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文檔簡介

男性不育實驗室診斷

系列試劑盒傅劍華深圳華康生物醫(yī)學工程有限公司1公司簡介1992年成立,深圳月亮灣生物工程有限公司2004年更名為:深圳華康生物醫(yī)學工程有限公司男性不育專業(yè)化的產(chǎn)品生產(chǎn)供應(yīng)商2公司主要產(chǎn)品一、男性不育實驗室診斷系列試劑盒二、EBVCAIgAELISA試劑盒

三、乙肝、丙肝ELISA試劑盒四、HIV抗體ELISA試劑盒3華康公司男性不育產(chǎn)品的特點一、遵照WHO的方法二、產(chǎn)品系列化,品種齊全

三、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,采用進口原料四、使用操作更為方便和準確,可用酶標儀和生化分析儀4華康公司提供的服務(wù)一、售前售后的技術(shù)支持二、提供實驗室組建的方案和所需儀器設(shè)備

三、合作組建男科實驗室四、可提供實驗操作技術(shù)人員5男性不育實驗室診斷

產(chǎn)品簡介1、免疫性不育檢測試劑2、附性腺分泌功能檢測試劑3、生殖道感染性檢測試劑4、精子功能質(zhì)量檢測試劑5、男性生精功能檢測試劑6、其他產(chǎn)品6一、免疫性不育檢測試劑1、精子膜表面抗體IgG檢測試劑盒

WHO推薦的免疫性不育診斷方法,檢測人精液中精子膜表面抗體IgG?;顒泳颖砻姘坏腎gG抗體,與致敏IgG抗體的微球混合,再與抗IgG

的血清反應(yīng)。如果精子包被有抗精子抗體(AsAb),可形成活動的精子與致敏微球的混合凝集物。

MAR試驗可作為精子膜表面抗體常規(guī)篩選方法。782、抗精子抗體與男性不育的關(guān)聯(lián)性①影響精子活力及抑制精子穿透宮頸黏液;②抑制精子獲能、頂體反應(yīng)及受孕;③影響精子酶的活力和抑制透明帶和放射冠的分散作用;④封閉頂體膜上的抗原位點和抑制精子對透明帶的附著與穿透;⑤影響精子與卵子的結(jié)合;⑥影響胚胎的發(fā)育。9二、附性腺分泌功能檢測試劑男性生殖系統(tǒng)的主要附屬性腺有:(1)附睪(2)精囊腺(3)前列腺10精漿中性α-葡糖苷酶定量檢測試劑盒【檢驗原理】

酸性條件下,通過對精漿酸性α-葡糖苷酶的抑制,保留中性α-葡糖苷酶活性,后者分解底物生成終產(chǎn)物對硝基酚,對硝基酚在405nm波長有最大吸收波長,顏色深淺與單位時間內(nèi)精漿中性α-葡糖苷酶活力成正比。(一)附睪分泌功能檢測11【臨床意義】

中性α-葡糖苷酶是附睪分泌功能的指標。較左旋肉毒堿和甘油磷酸膽堿對附睪更特異更靈敏。結(jié)合激素和睪丸其他指標,對遠端輸精管阻塞有較好的診斷價值。果糖結(jié)合中性α-葡糖苷酶檢測,可大大提高其診斷阻塞性無精子癥的價值。12精漿果糖定量檢測試劑盒(吲哚法)【檢驗原理】

果糖與吲哚在強酸、加熱環(huán)境中生成有色復合物,該有色物質(zhì)在470nm波長有最大吸收峰,其吸光度大小與果糖含量成正比。(二)精囊腺分泌功能檢測13【臨床意義】

精囊分泌的果糖是精子能量的主要來源。睪酮的水平影響精囊果糖的分泌,雄激素不足可造成果糖含量降低,因此果糖含量能間接反映睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮的功能。先天性精囊缺如果糖測定為陰性;精囊炎時,果糖含量降低。不完全射精或射精過頻,果糖含量亦降低??捎糜阼b別單純性輸精管阻塞所致的無精癥(果糖含量正常)和輸精管、精囊發(fā)育不良引起的無精癥。因此檢測精漿果糖可作為精囊分泌功能的指標。141、精漿檸檬酸定量檢測試劑盒【檢驗原理】

精漿檸檬酸在特異性酶的作用下生成酮酸。酸性條件下酮酸與偶聯(lián)劑的反應(yīng)產(chǎn)物于330nm波長處有最大吸收峰,其吸光度大小與精漿檸檬酸含量成正比。(三)前列腺分泌功能檢測15【臨床意義】

檸檬酸來自前列腺,其作用是絡(luò)合鈣離子,通過與鈣離子結(jié)合,而調(diào)節(jié)精漿鈣離子濃度,并影響射精后精液凝固與液化過程的功能。參與維持精漿滲透壓。對精子活力及透明質(zhì)酸酶的活性也起重要作用。研究表明,精漿檸檬酸含量與睪酮水平相關(guān)。精漿檸檬酸含量是幫助判斷雄激素分泌狀態(tài)及評價前列腺功能的重要指標。162、精漿酸性磷酸酶定量檢測試劑盒【檢驗原理】

在酸性條件下,精漿酸性磷酸酶催化對硝基酚磷酸鹽,使其水解釋放出對硝基酚(PNP),后者在堿性環(huán)境中生成黃色化合物,其顯色程度于405nm波長與標本酸性磷酸酶濃度成正比。17【臨床意義】

前列腺炎患者精漿酸性磷酸酶含量降低,而前列腺肥大或早期前列腺惡性腫瘤者其含量增高。精漿酸性磷酸酶是前列腺功能性的指標之一。183、精漿鋅定量檢測試劑盒【檢驗原理】

精漿鋅和吡啶偶氮間苯二酚在屏蔽劑的作用下,于pH9.5的反應(yīng)體系中,生成特異性的鋅-色原復合物,在470nm波長處有最大吸收峰,其吸光度大小與精漿鋅含量成正比。

19【臨床意義】

①鋅缺乏可引起性腺發(fā)育不良,長期缺鋅會直接影響垂體的反饋機制,致使睪丸發(fā)育不良、性腺功能減退。②鋅可調(diào)節(jié)雄激素代謝,鋅含量降低時可促進睪酮轉(zhuǎn)變?yōu)殡p氫睪酮。20③鋅直接參與精子生成、成熟、激活和獲能過程,對精子活力、代謝及其穩(wěn)定性都具有重要作用。精子活力良好者與低下者相比,精子鋅有顯著性差異。鋅對頂體酶可逆性抑制使精子免于男女生殖道對其潛在的損傷。鋅也是超氧化物歧化酶(SOD)中金屬之一,通過SOD清除精漿中自由基,從而抑制細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),保證精子的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能正常。鋅與精子核染色質(zhì)解聚功能有關(guān)。21④鋅是前列腺功能指標之一,與抗細菌感染有關(guān)。精液不液化者精漿鋅含量降低,而精液不液化者多有前列腺炎。病原微生物感染對前列腺分泌功能有影響,有時雖然沒有明顯的前列腺炎的癥狀,但可能存在亞臨床性前列腺炎,致使精漿鋅降低。故精漿鋅含量可作為前列腺的功能指標。22三、生殖道感染性檢測試劑1、精漿彈性硬蛋白酶定量檢測試劑盒【檢驗原理】

包被于固相載體的抗彈性硬蛋白酶單抗可與精漿中彈性硬蛋白酶相結(jié)合,結(jié)合的待測物再與特異性酶標記物反應(yīng),最后通過底物顯色,其吸光度大小與精漿標本中彈性硬蛋白酶濃度相關(guān)。23【臨床意義】

男性生殖道感染時,分葉核粒細胞參與吞噬病原體等抗炎反應(yīng),并分泌大量彈性硬蛋白酶至胞外,彈性硬蛋白酶與其它氧化物質(zhì)(如活性氧、過氧化氫、氫氧根離子等)共同發(fā)揮局部抗炎效應(yīng)。彈性硬蛋白酶與隨后分泌的α1-蛋白酶抑制劑結(jié)合,形成彈性硬蛋白酶-α1-蛋白酶抑制劑復合物,該復合物濃度與彈性硬白酶釋放量高度相關(guān),可作為分葉核粒細胞生殖道抗感染的活性檢測指標。精漿彈性硬白酶可作為靜止型生殖道感染的診斷及愈后檢測指標(手冊第三版)242、精液白細胞過氧化物酶染色試劑盒【檢驗原理】

為WHO推薦檢測正甲苯胺方法。多形核粒細胞特有的過氧化物酶可將H2O2分解,產(chǎn)生新生態(tài)氧,使正甲苯胺被氧化成正甲苯胺藍,后者進而形成棕色物使細胞著色。25【臨床意義】

精液中常含有一定量的非精子細胞成分,統(tǒng)稱為“圓細胞”,包括泌尿生殖道的上皮細胞、前列腺細胞、生精細胞和白細胞。過多的白細胞(白細胞精子癥)可能與感染和精液質(zhì)量差有關(guān)。僅通過直接鏡下觀察或一般染色方法難以正確分辨精液白細胞。當精液中白細胞數(shù)目多時(≥1×106/ml),應(yīng)該進行微生物學試驗以證實有無附性腺的感染,還包括進行精漿生化方面的分析,因為附性腺的感染經(jīng)常引起分泌功能的異常。然而無白細胞不能排除附性腺感染的可能性。26四、精子功能質(zhì)量檢測試劑1、精子的形態(tài)功能2、精子的膜功能3、精子的頂體功能4、精子的核功能27精子快速染色試劑盒(Diff-Quik)【檢驗原理】

本試劑盒采用細胞內(nèi)不同等電點的蛋白質(zhì)在相同的酸度下帶不同的電荷,能選擇性地結(jié)合相應(yīng)的染料而著色。本試劑盒的尼羅藍、亞甲基藍等成分著染精子頂體區(qū)、頭部、尾部成不同的顏色。實驗操作約需1分鐘,本試劑染色效果等同于改良巴氏染色法,但操作更簡單、省時。(一)精子形態(tài)分析28【臨床意義】

精子畸形率越高,生育機會越低,而流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不良、死胎的可能性就越大。當精子畸形率>70%或畸形精子指數(shù)TZI>1.6時,可引起生育障礙,導致不育癥。來自輸助生殖技術(shù)項目的資料表明,使用本方法所描述的分類方法,如果正常形態(tài)的精子數(shù)低于15%或SDI>1.6時,體外受精率降低。本試劑盒采用WHO推薦的Diff-Quik染色方法,適用于精子形態(tài)檢查等。而精子形態(tài)學檢測對于評價男性生育能力、輔助生殖方法的選擇起很重要的作用。29

在精子功能檢測中,精子膜功能試驗也引起人們的關(guān)注。精子膜上含有豐富的多聚不飽和脂肪酸及多種蛋白成分,精子膜的功能與精子獲能、頂體反應(yīng)及精卵融合密切相關(guān)。精子膜功能的測定,可預測精子的受精能力。(二)精子膜功能檢測301、精子膜功能檢測試劑盒(HOS)【檢驗原理】

精子在低滲溶液中,必須重新建立細胞內(nèi)外液體間的平衡,水分子通過精子膜進入精子,使精子尾部可發(fā)生不同程度的膨脹,精子尾部的膜比精子頭部的膜更柔軟、疏松,液體容易滲入尾部。如細胞膜無損傷,在低滲溶液中尾部應(yīng)整體腫脹,如尾膜損傷或不完整,僅局部腫脹或不腫脹。31【臨床意義】

精子膜低滲膨脹試驗(HOS)是檢查精子存活力的補充試驗方法,有學者認為HOS可作為精子膜功能指標之一使用。大多數(shù)學者認為HOS是一項有價值的檢測指標,并贊成將HOS列為不育精液的常規(guī)檢驗項目。322、精液乳酸脫氫酶-x同功酶定量檢測試劑盒【檢驗原理】

乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X或LDH-C4)對于碳鏈長于丙酮酸的a-酮酸的親合力強于其他LDH同工酶。反應(yīng)原理如下:長鏈a-酮酸+NADHNAD

于340nm波長監(jiān)測NADH的減少量可計算出LDH-X的絕對活性。LDH-X33【臨床意義】

本試劑盒采用WHO推薦的速率法,定量檢測人精液中乳酸脫氫酶X同工酶的含量,應(yīng)用于臨床精子膜功能及生精上皮狀態(tài)評價。

LDH-X也是評價精液質(zhì)量的可靠指標。34

羅比等對不育男性的精子和精漿中的LDH-X活性進行了測定,表明精漿/精子中LDH-X的比值在生育組、精液常規(guī)正常不育組(Ⅰ)及精液常規(guī)不正常的不育組(Ⅱ)和少精癥組依次為0.528、0.88、2.85和4.01,各不育組與生育組間均有顯著性差異,不育Ⅰ和Ⅱ組精漿中的LDH-X活性大于正常男性,精子LDH-X的活性(以mu/106表示)則小于正常男性。表明在考慮男性不育原因時,除生精上皮的功能完整性及其他因素外,精子膜的完整程度及其損壞原因也需引起足夠重視。35

精子頂體內(nèi)含有多種蛋白水解酶和磷酸脂酶。獲能的精子穿過卵丘細胞外基質(zhì)時被激活引發(fā)頂體反應(yīng),將頂體內(nèi)的酶釋放出來以溶解卵放射冠及透明帶。精子只有在體內(nèi)經(jīng)過獲能、頂體反應(yīng),才能穿入卵細胞與其融合,完成受精。因此,檢測精子是否發(fā)生頂體反應(yīng)有助于預測精子的受精能力。對頂體酶在受精生物學和男性不育中的診斷價值越來越引起人們的重視。(三)精子頂體功能檢測36精子頂體酶活性定量檢測試劑盒【檢驗原理】

精子頂體內(nèi)存在精氨酸酰胺酶,其活性可反映頂體酶全部活性。精氨酸酰胺酶以Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝?;桨罚˙APNA)為底物,分解產(chǎn)生有色產(chǎn)物—硝?;桨罚ㄟ^測定該產(chǎn)物量可推算出精氨酸酰胺酶的活性。37【臨床意義】

頂體酶存在于精子頂體內(nèi)膜及赤道部膜上,它是受精過程中重要的蛋白水解酶,通常以無活性形式存在。當精子頭部進入卵透明帶時,頂體酶原被活化為頂體酶水解卵透明帶,使精子穿過卵透明帶最終與卵子融合。頂體酶活性可反映精子質(zhì)量,頂體酶活力不足可能導致不育。臨床精子成活率低、死精子癥以及嚴重生殖系統(tǒng)感染,特別是溶脲支原體嚴重感染時可造成精子頂體酶活性降低。此外,更有意義的是通過精液常規(guī)難以鑒別不育原因者,往往頂體酶活性低。頂體酶活性是判斷男性精子功能和生育力強弱的重要評價指標。38

精子核是精子重要的細胞器,包涵了父方的遺傳物質(zhì)。

在精子發(fā)生過程中,各期生精細胞核內(nèi)DNA的含量發(fā)生規(guī)律性變化,與核DNA結(jié)合的核蛋白也發(fā)生組型轉(zhuǎn)換(即從組蛋白→過度蛋白→魚精蛋白)。成熟的精子核內(nèi)DNA與魚精蛋白緊密結(jié)合,高度濃縮,抑制了基因的表達,使遺傳物質(zhì)保持穩(wěn)定。精子核成熟度直接影響精子的受精能力和受精后原核的形成及胚胎的著床。(四)精子核功能檢測391、精子核蛋白組型轉(zhuǎn)換半定量檢測試劑盒【檢驗原理】

精子發(fā)生成熟過程中,與精核DNA結(jié)合的堿性蛋白發(fā)生組型轉(zhuǎn)換,富含賴氨酸殘基的組蛋白逐漸被富含精氨酸和胱氨酸殘基的魚精蛋白所取代。酸性條件下,苯胺藍與賴氨酸殘基結(jié)合生成藍色化合物,從而指示富含賴氨酸殘基蛋白質(zhì)的存在。40【臨床意義】

睪丸精子發(fā)生過程中,精原細胞和精母細胞內(nèi)的核蛋白主要為體細胞型的組蛋白,富含賴氨酸。但到精子細胞階段,則組蛋白將逐漸被富含精氨酸與胱氨酸的魚精蛋白所取代。魚精蛋白能中和DNA電荷,并能抑制RNA的合成,也即抑制了基因表達。精子核攜帶著全部來自父方的遺傳信息,這些基因必須在受精后才開始表達。在受精前精子基因在魚精蛋白特殊保護下,緊密濃集,無任何DNA轉(zhuǎn)錄作用,無疑有重要生理意義。41

核蛋白組型轉(zhuǎn)換缺陷或異??梢鹉行圆挥蚺咛ピ缙谪舱哿鳟a(chǎn),其機理為:①使精子DNA不穩(wěn)定,易受損傷而不能受孕;②一旦受精,由于核蛋白組型異常,精子核不能正常解聚,從而影響了雌雄原核的融合;③胚胎不能正常發(fā)育,造成胚胎夭折而流產(chǎn)。422、精子核染色檢測試劑盒(吖啶橙法)

【檢驗原理】

精子發(fā)生過程中,魚精蛋白逐步取代組蛋白與DNA結(jié)合。精子進入附睪后,魚精蛋白的組成不再改變。但精子在附睪成熟過程中,魚精蛋白中大量的巰基(SH)不斷氧化成二硫基(S=S)與DNA更緊密地結(jié)合,使DNA更具有抗酸能力,維持了雙鏈結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。而一些不成熟的精子魚精蛋白中多數(shù)SH未被氧化,DNA在酸的作用下變性成單鏈。吖啶橙可與雙鏈DNA結(jié)合呈單體形式發(fā)出綠色熒光,與單鏈DNA結(jié)合呈聚合物形式發(fā)出紅色或黃色熒光。43【臨床意義】

精子核占精子頭部的65%,由魚精蛋白和DNA組成,成年男性排出的精子中有雙鏈DNA精子,也有單鏈DNA精子,其中只有雙鏈DNA精子才具有受精能力。熒光染料吖啶橙可區(qū)別單鏈或雙鏈DNA,從而反映精子核DNA的成熟度以評估男性的生育能力。人精子染色質(zhì)DNA不完整,可以造成受精卵發(fā)育異常、發(fā)育終止,導致流產(chǎn)、不育。所以精子DNA完整性檢查和精液常規(guī)分析一起檢查,可以更全面地了解男子的生育能力,是一項檢測精子受精功能、預判胚胎發(fā)育的實驗室指標。44五、男性生精功能檢測試劑1、乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X)2、抑制素B(InhibinB)451、精液乳酸脫氫酶-x同功酶定量檢測試劑盒【檢驗原理】

乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X或LDH-C4)對于碳鏈長于丙酮酸的a-酮酸的親合力強于其他LDH同工酶。反應(yīng)原理如下:長鏈a-酮酸+NADHNAD

于340nm波長監(jiān)測NADH的減少量可計算出LDH-X的絕對活性。LDH-X46【臨床意義】

本試劑盒采用WHO推薦的速率法,定量檢測人精液中乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X

)的含量,應(yīng)用于臨床精子膜功能及生精上皮狀態(tài)評價。

乳酸脫氫酶同工酶X同功酶與糖的酵解活動密切相關(guān),LDH-X酶主要分布在成熟雄性生殖細胞線粒體內(nèi),它對精子的發(fā)生和成熟起著重要作用。47

測定精液LDH-X并結(jié)合激素(特別是抑制素B)水平測定,可作為評價生精上皮狀態(tài)指標。嚴重少精癥者,精液LDH-X活性很高,提示病人精子發(fā)生正常。而不育患者精子計數(shù)正常,精液LDH-X活性低下,則提示精子分化受到損害或抑制。48

LDH-X活性和相對活性與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關(guān),活性減低可致生育力下降。LDH-X活性可作為評價男性生育功能的指標。睪丸萎縮患者,LDH-X活性降低或消失。長期服用棉酚可致精子生成障礙,甚至無精子生成,精液LDH-X活性也降低或甚至消失。這說明

LDH-X活性與睪丸生精功能有關(guān),是病人睪丸生精功能的良好指標

。492、抑制素B(InhibinB)檢測的意義

抑制素是由睪丸的Leydig和Sertoli細胞產(chǎn)生的調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌與評估男性生殖功能的一個重要的激素。抑制素B是精子發(fā)生的標志物,在評估精子發(fā)生,抑制素B比促卵泡生成激素(FSH)更可靠。同時檢測抑制素B和FSH水平,是評估精子發(fā)生的最好方法,有助于鑒別睪丸和非睪丸原因?qū)е碌木用芏犬惓!?0

抑制素B比FSH和睪丸體積能更準確地預測TESE時能否獲得精子。有研究表明:選定精漿抑制素B與血清抑制素B比值1.00,用于預測無精子病人存在睪丸生精功能障礙,當比值>1.00時推斷睪丸生精功能障礙的靈敏度和特異度都為100%。這為鑒別無精子癥患者的睪丸生精功能狀態(tài),推斷精路通暢情況提供了極具應(yīng)用價值的指標。51六、其他產(chǎn)品1、精液液化劑2、高活力精子提取液3、精液定量采樣杯521、精液液化劑(1)用于處理精液液化障礙的精液標本;(2)目前市場最為穩(wěn)定、方便使用的液化劑;(3)液化劑對其他精液相關(guān)檢測項目無明顯干擾。532、高活力精子提取液【原理】

活動精子具有自主泳動能力,會從試管底部向上游動,接近培養(yǎng)液的頁面層,從而可與死精子、凝集精子、畸形精子、白細胞等雜質(zhì)分離。吸取試管液面上層培養(yǎng)液,即可收集到高活力的精子。54【意義】

上泳法是臨床常用的精子優(yōu)選方法,具有操作簡單,無損提取精子等優(yōu)點,能顯著提高活動精子數(shù)和前向運動精子數(shù)。

在進行MAR實驗時,少精子及弱精子標本中高活力精子數(shù)量過少,MAR試驗結(jié)果難以觀測,通過高活力精子提取液提取高活力精子,可優(yōu)化觀測結(jié)果,避免假陽性出現(xiàn)。553、精液定量采樣杯(1)專利產(chǎn)品;(2)廣口收集器與管體科自由拆裝,既便于精液標本的采集,又利于試驗標本的保管和使用;(3)可對精液標本的體積準確測量;(4)采樣杯經(jīng)特殊處理,清潔無離子,更方便臨床使用(如精漿鋅定量檢測)。56(1)使用前撕開包裝袋,安裝標本接口(如圖1);(2)正對標本接口射入精液(如圖2);(3)待精液完全流至管體內(nèi)后,拔出標本接口(如圖3);(4)蓋緊管塞(如圖4),標本送檢。57男性不育診斷

組項分析581、尋找不育病因2、多指標分析有利于提高檢測結(jié)果的可靠性3、明確治療方向4、為輔助生殖提供技術(shù)分析5、療效評價與監(jiān)測

組項分析的意義59男性不育是系統(tǒng)性的疾病治療方式要求系統(tǒng)性和綜合性診斷也要求做到系統(tǒng)性和全面性60世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于男性不育的診斷流程圖性功能及射精功能的檢查檢測精子有無抗體包裹精液(精漿和精子)各指標的檢測分析導致不育的因素睪丸體積及卵泡刺激素(FSH)睪丸活檢,生精過程的檢測61性功能及射精功能異常正??贵w包裹的精子陽性免疫因素不育陰性精子的各參數(shù)精漿檢查不明原因不育單純精漿異常不育異常正常正常性功能和射精功能障礙導致不育的因素異常是激素檢查(T低+FSH不升高或PRL升高)內(nèi)分泌因素不育是感染指標檢查附屬性腺感染不育是精索靜脈曲張精索靜脈曲張不育是獲得性睪丸因素繼發(fā)性睪丸損傷不育是先天性因素先天性因素不育是全身性疾病或環(huán)境因素全身性疾病因素不育是醫(yī)源性因素醫(yī)源性因素不育是無致病因素精子有精子密度特發(fā)性少精癥/隱匿精子癥異常精子活力特發(fā)性弱精子癥異常正常精子形態(tài)特發(fā)性畸形精子癥異常正常未發(fā)現(xiàn)睪丸體積及FSH特發(fā)性無精子癥異常睪丸活檢/生精發(fā)生不全梗阻性無精子癥完全621、應(yīng)用手淫的方法將全部精液射入帶有刻度潔凈的容器內(nèi)(如需做微生物學分析,受檢者應(yīng)先排尿,然后沖洗雙手和陰莖后進行),而且精液采集一定要求完全,因前段精液中精子密度較高,精漿中的中性a-葡萄糖苷酶等生化指標是以每次射精總量來計算的,若丟失部分精液,會影響檢測結(jié)果的準確性。一、精液常規(guī)分析的標準采集方法632、對確實不能在醫(yī)院采精室內(nèi)手淫取精,而必須在家或賓館取精者,可在檢驗室領(lǐng)取有蓋取精杯,采精后蓋嚴,放在貼身的衣袋內(nèi)保溫,于1小時內(nèi)送到檢驗室,并向檢驗師講清采精的確切時間,以便準確觀察精液液化情況。641、采集時間:

標本的采集時間最好在禁欲48小時后(2天),但不長于7天。禁欲的時間亦包括沒有遺精或手淫排精。為減少精液分析結(jié)果的波動,每次復查禁欲的時間盡可能恒定。一般認為25歲以下禁欲3天,25~35歲禁欲5天,35~45歲禁欲7天,這樣取樣更好。精液采集間隔時間過長或過短對精子的數(shù)量、活力、活率都有影響。有報道在排精后4天,通常出現(xiàn)持久明顯的精子數(shù)量增加,4天后精子數(shù)量增加緩慢,長期禁欲伴隨死精子數(shù)增多,異常精子率增高。所以WHO對精液的采集時間要求為禁欲后2~7天進行。二、精液標本采集的要求652、精液分析的標準采集次數(shù):

首次進行精液分析應(yīng)采集2份標本,兩次采集時間的間隔應(yīng)大于7天,但不能超過3周。應(yīng)在盡可能短的時間內(nèi)采集第二次標本,因為精子生成密度與營養(yǎng)、季節(jié)的變化相關(guān)。如果兩次分析的結(jié)果相差顯著,應(yīng)再次采集進行第三次的補充分析,因為每個男人的精子產(chǎn)量可有相當大的波動。66圖示:每2周檢測一次某人精液中的精子密度,連續(xù)120周,此為其精子密度圖。該數(shù)據(jù)清楚顯示男性精液中的精子密度的有顯著性的波動。673、標本的轉(zhuǎn)送:

精子的活力會隨時間而下降,標本應(yīng)在采集后1小時內(nèi)送至實驗室,溫度應(yīng)保持在25~37℃左右。為防止標本在轉(zhuǎn)運過程中溫度波動過大,一般保持在20℃以上,但不能超過40℃。溫度過低可降低精子活力,溫度過高可引起精子損傷。684、收集標本后的要求及注意事項:

(1)采集不完整的精液標本不宜進行分析。(2)轉(zhuǎn)送時間超過1小時的標本不宜分析。(3)不液化或不完全液化的精液標本,應(yīng)加酶使其完全液化后方可做分析。69世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于男性不育的診斷流程圖性功能及射精功能的檢查檢測精子有無抗體包裹精液(精漿和精子)各指標的檢測分析導致不育的因素睪丸體積及卵泡刺激素(FSH)睪丸活檢,生精過程的檢測70

遵照世界衛(wèi)生組織(WHO)對于男性不育的標準化檢測與診療的流程,如果男性不育癥患者的性功能和射精能力正常,則需進一步進行精液的常規(guī)檢查分析。

2000年世界衛(wèi)生組織制訂了《世界衛(wèi)生組織男性不育標準化檢查與診療手冊》(WHOmanualforthestandardizedinvestigation,diagnosisandmanagementoftheinfertilemale),對于“精液分析”確定了具體的檢查指標。三、精液的常規(guī)檢查項目

71精液分析日期第一次分析第二次分析年

日年

日1禁欲時間(天)2精子分析(1)密度(×106/ml)(2)活力(%)(a)快速直線前向運動(b)前向運動(c)緩慢或非前向運動(d)不動(3)存活率(%)(4)形態(tài)(%正常形態(tài))723免疫珠或MAR試驗(%陽性)4凝集□無□有□無□有5精漿分析(1)容積(2)外觀和粘稠度□均正?!醍惓!蹙!醍惓#?)pH(4)生化檢測□正常□異?!跽!醍惓?白細胞(×106/ml)7其他圓形細胞(×106/ml)8細菌培養(yǎng)□陰性□陽性□陰性□陽性9精液離心后精子□有□無□有□無73

精液的常規(guī)檢查應(yīng)首先判斷患者是否為“免疫性不育”,檢測患者的精子是否包被有抗體;同時分析精液的理化性質(zhì)(包括精液的酸堿度、液化情況、外觀、體積、粘稠度);再進行精漿的生物化學性質(zhì)的檢測(包括精漿的鋅、檸檬酸或酸性磷酸酶等),以及精子生育能力方面的檢測(包括精子密度、活力、凝集、存活率、形態(tài)和精液中非精子細胞成分等)。741、精子膜表面抗體檢測(MAR/IBT):檢測精子是否包被有抗體2、精液的物化性質(zhì)的測定:測定精液的pH值、液化、外觀、體積、粘稠度3、精漿的鋅、檸檬酸或酸性磷酸酶檢測:分析精漿的生物化學性質(zhì)。精漿鋅、檸檬酸或酸性磷酸酶分析前列腺功能。精液常規(guī)檢查的主要包括以下項目:754、計算機輔助精液分析(CASA):測定精子密度、活力、凝集等5、精子低滲膨脹實驗(HOS)或伊紅Y染色實驗:檢測精子的存活率6、精液白細胞過氧化物酶染色實驗:檢測精液中非精子細胞成分(主要是白細胞)7、精子形態(tài)學快速染色(Diff-Quik、改良巴氏染色或Shorr染色)實驗:進行精子的形態(tài)學評估分析76附睪睪丸輸精管精囊輸精管前列腺尿道球腺77

無精子癥是指患者的精液常規(guī)檢查中沒有發(fā)現(xiàn)精子,并且在精液和尿液進行離心后也不能發(fā)現(xiàn)精子。

無精子癥產(chǎn)生的主要原因有兩方面:

(1)男性的睪丸疾患,致使睪丸不能夠產(chǎn)生精子;(2)是睪丸生精功能正常,但是從附睪→輸精管→精囊腺→前列腺的精子輸送管道發(fā)生了梗阻,致使精子無法進入到排出的精液中。四、無精子癥組項分析的內(nèi)容78無精子癥的檢測項目在“精液常規(guī)檢查七個項目”的基礎(chǔ)上,可進一步進行以下項目的檢測和分析:1、精液沉渣和尿液沉渣鏡檢:確認精液和尿液中精子密度(確認有無精子)2、精漿果糖測定:判斷精囊腺或輸精管是否正常,有無梗阻3、精漿中性α-葡糖苷酶測定:檢測附睪的功能是否正常794、精漿彈性硬蛋白酶的測定或精液培養(yǎng)實驗:確認生殖道是否感染,有無梗阻5、分析睪丸的生精功能:(1)激素檢測,測定血清中卵泡刺激素(FSH)和血清抑制素B(血清抑制素B比FSH更能直接反映睪丸的生精狀況,同時檢測抑制素B和FSH是評估精子發(fā)生的最好方法。):分析性腺的機能是否正常、判斷睪丸的生精功能(2)精液乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X)測定:判斷睪丸的生精功能(3)睪丸活檢:檢測睪丸中是否存在正常精子806、染色體核型、Y染色體微缺失檢測:分析是否由于遺傳缺陷因素造成的無精癥7、男性生殖系統(tǒng)身體檢查(包括輸精管和精囊造影、經(jīng)直腸B超檢查、睪丸彩色多普勒超聲等):檢查各生殖器官是否正常8、陰囊探查:影像學進一步確診附睪和輸精管是否阻塞81

弱精子癥是指患者的精子數(shù)量或密度正常,只是精子的活力不足。影響精子活力的原因較多,主要有:①生殖腺和生殖道的疾患或感染;②免疫因素;③精索靜脈曲張;④內(nèi)分泌因素;⑤精漿異常;⑥環(huán)境因素;⑦全身性疾病;⑧醫(yī)源性因素;⑨先天性疾病。

五、弱精子癥組項分析的內(nèi)容

82弱精子癥的檢測項目在“精液常規(guī)檢查七個項目”的基礎(chǔ)上,可進一步進行以下項目的檢測和分析:1、精漿彈性硬蛋白酶的測定或精液培養(yǎng)實驗:確認生殖道有無感染2、精子膜表面抗體檢測(MAR/IBT):

再次確認精子是否包被有抗體833、精漿生化分析:(1)精漿中性α-葡糖苷酶測定:確認附睪的功能是否正常

(2)精漿果糖測定:判斷精囊腺是否正常

(3)精漿鋅、檸檬酸或酸性磷酸酶的測定:

再次確認前列腺的功能是否正常

844、精液乳酸脫氫酶X同工酶(LDH-X)測定:檢測生精功能和精子活力5、激素檢測,測定血清中的睪酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL):內(nèi)分泌因素分析6、患者體格檢查:檢查有無精索靜脈曲張、先天性疾病和全身性疾病7、患者病史采集:分析醫(yī)源性的因素

85

少精子癥是指患者的精液中存在精子,但精子的密度或數(shù)量不足。引起少精子癥的原因多見于:①精索靜脈曲張;②免疫因素的抗精子抗體;③生殖腺和生殖道的疾患或感染;④隱睪;⑤染色體異常;⑥環(huán)境因素及藥物影響;⑦營養(yǎng)缺乏及全身性疾病。六、少精子癥組項分析的內(nèi)容

86少精子癥的檢測項目在“精液常規(guī)檢查七個項目”的基礎(chǔ)上,可進一步進行以下項目的檢測和分析:1、精漿彈性硬蛋白酶的測定或精液培養(yǎng)實驗:確認生殖道有無感染2、精漿生化分析:(1)精漿中性α-葡糖苷酶測定:再次確認附睪的功能是否正常(2)精漿果糖測定:判斷精囊腺或輸精管是否正常(3)精漿鋅、檸檬酸或酸性磷酸酶的測定:再次確認前列腺的功能是否正常873、染色體核型、Y染色體微缺失檢測:分析遺傳因素4、患者體格檢查:檢查有無睪丸、隱睪、精索靜脈曲張、營養(yǎng)和全身性疾病5、患者病史采集:分析環(huán)境和藥物的因素88

畸形精子癥是指患者的精子數(shù)量或密度正常,精子活力檢測也都正常,但是精子形態(tài)正常率低于實驗室的正常參考值。引起畸形精子癥的原因有:①生殖腺和生殖道的疾患或感染;②精索靜脈曲張;③環(huán)境因素;④遺傳因素;⑤藥物因素;⑥高溫、放射等物理因素。七、畸形精子癥組項分析的內(nèi)容

89畸形精子癥的檢測項目在“精液常規(guī)檢查七個項目”的基礎(chǔ)上,可進一步進行以下項目的檢測和分析:1、精子形態(tài)學快速染色(Diff-Quik)實驗(精子胞漿小滴計數(shù)):確認精子形態(tài)的正常率2、精漿彈性硬蛋白酶的測定或精液培養(yǎng)實驗:確認生殖道有無感染3、染色體核型、Y染色體微缺失檢測:分析遺傳因素4、患者體格檢查:檢查有無精索靜脈曲張5、患者病史詳細采集:分析環(huán)境、藥物、高溫和放射等因素90

精液量少的患者是指完全射精后精液的體積少于2ml。造成精液量少的主要因素有:①逆行射精或不完全性逆行射精;②人為因素(精液標本收集不全);③前列腺和精囊腺的感染;④射精管阻塞及精囊腺發(fā)育不全;⑤內(nèi)分泌因素。八、精液量少組項分析的內(nèi)容

91精液量少的檢測項目在“精液

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