幾種抗菌藥對(duì)雞滑液囊支原體gx11-株的敏感性

幾種抗菌藥對(duì)雞滑液囊支原體gx11-株的敏感性

雞和雞的滑液囊腔（ms）是潛在的呼吸道病原體，會(huì)導(dǎo)致雞和雞的滑膜炎癥和肌腱鞘炎，導(dǎo)致公雞和雞的滑膜炎癥和肌腱鞘炎，以及產(chǎn)卵、蛋質(zhì)量和孵化率的降低。生長(zhǎng)緩慢，食物轉(zhuǎn)化率降低。雞滑液囊支原體病病程長(zhǎng),籠養(yǎng)雞不易被發(fā)現(xiàn),常給養(yǎng)雞生產(chǎn)造成難于彌補(bǔ)的損失。我國(guó)雞群滑液囊支原體陽性感染率為20.7%,普遍存在于全國(guó)各地。澳大利亞、南非和英國(guó)均從患呼吸道疾病的肉雞中分離到MS。利用抗菌藥物防治雞滑液囊支原體病仍是目前國(guó)內(nèi)外采取的主要方法,常用的藥物有氟喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類。恩諾沙星是動(dòng)物專用的氟喹諾酮類抗菌藥,是一種廣譜、高效、低毒抗菌藥,在預(yù)防和治療畜禽支原體病方面取得較好效果,與其他適宜抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用更可降低成本、提高療效、減少耐藥性。本試驗(yàn)選取恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素及氟苯尼考,對(duì)雞滑液囊支原體GX11-T株進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn),確定藥物的最小抑菌濃度(Minimalinhibitoryconcentration,MIC),并通過恩諾沙星與其他抗菌藥的聯(lián)合藥敏試驗(yàn),摸索其藥物敏感性,為防治雞滑液囊支原體病提供數(shù)據(jù)參考。1材料和方法1.1k0103-恩諾沙星對(duì)照品,含量99.9%,批號(hào)H0081206;替米考星對(duì)照品,含量93.7%,批號(hào)K0311109;泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品,每毫克相當(dāng)于泰樂菌素1026U,批號(hào)K0160911;吉他霉素標(biāo)準(zhǔn)品,每毫克相當(dāng)于吉他霉素1611U,批號(hào)K0151010;林可霉素對(duì)照品,含量84.9%,批號(hào)K0101003;延胡索酸泰妙菌素對(duì)照品,含量99.7%,批號(hào)K0340808;氯霉素對(duì)照品:含量為99.5%,批號(hào):K0350706;氟苯尼考對(duì)照品:含量為99.3%,批號(hào):K0301004,以上藥品均由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。沃尼妙林,含量98.5%,批號(hào)100102,由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供。分別稱取各藥并溶于適宜溶劑中,無菌操作配制成1280μg/mL,于4℃保存?zhèn)溆谩?.2培養(yǎng)基改良Frey氏液體培養(yǎng)基,參照現(xiàn)行《中華人民共和國(guó)獸藥典》(三部)規(guī)定方法配制。1.3畜禽藥品監(jiān)測(cè)雞滑液支原體GX11-T(CVCC2960)株,由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。取菌種,通過復(fù)壯并培養(yǎng),使顏色變化單位(Colorchangeunit,CCU)達(dá)到108CCU/mL以上,于-20℃保存?zhèn)溆谩?.4不同培養(yǎng)基的接種量采用試管二倍稀釋法進(jìn)行測(cè)定。每排取無菌帶膠塞試管10支,將改良Frey氏液體培養(yǎng)基分裝于各管中,每管0.5mL,取適宜濃度藥液0.5mL加入第1管充分混合后,取0.5mL加入第2管,依此方法,進(jìn)行稀釋,至最后一管。取CCU達(dá)108CCU/mL的菌液,用改良Frey氏液體培養(yǎng)基稀釋成10-4,于各管中加入0.5mL。同時(shí)試驗(yàn)設(shè)2組對(duì)照:培養(yǎng)物對(duì)照接種菌液,不加抗菌藥;培養(yǎng)基對(duì)照不接種菌液,不加抗菌藥。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。所有試管置37℃培養(yǎng),當(dāng)培養(yǎng)物對(duì)照為橘黃色,對(duì)照培養(yǎng)基不發(fā)生顏色變化時(shí),未發(fā)生顏色變化的最低藥物濃度為該藥物的MIC值。1.5聯(lián)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果及判定標(biāo)準(zhǔn)參照戴自英等的棋盤法進(jìn)行試驗(yàn)。根據(jù)已測(cè)得的MIC值,以兩藥MIC值的4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍分別聯(lián)合。聯(lián)合藥敏的相互作用依據(jù)FIC指數(shù)進(jìn)行判定。FIC=甲藥聯(lián)合時(shí)的MIC/甲藥單用時(shí)的MIC+乙藥聯(lián)合時(shí)的MIC/乙藥單用時(shí)的MIC。判定標(biāo)準(zhǔn):FIC≤0.5為協(xié)同作用;0.5<FIC≤1為相加作用;1<FIC≤2為無關(guān)作用;FIC>2為拮抗作用。2雞滑液產(chǎn)物的mic測(cè)定恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素、氟苯尼考對(duì)雞滑液支原體GX11-T株的MIC測(cè)定結(jié)果見表1。恩諾沙星與其他抗菌藥合用對(duì)雞滑液囊支原體GX11-T株的聯(lián)合藥敏作用結(jié)果見表2、3。3討論3.1雞滑液囊受體病本研究測(cè)定的MIC結(jié)果表明,MSGX11-T株對(duì)恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、沃尼妙林、泰妙菌素均高度敏感,對(duì)吉他霉素、林可霉素中度敏感,對(duì)氯霉素、氟苯尼考低度敏感。國(guó)內(nèi)外用抗生素測(cè)定雞滑液囊支原體MIC的報(bào)道較少,僅查閱到泰樂菌素、替米考星、泰妙菌素對(duì)MSMIC測(cè)定的相關(guān)資料。本試驗(yàn)測(cè)定的MSGX11-T株對(duì)泰樂菌素MIC值為0.031μg/mL,Jordan等和Bouchardon等對(duì)MSWVU1853株測(cè)定的MIC值分別為0.025μg/mL、0.06μg/mL,三者測(cè)定的MIC值差異不大,說明不同雞滑液囊支原體對(duì)泰樂菌素均高度敏感,而臨床上也多次采用泰樂菌素預(yù)防和治療雞滑液囊支原體病,取得了較為理想的效果[9~11]。Jordan等等用替米考星測(cè)定MSWVU1853株的MIC值為0.0125μg/mL,本試驗(yàn)測(cè)定的MIC值為0.063μg/mL,兩者存在一定差異。Bouchardon等用泰妙菌素測(cè)定MSWVU1853株的MIC值≤0.03μg/mL,本試驗(yàn)測(cè)定的MIC值為0.25μg/mL,兩個(gè)數(shù)值差異較大,由此說明MS的不同菌株對(duì)替米考星、泰妙菌素敏感性均存在差異。關(guān)于MS對(duì)抗生素敏感性的研究,除了測(cè)定MIC值,還可采用藥敏紙片法進(jìn)行研究。宋戰(zhàn)勝測(cè)定結(jié)果表明,MS對(duì)恩諾沙星、替米考星、泰妙菌素、泰樂菌素均敏感,這與本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果一致。臨床上用來預(yù)防或治療雞滑液囊支原體病較多的抗生素是泰樂菌素、替米考星、恩諾沙星、泰妙菌素、林可霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素。這也間接驗(yàn)證了本試驗(yàn)測(cè)定MIC數(shù)據(jù)的可靠性,對(duì)指導(dǎo)臨床用藥具有重要意義。3.2聯(lián)合用藥治療由表3可知,恩諾沙星分別與替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、林可霉素的聯(lián)合抑菌試驗(yàn)FIC指數(shù)均為0.75,說明這4組抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)MS表現(xiàn)為相加作用。僅有王春華等曾聯(lián)合應(yīng)用恩諾沙星與替米考星治療雞毒支原體病,效果顯著。雖然恩諾沙星聯(lián)合其他3種藥的藥敏試驗(yàn)和臨床應(yīng)用均未見報(bào)道,但從試驗(yàn)結(jié)果分析,通常在應(yīng)用其他抗生素產(chǎn)生耐藥性的前提下,可以嘗試用此聯(lián)藥方式治療雞滑液囊支原體病。聯(lián)合用藥,可使各單藥的MIC值降低,大幅降低生產(chǎn)成本,有效防治支原體與其他病原菌的混合感染。恩諾沙星+沃尼妙林、恩諾沙星+泰妙菌素,FIC指數(shù)在1~2之間,表現(xiàn)為無關(guān)作用,臨床上不建議聯(lián)合使用。恩諾沙星+氟苯尼考FIC指數(shù)大于2,表現(xiàn)為拮抗作用,提示在臨床上應(yīng)避免同時(shí)使用,以免失去藥效。3.3雞滑液囊產(chǎn)物的敏感性和雞毒產(chǎn)物的不一致雞滑液囊支原體病分布于全世界,且近幾年在我國(guó)有增多趨勢(shì),有些地區(qū)發(fā)病還相當(dāng)嚴(yán)重。雞滑液囊支原體對(duì)藥物的敏感性和雞毒支原體不完全一致,所以在使用抗菌藥物防治時(shí),建議先做藥敏試驗(yàn),選擇對(duì)該病敏感的藥物進(jìn)行治療。多數(shù)雞群中常存在支原體與其他病原菌混合感染的情況,