不同電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠額葉和海馬5-h、da和ne表達(dá)的影響

不同電針對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠額葉和海馬5-h、da和ne表達(dá)的影響

抑郁主要表現(xiàn)為抑郁、思維抑郁和意志活動(dòng)障礙。它的高發(fā)病率和高發(fā)病率給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)和損害。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為抑郁癥是由于大腦神經(jīng)遞質(zhì)在神經(jīng)突觸間的濃度相對(duì)或絕對(duì)不足,使得患者的精神活動(dòng)和心理狀況處于較低水平。研究表明［1］,能夠增加中樞單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的藥物可以減輕抑郁癥狀,而減少單胺遞質(zhì)濃度及影響其轉(zhuǎn)運(yùn)藥物可以引起抑郁癥狀。針刺作為世界上獨(dú)具一幟的傳統(tǒng)療法,對(duì)患病機(jī)體具有良性、整體調(diào)節(jié)作用。大量臨床調(diào)研顯示［2］,針刺療法在顯著改善抑郁癥患者的急躁焦慮、失眠、飲食欠佳等方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),其臨床治療效果正在獲得廣泛關(guān)注和不斷認(rèn)同。普通脈沖電針容易形成單一頻率而使機(jī)體耐受,而音樂(lè)電針克服了這一缺點(diǎn),它能夠隨著音樂(lè)節(jié)律的此起彼伏產(chǎn)生不同的頻率和波形,又能發(fā)揮音樂(lè)療法本身的作用,讓患者聆聽(tīng)音樂(lè)。與普通的針刺療法相比,音樂(lè)電針療法既能刺激穴位以調(diào)節(jié)氣血、疏通經(jīng)絡(luò),又能充分發(fā)揮音樂(lè)本身的治療作用。在以往的研究基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)比慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)和額葉、海馬的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)影響的差異,分析不同電針在不同腦區(qū)其抗抑郁機(jī)制之間的差異,為臨床提供一定的科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料表面1.1動(dòng)物房,適應(yīng)性飼養(yǎng)健康SD雄性大鼠[北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng)物許可證:SCXK(京)2006-0009],清潔級(jí),體重180~220g,北京中醫(yī)藥大學(xué)提供清潔級(jí)動(dòng)物房,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,恒溫(24±1%)℃、濕度(40±5)%,共50只。按照隨機(jī)數(shù)字表將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組、百憂解組、脈沖電針組和音樂(lè)電針組,每組10只,共5組。1.2免疫藥盒和熱計(jì)劃藥5-HT放射免疫分析藥盒、DA放射免疫分析藥盒和NE放射免疫分析藥盒(北京華英生物技術(shù)研究所提供);蔗糖(北京國(guó)華化學(xué)試劑廠);藥物:百憂解膠囊(美國(guó)禮來(lái)公司生產(chǎn))。1.3醫(yī)用x射線針針針的生產(chǎn)開(kāi)野箱:長(zhǎng)80cm、寬80cm和高40cm自制黑色實(shí)驗(yàn)箱,將其分成25個(gè)方格;針具:0.30mm×13mm規(guī)格的華佗牌無(wú)菌針灸針;γ-911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀(中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司生產(chǎn));LH202型韓氏電針儀(北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn));音樂(lè)電針儀:ZJ-12H音樂(lè)電針治療儀(哈爾濱致厚醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))。2方法2.1性應(yīng)激模型正常對(duì)照組:動(dòng)物不接受任何刺激和治療,自由飲食,群養(yǎng)。其余4組均采用改良的慢性應(yīng)激模型結(jié)合孤養(yǎng)［3］,造模動(dòng)物全部孤養(yǎng),包括斷水24h、斷食24h、冷水游泳(10℃、5min)、夾尾3min、環(huán)境潮濕24h、水平震蕩(1次/s,30min)、晝夜顛倒24h,每天隨機(jī)安排1種刺激,共21天。2.2慢性應(yīng)激模型制備正常對(duì)照組:動(dòng)物群養(yǎng),自由飲水?dāng)z食,不接受任何刺激;模型組:動(dòng)物孤養(yǎng),接受21天慢性應(yīng)激造模處理;百憂解組:在應(yīng)激前1h進(jìn)行藥物干預(yù),其它操作同模型組;脈沖電針組:在應(yīng)激前1h進(jìn)行脈沖電針干預(yù),其它操作同模型組;音樂(lè)電針組:在應(yīng)激前1h進(jìn)行音樂(lè)電針干預(yù),其它操作同模型組。5組同時(shí)進(jìn)行,1次/天,共21天。2.3模型試驗(yàn)的方法選穴:參照“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜”選取“印堂”和“百會(huì)”二穴。脈沖電針組:用30號(hào)1寸毫針平刺進(jìn)針,連接LH202型電針儀,百會(huì)針尖向上,印堂針尖向下,頻率為2/100Hz,電流強(qiáng)度為1mA,每次20min,每天1次,共21天。音樂(lè)電針組:每天給予慢性應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng),選穴及針刺方法同上,針柄接ZJ-12H音樂(lè)電針治療儀,音樂(lè)選取“抗抑郁處方”,電壓為2V,電流強(qiáng)度為1mA,強(qiáng)度以使頭部輕微顫抖、動(dòng)物不嘶叫為宜,每次20min,每天1次。2.4百友解給藥方法應(yīng)激刺激前1h灌胃給藥,百憂解以生理鹽水配成2mg/ml,按10ml/kg給藥,每天1次。2.5蔗糖水的消耗量測(cè)定在實(shí)驗(yàn)前1天和第21天進(jìn)行的體重檢測(cè),然后計(jì)算并比較各組大鼠的體重。在隔音保持安靜狀態(tài)下,將大鼠放置于開(kāi)野實(shí)驗(yàn)箱的中心方格內(nèi),觀察大鼠5min內(nèi)穿越格數(shù)(四爪均進(jìn)入的方格)記為水平活動(dòng)計(jì)分,后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附墻壁)記為垂直活動(dòng)計(jì)分。各組大鼠禁水24h后給予1%蔗糖水,測(cè)定1天內(nèi)蔗糖水的消耗量。在本實(shí)驗(yàn)應(yīng)激處理前1天和第21天分別進(jìn)行1次。2.6額葉和海馬組織的分離實(shí)驗(yàn)第22天,迅速斷頭后,在超凈臺(tái)冰塊上分離出額葉和海馬組織,置于滅菌的corning凍存管并液氮中保存。按試劑盒說(shuō)明,采用放射免疫分析法進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±s)表示,采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。兩組之間用t檢驗(yàn),組間差異采用單因素方差分析,以P<0.05為有顯著性差異,P<0.01為有極顯著性差異。3結(jié)果3.1造模成功率驗(yàn)證與正常對(duì)照組相比,模型組大鼠的水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)顯著降低(P<0.01),表明該實(shí)驗(yàn)造模成功;與模型組相比,百憂解組、音樂(lè)電針組和脈沖電針組大鼠的行為學(xué)活動(dòng)度明顯增加,均有顯著性差異(P<0.05),結(jié)果見(jiàn)表1。3.2模型大鼠體重的變化實(shí)驗(yàn)應(yīng)激處理前,各組大鼠之間體重?zé)o顯著性差異(P>0.05);在實(shí)驗(yàn)處理后的21天,與正常對(duì)照組,模型組的大鼠體重下降,差異有顯著性意義(P<0.01);與模型組比較,百憂解組、音樂(lè)電針組和脈沖電針組的大鼠體重均有增加(P<0.05),見(jiàn)表2。3.3應(yīng)激處理對(duì)兩組織物中織物紅外光譜的影響應(yīng)激處理前,各組之間大鼠的蔗糖水消耗量無(wú)顯著性差異(P>0.05)。應(yīng)激處理21天后,與正常對(duì)照組相比,模型組的糖水消耗量降低,有極顯著性差異(P<0.01);與模型組相比,百憂解組、音樂(lè)電針組的糖水消耗量升高,均有顯著差異(P<0.05),結(jié)果見(jiàn)表3。3.4模型大鼠額葉組織的活性成分變化與正常對(duì)照組相比,模型組大鼠額葉組織5-HT、DA、NE的含量降低,有極顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比,百憂解組和脈沖電針組大鼠額葉組織的5-HT、NE、DA的含量增加有顯著性差異(P<0.05);音樂(lè)電針組大鼠額葉組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。與脈沖電針組相比,音樂(lè)電針組額葉組織的5-HT含量增加,有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)表4。3.5百憂解、脈沖電針大鼠海馬組織的5-ht、ne、da的含量與正常對(duì)照組相比,模型組大鼠海馬組織5-HT、DA、NE的含量降低,有極顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比,百憂解組、脈沖電針組大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.05);音樂(lè)電針組大鼠海馬組織的5-HT、NE、DA的含量增加,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。與脈沖電針組比較,音樂(lè)電針組大鼠海馬組織的5-HT的含量增加,有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)表5。4應(yīng)激抑郁癥模型大鼠腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的活性變化大量的研究結(jié)果表明,抑郁癥患者存在與情感加工的神經(jīng)解剖環(huán)路的異常,額葉皮質(zhì)、杏仁核、海馬和下丘腦等4個(gè)關(guān)鍵大腦結(jié)構(gòu)的功能與大腦的情感活動(dòng)有著密切關(guān)系［4］,額葉及邊緣系統(tǒng)是大腦重要的解剖位置和神經(jīng)中樞,與人類(lèi)的思維、情緒、意識(shí)等行為密切相關(guān),能協(xié)調(diào)完成各種高級(jí)神經(jīng)精神活動(dòng)。研究表明［5］抑郁癥等情感障礙性疾病存在額葉及邊緣系統(tǒng)的代謝異常。人類(lèi)的情感表達(dá)、注意力、記憶和抽象能力都與額葉的功能密切相關(guān);而人類(lèi)的情緒波動(dòng)、思維和認(rèn)知能力也與海馬有著密不可分的關(guān)系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明［6］:動(dòng)物在慢性應(yīng)激狀態(tài)下,其海馬體積減小、萎縮。臨床研究表示抑郁癥病人大腦海馬萎縮,體積減小,縮小程度與情緒記憶障礙成正相關(guān)。抑郁癥主要是中樞單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、NE和DA含量下降或功能不足所致。ZhangX等［7］研究發(fā)現(xiàn),因抑郁癥死亡的病理尸檢顯示腦組織內(nèi)(腦干和額葉)5-HT含量降低和海馬5-HTR總量減少,抑郁癥神經(jīng)遞質(zhì)的異常主要表現(xiàn)為腦內(nèi)的5-HT合成減少。電針對(duì)中樞及外周紊亂的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)具有良性調(diào)節(jié)作用,朱藝等［8］觀察到應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬5-HT和乙酰膽堿酯酶(AChE)活性降低,電針“百會(huì)”和“三陰交”穴可明顯提高模型大鼠海馬中5-HT、AChE的表達(dá)。因此,本研究選取5-HT、DA和NE作為檢測(cè)指標(biāo),進(jìn)一步探討和對(duì)比在慢性抑郁模型大鼠的不同腦區(qū)下,音樂(lè)電針和普通的脈沖電針治療抑郁癥的機(jī)制和療效差異。傳統(tǒng)普通的脈沖電針儀發(fā)出周期性重復(fù)的波形,在治療后期病人易出現(xiàn)耐受現(xiàn)象。中醫(yī)音樂(lè)療法是運(yùn)用角、徵、宮、商、羽五種旋律的音樂(lè),與五行、五臟的相對(duì)應(yīng)關(guān)系,根據(jù)五行的生克制化規(guī)律來(lái)確定治則,并指導(dǎo)臨床選曲的一種療法。音樂(lè)電針儀主要是針對(duì)脈沖電針儀的周期性重復(fù)波形出現(xiàn)了后期療效衰減和電針局部組織跳動(dòng)的缺點(diǎn)導(dǎo)而提出的;它不僅能把音樂(lè)的節(jié)律轉(zhuǎn)化為變化的頻率和波形,從而達(dá)到對(duì)穴位的一種良性刺激,而且又能與音樂(lè)療法有機(jī)的結(jié)合起來(lái),使得患者不容易對(duì)其產(chǎn)生耐受,最終達(dá)到較好的治療效果。本實(shí)驗(yàn)研究顯示音樂(lè)電針治療慢性抑郁模型大鼠的療效優(yōu)于普通的脈沖電針組,音樂(lè)電針組慢性抑郁模型SD大鼠不同腦區(qū)的5-羥色胺的含量明顯增加,兩組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析其原因可能是因?yàn)榘賾n解是一種選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑,音樂(lè)電針干預(yù)后可能能夠促進(jìn)5-羥色胺在神經(jīng)細(xì)胞突觸間隙的濃度增加,抑制5-