生化實驗-血糖的測定

血糖的測定2021/6/161正常人空腹血糖濃度是多少？為何能保持恒定？糖尿病2021/6/162正常人空腹血糖濃度(fastingplasmaglucose,FPG)為3.89-6.11mmol/L。2021/6/163血糖如何維持穩(wěn)定？關鍵酶調(diào)節(jié)關鍵酶如何調(diào)節(jié)：激素調(diào)節(jié)。常見的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。降低血糖的激素：胰島素2021/6/164對糖代謝的調(diào)節(jié)：胰島素促進組織、細胞對葡萄糖的攝取和利用，加速葡萄糖合成為糖原，貯存于肝和肌肉中，并抑制糖異生，促進葡萄糖轉變?yōu)橹舅?，貯存于脂肪組織，導致血糖水平下降。胰島素缺乏時，血糖濃度升高，如超過腎糖閾，尿中將出現(xiàn)糖，引起糖尿病。胰島素是促進合成代謝、調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)定的主要激素2021/6/1652021/6/166如果調(diào)節(jié)失衡，結果是什么？高血糖或者低血糖。低血糖：生理性和病理性。低于2.8mmol/L。高血糖：生理性和病理性。高于7.1mmol/L。高于8.89mmol/L，出現(xiàn)糖尿。最常見病理性高血糖：糖尿病。糖尿病：高血糖和糖尿。臨床特點：三多一少。病因：胰島素分泌缺陷和胰島素受體缺陷。糖尿病診斷標準？2021/6/167糖尿?。╠iabetes）是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿?。ㄑ牵┮坏┛刂撇缓脮l(fā)并發(fā)癥，導致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。2021/6/168糖尿病的類型Ⅰ型糖尿病又叫青年發(fā)病型糖尿病或胰島素依耐型糖尿病。原因：胰腺產(chǎn)生胰島素的細胞已經(jīng)徹底損壞,從而完全失去了產(chǎn)生胰島素的功能.治療：依賴胰島素治療。Ⅱ型糖尿病又叫非胰島素依耐型糖尿病。原因：自身能夠產(chǎn)生胰島素，但細胞無法對其作出反應，使胰島素無法發(fā)揮作用。治療：需要胰島素單獨或與口服藥聯(lián)合應用的治療2021/6/1692021/6/1610一般正常人進食后血糖都會暫時性升高，進食后30分種或60分種可升到最高峰，但血糖一般不超過8.9mmol/L；進食2小時后又會回到空腹水平，這就是人體對糖的耐受現(xiàn)象。什么是口服葡萄糖耐量試驗（Oralglucosetolerancetest，OGTT）？有何臨床意義？2021/6/1611口服葡萄糖耐量試驗（Oralglucosetolerancetest，OGTT）是一種口服葡萄糖負荷試驗，用以了解人體對進食葡萄糖后的血糖調(diào)節(jié)能力。通過OGTT試驗，可以早期發(fā)現(xiàn)糖代謝異常，早期診斷糖尿病(DiabetesMellitus,DM)

，是一種簡單、快捷的診斷方法。2021/6/1612實驗前三天，受試者每日食物中糖含量不應低于150g，且維持正?；顒?，影響試驗的藥物應在三天前停用，受試前應空腹10-15h。

空腹取血后，5分鐘內(nèi)飲入250ml含75g無水葡萄糖的糖水，妊娠婦女用量為100g，兒童按1.75g/kg體重給予,不超過75g。

服糖后半小時，1小時，2小時，3小時各抽血一次，作血糖定量檢測。于采血同時，每隔1小時留取尿液作尿糖試驗，整個過程不可吸煙，喝咖啡，喝茶或進食。OGTT方法：WTO標準化2021/6/1613測試前禁食10-16小時，清晨空腹進行?？崭钩殪o脈血，測空腹靜脈血漿葡萄糖，然后成人口服75g無水葡萄糖，溶于250ml水中，5~10分鐘內(nèi)飲完。飲后2小時抽靜脈血，測靜脈血漿葡萄糖。2021/6/1614IFG與IGT空腹血糖損傷(ImpairedFastingGlucose,IFG)：空腹血糖≥6.1mmol/L,但＜7.0mmol/L糖耐量受損(ImpairedGlucoseTolerance,IGT)：餐后2h血糖＞7.8mmol/L,但＜11.1mmol/L

IFG和IGT可以說是一種正常人向糖尿病的過渡狀態(tài)，這部分人雖然現(xiàn)在還不是糖尿病，但是將來發(fā)生2型糖尿病的危險性非常高，可以說是糖尿病的后備軍。據(jù)有關研究報道，每年5-8%的IGT者將發(fā)展成為2型糖尿病。2021/6/1615無糖尿病史，空腹或者隨機血糖異常無糖尿病史，有一過性或持續(xù)性糖尿無糖尿病史，有明顯糖尿病家族史有糖尿病癥狀，但空腹或者隨機血糖不夠標準分娩巨大胎兒的婦女和有巨大胎兒史的個體不明原因腎病和視網(wǎng)膜病妊娠期、甲亢、感染期出現(xiàn)糖尿者OGTT的適應癥2021/6/1616血糖測定方法無機化學法：如Folin-Wu法有機化學法：如鄰甲苯胺法酶法：己糖激酶法，酶法：葡萄糖氧化酶法2021/6/1617原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使Cu2+還原成Cu+

，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍色的鉬藍。通過比色法測定藍色化合物，計算出血糖的含量穩(wěn)定、準確、但對葡萄糖無特異性，受血中非糖還原物質(zhì)的影響?？崭拐Ｑ菂⒖贾?.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL無機化學法：Folin-Wu法2021/6/1618有機化學法：鄰甲苯胺法原理：葡萄糖為一含醛基的已糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的Schiff堿。Schiff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比。評價：操作簡便，由于鄰甲苯胺只與醛糖作用而顯色，故此種測定法不受血液中其他還原物質(zhì)的干擾，測定時也無需去除血漿或血清中的蛋白質(zhì)，因此該實驗的特異性較高。2021/6/1619酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）

原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標本中的葡萄糖濃度成正比。評價：本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法，但是試劑較貴。2021/6/1620酶法：葡萄糖氧化酶法（glucoseoxidase,GOD）

葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化氫在過氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解為水和氧的同時將無色的4-氨基安替比林與酚氧化縮合生成紅色的醌類化合物。紅色的深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比，在510nm波長處測定吸光度，與標準管比較可計算出血糖的濃度。2021/6/1621葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2H2O＋紅色醌式物質(zhì)過氧化物酶（POD）Trinder反應505nm光吸收法測定相對血糖濃度2021/6/1622實驗試劑0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)酶試劑取過氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮化鈉100mg，溶于磷酸緩沖液80ml中，定容至100ml，置4℃保存酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。酶酚混合試劑將酶試劑和酚試劑等量混合，4℃下可存放1個月。葡萄糖標準工作液：5mmol/L2021/6/1623實驗操作加入物BST血清(ml)－－0.01葡萄糖標準液(ml)－0.01－蒸餾水(ml)0.01－－工作液(ml)1.01.01.0混勻，置37℃水浴保溫15分鐘，每管加蒸餾水0.5ml，在510nm波長處比色，以空白管（B管）調(diào)零，讀取各管吸光度。根據(jù)各管吸光度計算其血糖濃度。2021/6/1624葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液的葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。這是因為尿液中的尿酸等干擾物質(zhì)濃度過高，可干擾過氧化物酶反應，造成結果假性偏低。對于血液樣品需及時分離紅細胞。因為紅細胞的酵解將會導致測定結果偏低。建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。注意事項2021/6/1625嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清先制備無蛋白血濾液，然后在進行測定。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。葡萄糖氧化酶對β-D葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約36%為α型，64%為β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應。葡萄糖變旋酶，可加速這一反應，延長孵育時間可達到完成自發(fā)變旋過程。新配制的葡萄糖標準液主要是α型，故須放置2h以上(最好過夜)，待變旋平衡后方可應用。注意事項2021/6/1626計算：葡萄糖標準液：5mmol/L血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS×CS參考值：3.9~6.1mmol/L2021/6/1627不同檢測方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異。葡萄糖氧化酶法：3.9~6.1mmol/LFolin-Wu法：4.4~6.7mmol/L鄰-甲苯胺法：3.9~6.1mmol/L2021/6/1628本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應式中可知第一步是特異反應，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競爭過氧化氫，從而消耗反應過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，產(chǎn)生競爭性抑制，使測定結果偏低。但是對測定結果無顯著影響。實驗誤差分析：2021/6/1629葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實含量，且已推廣出試劑盒，廣