醫(yī)用供體豬 基因鑒定通則 編制說(shuō)明 （征求意見(jiàn)稿）

《醫(yī)用供體豬基因鑒定通則》四川省地方標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明一工作簡(jiǎn)況1.任務(wù)來(lái)源本項(xiàng)目根據(jù)四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2022年度地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目立項(xiàng)計(jì)劃（第三批）的通知（川市監(jiān)函[2022]357號(hào)）而制定。本項(xiàng)目批準(zhǔn)名稱為《醫(yī)用供體豬基因鑒定通則》，立項(xiàng)編號(hào)為202203/T018。2.起草單位、協(xié)作單位起草單位:協(xié)作單位:3.主要起草人二制定標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義醫(yī)用供體豬是我省重要的國(guó)家戰(zhàn)略資源，應(yīng)用于健康醫(yī)療領(lǐng)域。是關(guān)系到人類生命健康，支撐省委省政府構(gòu)建“5+1”現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)體系，推動(dòng)醫(yī)療健康高質(zhì)量發(fā)展等強(qiáng)省戰(zhàn)略落地的基礎(chǔ)條件。小型豬在解剖結(jié)構(gòu)、生理生化指標(biāo)、營(yíng)養(yǎng)代謝以及疾病發(fā)生機(jī)理上與人有很多相似之處，是理想的器官/組織供體來(lái)源。隨著2020年12月，美國(guó)食品和藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)敲除了α-半乳糖的轉(zhuǎn)基因豬上市，用于潛在醫(yī)療用途，次年9月，紐約大學(xué)朗格尼健康（NYU）的外科團(tuán)隊(duì)首次移植GTKO豬的腎臟給腦死亡患者，異種移植拉開(kāi)了從臨床前（豬到猴）到臨床（豬到人）轉(zhuǎn)化的序幕。醫(yī)用供體豬資源的需求逐漸增加，我國(guó)小型豬資源豐富，具有廣闊的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景。在整個(gè)產(chǎn)業(yè)中，對(duì)于醫(yī)用供體豬及相關(guān)產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)的標(biāo)準(zhǔn)化，產(chǎn)業(yè)化和國(guó)際化的需求也急劇上醫(yī)用豬基因型鑒定是醫(yī)用豬安全評(píng)估的重要組成部分，制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)可有效提高我省和我國(guó)醫(yī)用豬質(zhì)量水平和安全性，可使中國(guó)在新一輪國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)中占據(jù)有利地位。三主要起草過(guò)程綜合性敘述，不以時(shí)間過(guò)程記錄。如資料收集、調(diào)研、試驗(yàn)論證、擬稿、征求意見(jiàn)、整理送審等內(nèi)容1.標(biāo)準(zhǔn)預(yù)研及申請(qǐng)2019年-2020年聯(lián)合相關(guān)單位討論構(gòu)建醫(yī)用供體豬標(biāo)準(zhǔn)體系框架。2021年1月-2021年6月，進(jìn)行醫(yī)用供體豬相關(guān)資料、文獻(xiàn)、標(biāo)準(zhǔn)檢索和相關(guān)單位調(diào)研，成立標(biāo)準(zhǔn)起草小組，研究撰寫《醫(yī)用供體豬基因鑒定通則》項(xiàng)目申報(bào)書等相關(guān)材料，并提交經(jīng)信廳申請(qǐng)四川省地方標(biāo)準(zhǔn)。2.標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)2022年3月-6月，本項(xiàng)目經(jīng)評(píng)審答辯通過(guò)。2022年6月，四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2022年度地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目立項(xiàng)計(jì)劃（第三批）的通知（川市監(jiān)函[2022]357號(hào)本項(xiàng)目正式立項(xiàng)，起草小組根據(jù)相關(guān)要求進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)研3.標(biāo)準(zhǔn)研制起草小組根據(jù)國(guó)內(nèi)外行業(yè)情況，檢索相關(guān)資料討論確定技術(shù)方案和標(biāo)準(zhǔn)要求條款，于2023年3月形成標(biāo)準(zhǔn)草案。研制期間經(jīng)過(guò)多倫會(huì)議討論、交流，對(duì)基因型鑒定方法、基因表達(dá)鑒定方法、非預(yù)期基因檢測(cè)方法等關(guān)鍵指標(biāo)進(jìn)行深入研究和復(fù)核，于2023年8月形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿和編制說(shuō)4.標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)起草組于2023年8月-2023年11月就本項(xiàng)目征求意見(jiàn)稿在起草單位官方網(wǎng)站、生化檢測(cè)標(biāo)委會(huì)微信公眾號(hào)、醫(yī)用豬專委會(huì)、國(guó)際異種器官移植學(xué)會(huì)專家學(xué)者、行業(yè)領(lǐng)域相關(guān)專家學(xué)者等相關(guān)利益方廣泛征求意見(jiàn)。截止2023年12月，收到25個(gè)單位意見(jiàn)建議回函，詳見(jiàn)意見(jiàn)建議匯總表。5.標(biāo)準(zhǔn)審查按照四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)化處要求，本項(xiàng)目了？等寶貴意見(jiàn)建議。起草組根據(jù)審查專家意見(jiàn)建議進(jìn)行修改完善，形成標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿提交至四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局。四制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的本標(biāo)準(zhǔn)的制定遵守《中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化法》、《四川省地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的要求，結(jié)合四川本地生豬生產(chǎn)實(shí)際，細(xì)化技術(shù)內(nèi)容，以實(shí)現(xiàn)醫(yī)用供體豬生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范目前國(guó)內(nèi)關(guān)于醫(yī)用豬的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)較少，如湖南省的PathogenFree,DPF）醫(yī)用供體豬》系列地方標(biāo)準(zhǔn)，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)涉及醫(yī)用供體豬的遺傳質(zhì)量控制、微生物學(xué)監(jiān)測(cè)、配合飼料、病理學(xué)診斷規(guī)范、環(huán)境與設(shè)施等方面的規(guī)定，與本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目相比，并未涉及醫(yī)用豬基因鑒定，標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不同。五主要條款的說(shuō)明本標(biāo)準(zhǔn)主要規(guī)定了醫(yī)療用途實(shí)驗(yàn)小型豬（醫(yī)用供體豬）生產(chǎn)及交付時(shí)的基因鑒定要求，從產(chǎn)品質(zhì)量的角度將基因鑒定劃分為有效性評(píng)價(jià)和安全性評(píng)價(jià)2類，此外從醫(yī)用豬群體培育的角度對(duì)醫(yī)用供體豬基因鑒定增加了遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)1有效性評(píng)價(jià)，是基因鑒定的第一部分，包括基因型鑒定和基因表達(dá)（蛋白）鑒定類，基因型鑒定是確定基因修飾成功的必要步驟，也是基因表達(dá)的前提，是有效評(píng)價(jià)的核心基因型鑒定方法有多種方式，例如分子雜交、PCR檢測(cè)、測(cè)序等，但按通用性和適用范圍考慮，本標(biāo)準(zhǔn)推薦采用PCR和Sanger測(cè)序結(jié)合的方式進(jìn)行?；虮磉_(dá)鑒定，旨在驗(yàn)證基因修飾是否成功，供體豬是否成功使目的蛋白表達(dá)或缺失。常規(guī)鑒定方法有蛋白免疫印跡法、免疫組化（熒光）、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)等多種，但其核心原理均為抗原-抗體結(jié)合，僅應(yīng)用場(chǎng)景不同，因此使用者可自行按照生產(chǎn)工藝，選擇恰當(dāng)?shù)蔫b定方式，但該部分對(duì)醫(yī)用供體豬有效性檢測(cè)不可或缺。編制小組提供了醫(yī)用供體豬基因修飾評(píng)價(jià)有效性的參考資料，見(jiàn)附錄B和2安全性評(píng)價(jià)，該部分內(nèi)容旨在避免醫(yī)用供體豬在生產(chǎn)過(guò)程中因基因修飾產(chǎn)生脫靶、或者基因組結(jié)構(gòu)變異，從而產(chǎn)生未知過(guò)敏源或其他風(fēng)險(xiǎn)，是保證醫(yī)用供體豬安全使用的重要環(huán)節(jié)，該部分檢測(cè)依托于高通量測(cè)序技術(shù)，通過(guò)對(duì)比基因修飾前后醫(yī)用供體豬基因組的數(shù)據(jù)，來(lái)保證非基因修飾區(qū)域數(shù)據(jù)的一致性，從而排除脫靶、結(jié)構(gòu)變異等非預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)。3遺傳穩(wěn)定性評(píng)價(jià),該部分主要用于醫(yī)用供體豬種群選育，包括目的基因修飾的穩(wěn)定性和表達(dá)穩(wěn)定性2方面：前者用于醫(yī)用供體豬目的基因中拷貝數(shù)和后代中的分離情況，后者在于明確目的基因在不同世代、不同器官或部位的表達(dá)情況，遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)均需提供不少于三代的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。六重大意見(jiàn)分歧的處理依據(jù)和結(jié)