fā)和總生存期長(zhǎng)短的獨(dú)立預(yù)后因素復(fù)發(fā)率(P=0.001)總生存(P=0.02)至今為止已有國(guó)內(nèi)外數(shù)百篇文獻(xiàn)研究HER-2與乳腺癌的關(guān)系,國(guó)外八十多篇文獻(xiàn)報(bào)道報(bào)道HER-2擴(kuò)增/過表達(dá)與患者預(yù)后差相關(guān).Her-2是目前公認(rèn)的一個(gè)乳腺癌重要的預(yù)后/預(yù)測(cè)因子25整理課件1.000.750.500.250累計(jì)生存率024487296120144無擴(kuò)增擴(kuò)增基因擴(kuò)增:>10拷貝數(shù)無基因擴(kuò)增:<3拷貝數(shù)臨界值:不包括死亡時(shí)間(月數(shù))Logrankp<0.001RossJS,FletcherJA.StemCells1998;16:413–428HER2陽(yáng)性狀態(tài)的患者無病生存期縮短淋巴結(jié)陰性SeshadriRetal.JClinOncol1993;11:1936–42100806040200
0122436486072無病生存概率死亡時(shí)間(月數(shù))HER2基因<3拷貝數(shù)HER2基因33拷貝數(shù)對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)p=0.001淋巴結(jié)陽(yáng)性26整理課件2005年St.Gallen指南乳腺癌危險(xiǎn)度分級(jí)低度危險(xiǎn)◆LN〔-〕且◆標(biāo)本中病灶大小〔pT〕≤2CM◆分級(jí)1級(jí)◆瘤周脈管未見腫瘤侵犯◆HER2基因沒有過度表達(dá)或擴(kuò)增◆年齡≥35歲27整理課件2005年St.Gallen指南乳腺癌危險(xiǎn)度分級(jí)中度危險(xiǎn)◆LN〔-〕陰性且有以下至少一條標(biāo)本中病灶大小〔pT〕≥2CM分級(jí)2-3級(jí)有瘤周脈管腫瘤侵犯HER2過度表達(dá)或擴(kuò)增年齡≤35歲◆LN1-3個(gè)〔+〕且未見HER2過度表達(dá)或擴(kuò)增高度危險(xiǎn)◆LN1-3個(gè)〔+〕且HER2過度表達(dá)或擴(kuò)增◆LN4個(gè)及以上〔+〕28整理課件(二)HER2陽(yáng)性狀態(tài)可以預(yù)示腫瘤對(duì)常規(guī)治療的反響情況◆內(nèi)分泌治療HER2陽(yáng)性患者相對(duì)耐藥◆CMF方案 HER2陽(yáng)性患者相對(duì)耐藥◆蒽環(huán)類 對(duì)大劑量蒽環(huán)類相對(duì)敏感◆紫杉類藥物相對(duì)敏感29整理課件
〔三〕、靶向Her-2的人源化單抗—赫賽汀
30整理課件赫賽汀?靶向HER2的人源化單抗用于治療HER2陽(yáng)性乳腺癌生存率提高達(dá)45%療效改善并持續(xù)維持生活質(zhì)量95%人源化,5%鼠抗,具有高度親和性(Kd=0.1nM)和特異性,顯著降低免疫原性(HAMA)31整理課件
〔四〕.Her-2陽(yáng)性狀態(tài)的檢測(cè)方法32整理課件〔一〕組織標(biāo)本的制備注意環(huán)節(jié)1、標(biāo)本的類型:新鮮標(biāo)本、針吸活檢標(biāo)本、粗針穿刺標(biāo)本、外科手術(shù)標(biāo)本細(xì)針穿刺液基細(xì)胞111例IHC、CISH與FISH檢測(cè)一致的乳腺癌中,53例FNAs〔切除外科標(biāo)本〕與組織病理標(biāo)本結(jié)果高度一致。VocaturoA.NovelliF,etal.Oncologist.2006Sep;11(8):878-86.
33整理課件HER2表達(dá)在原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶呈高度一致StudyPercentageIHCoverexpressionPrimarytumorsMetastasesMasood&Bui(2000)32%32%Shimizuetal(2000)38%38%Simonetal(2001)25%22%Tanneretal(2001)28%28%Gancbergetal(2002)29%27%Vincent-Salomonetal(2002)25%20%Tsutsuietal(2002)25%25%Carlssonetal(2004)55%55%
34整理課件
2.標(biāo)本的固定〔1〕取材到固定時(shí)間<1小時(shí)〔2〕固定時(shí)間6-48時(shí)間,一般不超過24小時(shí)〔3〕固定液10%中性福爾馬林固定液35整理課件
3.標(biāo)本的取材<5mm4.組織蠟塊和組織切片〔1〕切片后不宜置于恒溫時(shí)間過長(zhǎng)〔<4-6周〕〔2〕厚度IHC3-5umCISH/FISH4-5um36整理課件〔二〕常用檢測(cè)方法1.免疫組化〔IHC〕檢測(cè)Her-2蛋白表達(dá)〔1〕抗原修復(fù):95-99℃EDTA〔1mMpH80〕或枸櫞酸鈉〔0.05MpH6.0〕37整理課件〔2〕常用IHC檢測(cè)的抗體/試劑盒HercepTest:美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于臨床診斷公司名Novacastra(newcastle,upontyne,UK)Genentech(SanFrancisco,CA)Zymed(SanFrancisco,CA)DAKO(SanFrancisco,CA)DAKO(SanFrancisco,CA)38整理課件抗體陽(yáng)性率HerceptTest(DAKO)31/86(38.1%)AO485(DAKO)25/66(37.8%)4D5(Genetech)15/86(17.4%)CB11(BiogenexNovocastra)25/86(9.1%)39整理課件
◆CB11或4D5〔+++〕HerceptTest〔+++〕;HerceptTest〔++〕CB11或4D5〔-〕◆FISH(+),HerceptTest+++:19/20;FISH(-),HerceptTest++:5;FISH(+),IHC(-):3例。GouveaAP,MilaneziF,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol.2006Mar;14(1):103-8.40整理課件〔3〕結(jié)果判讀注意點(diǎn):◆計(jì)數(shù)胞膜完全著色的細(xì)胞比例及著色強(qiáng)度◆胞漿著色忽略不計(jì)◆評(píng)定浸潤(rùn)部位的著色情況◆正常上皮細(xì)胞不應(yīng)著色41整理課件染色形態(tài) 評(píng)分 染色圖例完全沒有染色或是腫瘤細(xì)胞中 0
少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜染色大于10%的腫瘤細(xì)胞有呈現(xiàn)清淡地/ 1+稍微地并且是不完整的細(xì)胞膜染色
這些細(xì)胞只染在局部的細(xì)胞膜 大于10%的腫瘤細(xì)胞有呈現(xiàn) 2+輕度至中度的完整的細(xì)胞膜染色 大于10%的腫瘤細(xì)胞有呈現(xiàn) 3+
強(qiáng)度的完整的細(xì)胞膜染色 HercepTestTM判讀標(biāo)準(zhǔn)42整理課件01+3+2+免疫組織化學(xué)法0-3+評(píng)分系統(tǒng)
Immunohistochemistry(IHC)43整理課件3+CerbB244整理課件3+CerbB245整理課件2+CerbB246整理課件2+CerbB247整理課件1+CerbB248整理課件49整理課件50整理課件51整理課件52整理課件2.顯色原位雜交〔CISH〕
一種用堿性磷酸酶標(biāo)記的探針,在甲醛固定、石蠟包埋組織切片上進(jìn)行雜交,再用鼠抗地高辛抗體和辣根過氧化物酶抗鼠抗體進(jìn)行免疫結(jié)合,DAB顯色,普通光學(xué)顯微鏡觀察有無基因擴(kuò)增的異常信號(hào)的方法。CISH技術(shù)比FISH簡(jiǎn)單,試劑較廉價(jià),不需昂貴的儀器設(shè)備,且可長(zhǎng)期保存切片。53整理課件〔1〕所需主要設(shè)備◆電爐、帶溫度計(jì)的高壓鍋或微波爐◆原位PCR儀或原位雜交爐◆37℃溫箱◆亮視野顯微鏡54整理課件〔2〕檢測(cè)三大關(guān)鍵步驟◆標(biāo)本的加熱預(yù)處理用電爐,15分鐘98℃–100℃所有載玻片必需全部浸入緩沖液◆酶消化室溫10分鐘或37℃3分鐘◆嚴(yán)格沖洗0.5xSSC,75-80℃,5分鐘55整理課件過度酶消化56整理課件
酶消化不夠57整理課件恰當(dāng)?shù)拿赶?/p>
58整理課件〔3〕結(jié)果判讀◆無擴(kuò)增:大于50%的腫瘤細(xì)胞中有1-5個(gè)信號(hào)點(diǎn)◆低拷貝擴(kuò)增:大于50%的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)有6-10個(gè)信號(hào)點(diǎn)◆高拷貝擴(kuò)增:大于50%的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)有大于10個(gè)信號(hào)點(diǎn)或者凝結(jié)成團(tuán)塊狀、簇狀粗顆粒信號(hào)59整理課件Adiploid-triploidHER2copynumberisusuallyclearCISH檢測(cè)無HER2基因擴(kuò)增樣本
60整理課件CISH檢測(cè)低擴(kuò)增樣本
61整理課件Genecopyclusters:100%evidenceofgeneamplification
CISH檢測(cè)高擴(kuò)增樣本
62整理課件
HER2/CISHNoHER2amplificationHER2amplification
63整理課件3.熒光原位雜交〔FISH〕是一種通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交,在熒光顯微鏡下能原位顯示細(xì)胞核內(nèi)雜交信號(hào)的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)。FISH技術(shù)用于檢測(cè)基因擴(kuò)增的準(zhǔn)確性比其他檢測(cè)技術(shù)高,可以防止由于染色體的多體而呈現(xiàn)的假陽(yáng)性,故被譽(yù)為“金標(biāo)準(zhǔn)〞。但FISH技術(shù)操作較復(fù)雜,試劑(熒光標(biāo)記的探針試劑盒)和儀器設(shè)備(熒光顯微鏡)昂貴,目前在國(guó)內(nèi)只有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室具有相應(yīng)技術(shù)條件進(jìn)行該技術(shù)的檢測(cè)。64整理課件〔1〕兩種探針◆應(yīng)用Her-2和17號(hào)染色體雙熒光標(biāo)記探針,兩種信號(hào)的比值〔<2或者>=2〕Her-2是否擴(kuò)增◆應(yīng)用單一針對(duì)Her-2的地高辛標(biāo)記探針,直接定量Her-2的擴(kuò)增程度65整理課件〔2〕FISH主要設(shè)備:熒光顯微鏡原位雜交儀細(xì)胞遺傳分析工作站高壓消毒爐66整理課件〔3〕結(jié)果觀察◆75%以上癌細(xì)胞核中都有雜交信號(hào)◆細(xì)胞核大小一致、邊界完整、染色均一、無重疊67整理課件FISH:PathVysionTM無擴(kuò)增擴(kuò)增比值<2提示Her-2無擴(kuò)增比值32提示Her-2有擴(kuò)增68整理課件FISH:INFORM?低擴(kuò)增高擴(kuò)增69整理課件EGFR70整理課件EGFR高擴(kuò)增吉非替尼(gefitinib):商品名為易瑞沙(ire
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