實(shí)時(shí)熒光定量pcr快速檢測(cè)登革熱病毒

實(shí)時(shí)熒光定量pcr快速檢測(cè)登革熱病毒

發(fā)燒通常流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。這是一種通過蚊子傳播的急性病毒性傳染病，為《中華人民共和國(guó)傳染病防治條例》規(guī)定的乙類傳染病。我國(guó)的廣東、福建省是登革熱流行區(qū),多為小規(guī)模流行或散發(fā),其他地區(qū)如浙江、湖北等省也常有輸入性病例發(fā)生。2007年9月3日,浙江省麗水市中心醫(yī)院收治了1例疑似登革熱患者,在現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)登革熱病毒(denguevirus,DEN)核酸的動(dòng)態(tài)變化檢測(cè),迅速確認(rèn)該患者為登革熱實(shí)驗(yàn)室診斷病例,病原體為登革Ⅲ型病毒。1患者一般資料及熱反應(yīng)情況患者,男,22歲,學(xué)生。2007年暑期,患者赴柬埔寨(為登革熱疫區(qū))探親,主訴有蚊蟲叮咬史,未接種登革熱疫苗。2007年8月27日患者回國(guó),8月29日自覺不適,夜間體溫均38℃左右,伴明顯頭痛,顏面潮紅同時(shí)伴隨肌肉痛、關(guān)節(jié)痛;無出血癥狀,皮疹和出血點(diǎn)明顯。曾接受抗生素治療,熱不退,伴隨癥狀無緩解,尿色深如濃茶水樣。9月3日轉(zhuǎn)到麗水市中心醫(yī)院就診。根據(jù)其臨床表現(xiàn)和外出史(患者曾經(jīng)去過登革熱疫區(qū)),診斷為登革熱疑似病例。2實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果1igm血清抗體患者發(fā)病第7d(9月4日)血清革熱IgM血清抗體A值為0.236和0.237(臨界值0.250),高度疑似陽性,第13d血清中IgM抗體陽性。2第7d病毒刑罰執(zhí)行下降患者發(fā)病第2d,通用型核酸檢測(cè)顯示血清中登革熱病毒核酸含量較多,經(jīng)過治療,于第7d病毒拷貝下降(圖1)。發(fā)病第2d,登革熱病毒分型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型)核酸熒光檢測(cè)確定感染病毒為登革熱Ⅲ型病毒(圖2);發(fā)病第13d血清登革Ⅲ型病毒核酸檢測(cè)陰性(圖3)。3診斷根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果,結(jié)合流行病學(xué)資料,該患者確診為登革熱,感染病毒為登革熱病毒Ⅲ型。實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)登革熱抗體的必要性DEN屬披膜病毒科黃病毒屬,經(jīng)白紋伊蚊和埃及伊蚊傳播。血清學(xué)上根據(jù)E蛋白抗原性不同分為I、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。DEN感染人類不僅可引起登革熱,還可引起登革出血熱(denguehemorrhagicfever,DHF)和登革休克綜合癥(dengueshocksyndrome,DSS),可導(dǎo)致30%～40%的患者死亡。據(jù)估計(jì),全世界每年登革熱發(fā)病人數(shù)約6千萬,受威脅人口約25億,已成為世界上分布廣、發(fā)病率高、危害較大的一種蟲媒病毒性疾病,是全球性重要公共衛(wèi)生問題。近年來由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展以及國(guó)際航線的增開,使得在柬埔寨等東南亞國(guó)家感染登革熱病毒的人員在歸國(guó)時(shí)并無發(fā)熱、頭痛等明顯臨床癥狀,能輕易從空路入境并散布全國(guó)各地,發(fā)病后又因認(rèn)識(shí)不足而得不到正確診斷及合理處置,若患者居住在南方熱帶、亞熱帶地區(qū),極有可能通過當(dāng)?shù)匕准y伊蚊、埃及伊蚊等傳播登革熱,甚至引起暴發(fā)流行,故在發(fā)病初期迅速確定病原體對(duì)于控制疫情的播散是非常重要的。本例患者入院時(shí)即已考慮登革熱,在開展常規(guī)ELISA檢測(cè)登革熱IgM抗體的同時(shí),對(duì)發(fā)病初期、發(fā)病中期及恢復(fù)期的血清用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行了登革熱病毒的檢測(cè)及分型。血清IgM抗體檢測(cè)結(jié)果顯示,患者發(fā)病第2d為陰性,第7d疑似陽性,第13d呈陽性。熒光PCR檢驗(yàn)結(jié)果提示,在患者出現(xiàn)癥狀的第2d血清中檢出登革Ⅲ型病毒核酸,且含量較高;經(jīng)過治療,于第7d登革Ⅲ型病毒拷貝數(shù)顯著降低,第13d時(shí)血清中已檢測(cè)不到病毒。表明實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法更敏感,更適合于登革熱病毒感染的早期診斷。麗水市非登革熱疫區(qū),本次對(duì)疑似病例用傳統(tǒng)的ELISA方法檢測(cè)抗體,同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法快速確診,為疫情的及時(shí)處理贏得了時(shí)間,未造成擴(kuò)散。但該病例的發(fā)生給本地區(qū)的登革熱防治工作敲響了警鐘,對(duì)流行季節(jié)(3～10月份)前往疫區(qū)的務(wù)工人員和旅行者在歸國(guó)入境時(shí)要觀測(cè)其體溫,若發(fā)現(xiàn)體溫升高應(yīng)立即隔離治療,對(duì)歸國(guó)1周內(nèi)出現(xiàn)體溫升高、發(fā)熱、疼痛癥狀,血WBC、淋巴細(xì)胞和PLT計(jì)數(shù)低于正常者要考慮登革熱的可能,要及時(shí)診治,以防疫情的發(fā)生。*材料和方法2.1esa顯示血清樣的熱igm抗體2.2實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)3登革熱病毒igm及igm共感染病毒檢測(cè)試劑參照衛(wèi)生部2001年制定的登革熱診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則和2005年制定的全國(guó)登革熱監(jiān)測(cè)方案(試行)。登革熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒購(gòu)自中山生物工程有限公司,按試劑盒說明書操作。登