紫花地丁水浸出物抗乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究的任務(wù)書

紫花地丁水浸出物抗乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究的任務(wù)書一、研究背景與意義乙型肝炎病毒（HBV）是一種致病性病毒，全球范圍內(nèi)約有2億人攜帶該病毒。HBV感染可引發(fā)急性或慢性乙型肝炎，甚至導(dǎo)致肝硬化和肝癌。目前，雖然有乙肝疫苗可以預(yù)防感染，但治療乙型肝炎仍然是一項(xiàng)難題，目前臨床上使用的治療方法效果不盡如人意，且存在一定副作用。因此，尋找一種安全有效的治療方法，具有重要的臨床意義。紫花地丁水浸出物（PE）是傳統(tǒng)中藥，被廣泛運(yùn)用于臨床上，具有清熱解毒、利尿退黃、消腫止痛等功效。在過去的一些研究中，證明PE具有抗氧化、抗炎、抗病毒等作用。因此，本研究將探討PE對HBV的抗病毒活性，并為開發(fā)具有抗HBV活性的中藥提供科學(xué)依據(jù)。二、研究內(nèi)容/目標(biāo)本研究的主要內(nèi)容是探討PE對HBV的抗病毒活性。具體研究內(nèi)容如下：1.確定PE的濃度-反應(yīng)時間殺毒曲線；2.探究PE對HBVRNA復(fù)制的影響；3.探究PE對HBV核心蛋白（HBcAg）合成的影響；4.探究PE對HBV表面抗原（HBsAg）的影響；5.探究PE對HBV包膜蛋白（HBVS）合成的影響。三、研究方法1.實(shí)驗(yàn)物質(zhì)：PE、HBV；2.滅毒處理：HBV用過氧化氫（H2O2）滅毒；3.病毒感染：用HBV滅毒液感染培養(yǎng)的肝細(xì)胞；4.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：MTT方法；5.濃度-反應(yīng)時間殺毒曲線實(shí)驗(yàn)；6.qRT-PCR實(shí)驗(yàn)：沖式PCR（ABIPrism7300）；7.免疫印跡實(shí)驗(yàn)：Westernblot；8.統(tǒng)計(jì)分析：SPSS21.0。四、預(yù)期結(jié)果通過本研究，預(yù)計(jì)可以獲得以下結(jié)果：1.獲得PE的濃度-反應(yīng)時間殺毒曲線；2.證明PE能夠顯著抑制HBVRNA復(fù)制；3.發(fā)現(xiàn)PE能夠抑制HBcAg合成，降低HBVDNA含量；4.發(fā)現(xiàn)PE能夠抑制HBsAg表達(dá)，顯示PE對HBV外殼蛋白的影響；5.發(fā)現(xiàn)PE能夠抑制HBVS合成，標(biāo)志性地證實(shí)了PE具有對HBV包膜蛋白的影響。五、實(shí)驗(yàn)安全與倫理本研究實(shí)驗(yàn)將在符合生物安全法規(guī)定的條件下進(jìn)行，病毒感染前將進(jìn)行滅菌處理以及符合實(shí)驗(yàn)安全標(biāo)準(zhǔn)的防護(hù)措施。六、參考文獻(xiàn)1.ZhangY,etal.ProtectiveeffectofpolyphenolsextractofPolygonumcapitatumagainstoxidativedamageinliverofmiceinducedbydiquat[J].InternationalJournalofClinicalandExperimentalMedicine,2016,9(1):1849-1858.2.HsuTH,etal.SweetpotatoleafextractinhibitshepatitisBvirusreplicationinhumanHepG2cells[J].JournalofMedicinalFood,2013,6(4):364-369.3.ZhengYF,etal.Antiviralactivityofpolygonumcapitatumonhepatitis