不同劑量磷酸替米考星可溶性粉對(duì)人工感染豬支原體肺炎的治療效果

不同劑量磷酸替米考星可溶性粉對(duì)人工感染豬支原體肺炎的治療效果

豬感染的豬支炎是一種慢性感染疾病，發(fā)病率高，死亡率低。慢性肺炎是豬的常見表現(xiàn)。如果同時(shí)感染其他病毒，動(dòng)物可能會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、厭食、呼吸困難和萎縮。該病在不同日齡的同圈豬之間可以互相傳染,導(dǎo)致感染豬的日增重降低、死亡率增加、飼養(yǎng)效率降低及治療成本上升,從而造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。替米考星是大環(huán)內(nèi)酯類畜禽專用抗生素,具有很強(qiáng)的抗菌活性,因其耐藥性低、抗菌譜廣,對(duì)所有的革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌、支原體、螺旋體等均有抑制作用,從而被廣泛應(yīng)用于治療山羊、奶牛、豬、雞等動(dòng)物的感染性疾病。然而,由于替米考星不溶于水,不管是口服還是注射都影響其使用效率。而磷酸替米考星是替米考星與3,5-二甲基哌啶反應(yīng)生成替米考星堿,再加磷酸和水后形成的。因其易溶于水,所以在未來獸醫(yī)臨床上具有更加廣泛的應(yīng)用潛在可能性。為了客觀評(píng)價(jià)磷酸替米考星可溶性粉對(duì)豬支原體肺炎的治療效果,同時(shí)也為確定其在臨床上的使用劑量和治療效果,筆者進(jìn)行了該療效試驗(yàn)。1材料和方法1.1合成固體制劑為整合劑的固體制劑磷酸替米考星可溶性粉(10g/0.1kg)受試藥(批號(hào)20110401,標(biāo)示量為94.0%)由寧夏泰瑞制藥股份有限公司提供;對(duì)照藥物枝力清(替米考星可溶性粉,10g/0.1kg,批號(hào)11020601,標(biāo)示量為90.7%)由瑞普(天津)生物藥業(yè)有限公司提供。1.2蘑菇豬肺炎支原體強(qiáng)毒株(豬肺炎支原體組織強(qiáng)毒AH株凍干菌苗)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所邵國青博士提供。1.3試驗(yàn)前豬抗體陽性檢測(cè)100頭40日齡左右,體重10kg±2kg的健康普通斷奶長白豬仔豬,公母兼有,購自江蘇省南京市浦口區(qū)石佛寺頂山養(yǎng)殖場(chǎng)(斷奶仔豬試驗(yàn)前未曾接種豬支原體肺炎疫苗,試驗(yàn)前經(jīng)血清學(xué)抽檢證實(shí)為豬支原體肺炎抗體陰性)。試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)仔豬均按常規(guī)飼養(yǎng),飼喂不含任何抗菌藥物的飼料,自由飲水和采食。1.4疫苗和稀釋溶液用無菌生理鹽水稀釋豬肺炎支原體組織強(qiáng)毒AH株凍干菌苗,即每瓶毒株稀釋為25mL接種菌液,使細(xì)菌濁度達(dá)到1×109ccu/mL。1.5受試豬的接種試驗(yàn)前將100頭受試豬每頭豬稱重,并按體重公母搭配。除10頭作為健康對(duì)照的受試豬以外,其余90頭受試仔豬分別于氣管內(nèi)注射接種豬肺炎支原體菌液,5mL/頭,10頭健康對(duì)照組試驗(yàn)仔豬于氣管內(nèi)注射無菌生理鹽水,5mL/頭。人工感染后每天進(jìn)行臨床觀察,記錄精神狀態(tài)、食欲及呼吸等。1.6試驗(yàn)豬分組及給藥處理接種豬肺炎支原體組織強(qiáng)毒AH株后7～14d,各攻毒感染組仔豬逐漸開始表現(xiàn)出咳嗽、氣喘、精神沉郁、食欲下降、呼吸急促、張口呼吸等癥狀,而陰性對(duì)照組仔豬的健康狀況良好,未表現(xiàn)出以上癥狀。隨機(jī)將磷酸替米考星可溶性粉的使用劑量分別設(shè)為推薦中間劑量上下遞增和遞減的劑量組,試驗(yàn)豬分組及給藥處理情況見表1(各組豬的給藥劑量除了藥物對(duì)照組以替米考星有效成分計(jì)以外,其他用藥組豬均以磷酸替米考星計(jì))。開始給藥后每天觀察各組豬的呼吸、精神狀況、體溫、食欲和活動(dòng)情況等各種臨床反應(yīng),連續(xù)觀察15d。試驗(yàn)前后對(duì)每頭豬進(jìn)行稱重。1.7療效及相對(duì)增重率死亡率:出現(xiàn)典型的豬支原體肺炎臨床癥狀,尸體剖檢肺部有典型胰島樣病變特征,取肺組織可分離到豬肺炎支原體,即判定為感染死亡,死亡豬頭數(shù)占試驗(yàn)豬頭數(shù)的百分比即為死亡率。治愈率:試驗(yàn)期間,用藥后豬臨床癥狀消失,精神狀態(tài)、食欲、呼吸和體溫各方面均恢復(fù)正常,停藥后無復(fù)發(fā),根據(jù)治愈頭數(shù)占該組頭數(shù)的比例計(jì)算治愈率。有效率:已治愈的豬和給藥治療后精神狀態(tài)有明顯好轉(zhuǎn)、食欲增加,但伴有輕度腹式呼吸或咳嗽,均判定為有效,根據(jù)總有效頭數(shù)占該組試驗(yàn)頭數(shù)的比例計(jì)算總有效率。相對(duì)增重率:根據(jù)試驗(yàn)開始時(shí)及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每頭豬的體重,計(jì)算每頭豬的增重量,然后據(jù)此計(jì)算每組的平均增重。相對(duì)增重率是按各試驗(yàn)組與健康對(duì)照組的平均增重之比計(jì)算的,其中健康對(duì)照組設(shè)定為100%。支原體肺炎肺部病變?cè)u(píng)分:根據(jù)MADEC和KOBISCH(1982)評(píng)判方法對(duì)所有受試豬的肺部病變進(jìn)行評(píng)分。該方法根據(jù)7個(gè)肺葉病變程度按表評(píng)定,各肺葉得分相加即為肺部病變得分,最大得分為28分。試驗(yàn)中,副葉只觀察腹面評(píng)分,其他各肺葉檢查腹面和背面取平均分(見表2)。最終結(jié)果進(jìn)行四舍五入取整數(shù)。1.8數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理利用SPSS16.0軟件計(jì)算各組豬最終肺部病變?cè)u(píng)分、死亡率、治愈率、有效率和相對(duì)增重率之間的差異顯著性。2結(jié)果與分析2.1豬典型高效感染癥狀各組試驗(yàn)豬在試驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)后健康狀況良好,精神食欲正常,未見氣喘、咳嗽等臨床癥狀。而陽性對(duì)照組豬在接種菌液后第8天,開始出現(xiàn)不同程度的氣喘、咳嗽、精神沉郁、食欲不振、體溫升高、呼吸困難,呈犬坐姿勢(shì)等典型支原體感染癥狀。除健康對(duì)照組外,其余各感染豬肺炎支原體菌液組的受試豬也均開始出現(xiàn)氣喘、咳嗽、精神沉郁等癥狀,表明豬支原體肺炎人工感染模型建立成功。2.2磷酸替米考星可溶性粉對(duì)大鼠臟器組織病理學(xué)的影響試驗(yàn)過程中,陰性對(duì)照組試驗(yàn)豬除出現(xiàn)輕微感冒和拉稀等癥狀外未表現(xiàn)出氣喘、咳嗽等典型的豬肺炎臨床癥狀,最終的剖檢中其肺呈粉紅色至粉白色,未見到大面積肺實(shí)質(zhì)實(shí)變區(qū);而在陽性對(duì)照組中,試驗(yàn)豬表現(xiàn)出氣喘、慢性干咳、精神沉郁、食欲下降等癥狀,剖檢中在肺部的心葉、尖葉以及中間葉和膈葉等部位有明顯的大面積紫紅色到灰色實(shí)變區(qū)的典型豬支原體肺炎癥狀。各試驗(yàn)組的用藥試驗(yàn)豬中也表現(xiàn)出了不同程度的氣喘、食欲下降、精神沉郁、發(fā)熱等癥狀,在臨床剖檢中磷酸替米考星可溶性粉20mg/L組和40mg/L組的肺部紫紅色實(shí)變與陽性對(duì)照組相比略微好轉(zhuǎn)但是仍較為嚴(yán)重;而從磷酸替米考星可溶性粉60mg/L組起,包括磷酸替米考星可溶性粉80、100、120和240mg/L組,肺實(shí)變區(qū)域面積減小明顯,大部分肺部區(qū)域?yàn)檎５姆奂t色,質(zhì)地松軟。2.3兩組患者治療效果比較磷酸替米考星可溶性粉和對(duì)照藥物對(duì)人工誘發(fā)豬支原體肺炎受試豬的治療效果見表3。從表3可以看出,磷酸替米考星可溶性粉240mg/L組表現(xiàn)出最佳的治愈率,與磷酸替米考星可溶性粉120mg/L組、80mg/L組與60mg/L組相比,差異顯著(P<0.05),與100mg/L組相比效果相當(dāng),與磷酸替米考星可溶性粉40mg/L組、20mg/L組相比,差異極顯著(P<0.01);磷酸替米考星可溶性粉120mg/L組、100mg/L組、80mg/L組與60mg/L組的治愈率相當(dāng)(P>0.05),同時(shí)也與替米考星可溶性粉藥物對(duì)照組呈現(xiàn)的治愈率效果一致(P>0.05);但磷酸替米考星可溶性粉120mg/L組、100mg/L組、80mg/L組與60mg/L組以及替米考星可溶性粉藥物對(duì)照組與磷酸替米考星可溶性粉40mg/L組、20mg/L組相比,治愈率差異極顯著(P<0.01)。從藥物治療有效率的結(jié)果可以看出,磷酸替米考星可溶性粉240mg/L組、120mg/L組與100mg/L組相比,差異顯著(P<0.05),而與其他各用藥劑量組相比,差異極顯著(P<0.01);磷酸替米考星可溶性粉100mg/L組與80mg/L組、60mg/L組以及藥物對(duì)照組的治療效果相當(dāng),而與40mg/L組、20mg/L組相比,差異極顯著(P<0.01);而80mg/L組、60mg/L組與藥物對(duì)照組相比,差異不顯著(P>0.05),即80mg/L組、60mg/L組與替米考星可溶性粉藥物對(duì)照組顯示出相等的有效率(P>0.05)。由此可以看出,磷酸替米考星可溶性粉240mg/L組、120mg/L組、100mg/L組、80mg/L組、60mg/L組對(duì)豬支原體肺炎的治療效果顯著高于40mg/L組、20mg/L組;80mg/L組、60mg/L組磷酸替米考星可溶性粉對(duì)豬支原體肺炎的治療效果與替米考星可溶性粉藥物對(duì)照組的治療效果相當(dāng)。2.4對(duì)比治療組與其他治療組的相對(duì)增重率與空白對(duì)照組相比,陽性對(duì)照組受試豬的相對(duì)增重率最差,甚至磷酸替米考星可溶性粉20、40mg/L組受試豬的相對(duì)增重率也顯著低于其他各藥物治療組(P<0.01);磷酸替米考星可溶性粉240mg/L組顯示出最佳的相對(duì)增重效果,而磷酸替米考星可溶性粉100、80、60mg/L組和替米考星可溶性粉藥物對(duì)照組受試豬的相對(duì)增重率接近(見表4)。2.5對(duì)受試豬推動(dòng)性指標(biāo)評(píng)分結(jié)果磷酸替米考星可溶性粉對(duì)人工誘發(fā)豬支原體肺炎受試豬的肺部病變最終評(píng)分分別見表5和圖1。從表5的肺部平均評(píng)分可以看出,磷酸替米考星可溶性粉240、120、100、80mg/L組對(duì)受試豬肺部病變?cè)u(píng)分結(jié)果與陽性對(duì)照組受試豬相比,差異顯著(P<0.05);磷酸替米考星可溶性粉60mg/L組對(duì)受試豬肺部病變?cè)u(píng)分結(jié)果與陽性對(duì)照組相比,差異極顯著(P<0.01);而磷酸替米考星可溶性粉40mg/L組、20mg/L組與陽性對(duì)照組相比,差異不顯著(P>0.05)。藥物對(duì)照組比磷酸替米考星可溶性粉40mg/L組、20mg/L組的效果要好,但是差異不顯著。由此可以看出,磷酸替米考星可溶性粉治療豬支原體肺炎的最低劑量應(yīng)為60～80mg/L。3磷酸替米考星可溶性粉的治療豬固定化效果豬支原體肺炎感染所致的豬支原體肺炎一直是世界養(yǎng)豬業(yè)有待解決的問題之一。尤其當(dāng)豬肺炎支原體與其他致病微生物混合感染時(shí),時(shí)常發(fā)生豬呼吸道疾病綜合征(porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC)。該癥候群的出現(xiàn)更是嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展,已成為危害養(yǎng)豬業(yè)的重大疫病之一。盡管目前已有用于預(yù)防該病的疫苗可供使用,但由于受到疫苗本身以及疫苗儲(chǔ)存、運(yùn)輸、使用等因素的影響而導(dǎo)致免疫效果不佳時(shí)有發(fā)生,豬支原體肺炎仍然頑固存在于養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中。到目前為止,利用現(xiàn)有抗生素或研發(fā)新型抗生素進(jìn)行預(yù)防和治療本病依然是防治本病的一種有效手段。在本試驗(yàn)中,使用60～80mg/L及以上劑量的磷酸替米考星可溶性粉即顯示出可明顯改善豬支原體肺炎患病仔豬臨床癥狀的治療效果,表現(xiàn)為感染仔豬的氣喘、咳嗽癥狀減少,精神狀態(tài)、食欲大幅改善;肺實(shí)變區(qū)域減退明顯,肺病變指數(shù)顯著降低;有效抑制了患病仔豬增重減緩趨勢(shì)。磷酸替米考星的微生物敏感試驗(yàn)結(jié)果(另文發(fā)表)以及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)從受試豬肺分離支原體進(jìn)行的藥物敏感性檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果均顯示,豬肺炎支原體對(duì)磷酸替米考星有良好的敏感性,未見明顯的豬肺炎支原體對(duì)磷酸替米考星產(chǎn)生耐藥性現(xiàn)象。上述結(jié)果說明,磷酸替米考星有效抑制了豬肺炎支原體在豬體內(nèi)的生長,顯著減輕了病灶的擴(kuò)展。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,雖然磷酸替米考星可溶性粉以240mg/L的劑量混飲治療豬支原體肺炎的效果最佳,但是按60～80mg/L劑量飲水治療豬支原體肺炎也顯示出良好且顯著的治療效果,而且60～80mg/L組磷酸替米考星可溶性粉治療豬支原體肺炎的效