微生物檢驗(yàn)第五章G+球菌

第十四章

革蘭陽(yáng)性球菌1整理ppt

第一節(jié)葡萄球菌屬在自然界廣泛分布。存在于人和動(dòng)物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染癤、癰、膿腫、菌血癥等燙傷樣皮膚綜合癥毒性休克綜合癥2整理ppt二、臨床意義致病物質(zhì)：酶

血漿凝固酶耐熱核酸酶毒素葡萄球菌溶素 殺白細(xì)胞素腸毒素表皮剝脫毒素毒性休克綜合征毒素3整理ppt

金黃色葡萄球菌所致疾病

感染類型

所致疾病侵襲性局部感染：癤、癰、毛囊炎、傷口化膿、內(nèi)臟器官感染全身感染：敗血癥、膿毒血癥毒素性假膜性腸炎、食物中毒4整理ppt凝固酶陰性葡萄球菌〔CoNS〕所致疾病1、CoNS是人體皮膚黏膜正常菌群之一，是醫(yī)院感染的主要病原菌。2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等。3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。5整理ppt1.菌體形態(tài)：球形，葡萄串狀，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，體外培養(yǎng)無(wú)莢膜。革蘭染色陽(yáng)性球菌。2.培養(yǎng)特性：兼性厭氧，易培養(yǎng)，在普通平板、血平板上生長(zhǎng)良好。大局部菌落產(chǎn)生有色素：金黃色、白色、檸檬色。有些菌溶血，產(chǎn)生透明的β溶血環(huán)。三、生物學(xué)特性6整理ppt3.生化反響和抗原構(gòu)造觸酶陽(yáng)性多數(shù)菌分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。7整理ppt4.抵抗力對(duì)外界因素的抵抗力強(qiáng)于其他無(wú)芽胞菌?？菰锬撝?、痰液中可存活2~3個(gè)月。耐鹽性強(qiáng)，能在10%~15%NaCl培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。易產(chǎn)生耐藥性，對(duì)青霉素G的耐藥性已達(dá)90%以上，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見(jiàn)的致病菌。病原性葡萄球菌一般分布在人的皮膚和鼻咽部，帶菌率達(dá)20%~50%，醫(yī)務(wù)人員帶菌率達(dá)70%，是醫(yī)院內(nèi)交叉感染的重要傳染源。8整理ppt〔一〕標(biāo)本采集根據(jù)感染的部位，采集不同的標(biāo)本。該屬細(xì)菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜，采取時(shí)防止病灶周圍正常菌群污染。

四、微生物檢驗(yàn)9整理ppt〔二〕檢驗(yàn)程序10整理ppt〔三〕標(biāo)本直接檢查無(wú)菌體液如腦脊液和穿刺液可直接涂片、革蘭染色后直接顯微鏡檢查，查見(jiàn)細(xì)菌具有重要臨床價(jià)值。其他體液標(biāo)本如同時(shí)伴有炎性細(xì)胞時(shí)那么直接顯微鏡檢查結(jié)果也具有參考價(jià)值。涂片檢查發(fā)現(xiàn)有形態(tài)相似的革蘭陽(yáng)性球菌，那么可初步報(bào)告“查見(jiàn)類似葡萄球菌屬革蘭陽(yáng)性球菌〞，并進(jìn)一步進(jìn)行別離和鑒定予以證實(shí)。11整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定膿液、分泌物等接種于血瓊脂平板有污染的標(biāo)本如糞便等應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板血液標(biāo)本那么用肉湯增菌培養(yǎng)基12整理ppt1.菌落與菌體形態(tài)

金黃色葡萄球菌直徑6~8mn，金黃色或橙色，菌落周圍出現(xiàn)或不出現(xiàn)透明溶血環(huán)表皮葡萄球菌直徑為5~6mm，某些產(chǎn)粘液菌株能粘附在瓊脂平板外表，無(wú)色或白色溶血葡萄球菌直徑5~9mm，不透明，無(wú)色素或奶油色、黃色里昂葡萄球菌直徑4~7mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色和沃氏葡萄球菌相似腐生葡萄球菌直徑5~8mm，白色或檸檬色注意：菌落外觀疑為葡萄球菌者應(yīng)進(jìn)行革蘭染色證實(shí)，甘露醇高鹽平板上金黃色葡萄球菌菌落為黃色。13整理ppt2．凝固酶試驗(yàn)

玻片法-測(cè)定結(jié)合型凝固酶試管法-測(cè)定分泌型凝固酶金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽(yáng)性反響14整理ppt3．耐熱核酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。15整理ppt4．磷酸酶試驗(yàn)

大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌為陽(yáng)性。將待測(cè)菌種點(diǎn)種在加有硝基酚磷酸鹽的pH5.6~6.8MH瓊脂上，孵育18~24h，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性。16整理ppt17整理ppt定義：凡對(duì)甲氧西林、苯唑西林、頭孢西丁耐藥，或PBP2a陽(yáng)性、mecA基因陽(yáng)性的葡萄球菌定義為耐甲氧西林葡萄球菌〔MRS〕。

耐甲氧西林葡萄球菌18整理ppt*耐甲氧西林葡萄球菌〔MRSA、MRSE〕的含義：對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類(青霉素類，頭孢菌素類，碳青霉烯類)抗生素耐藥。對(duì)絕大多數(shù)的大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類也耐藥。萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺敏感。19整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬〔Streptococcus〕20整理ppt傳統(tǒng)分類Lancefield抗原血清分型

種系分類法溶血現(xiàn)象

丙型〔γ〕鏈球菌甲型〔α〕溶血性鏈球菌乙型〔β〕溶血性鏈球菌血清群與溶血特性沒(méi)有相關(guān)性

遺傳學(xué)和血清學(xué)分型不能統(tǒng)一

一、分類21整理ppt不溶血D群鏈球菌：牛鏈球菌α溶血性鏈球菌β溶血性鏈球菌肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌A、C、G群B群：無(wú)乳鏈球菌化膿、馬、似馬鏈球菌米勒鏈球菌22整理ppt二、臨床意義23整理ppt酶：鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶脂磷壁酸化膿性鏈球菌

肺炎鏈球菌致病物質(zhì)所致疾病毒素：鏈球菌溶素O和S、紅疹毒素M蛋白致病物質(zhì)：莢膜、溶血素、神經(jīng)氨酸酶

所致疾?。捍笕~性肺炎、支氣管炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥。超敏反響性疾?。杭毙阅I小球腎炎、風(fēng)濕熱化膿性感染中毒性疾?。盒杉t熱24整理ppt無(wú)乳鏈球菌引起新生兒菌血癥和腦膜炎米勒鏈球菌在手術(shù)和創(chuàng)傷時(shí)引起內(nèi)源性感染草綠色鏈球菌可引起心臟瓣膜異?；颊叩膩喖毙约?xì)菌性心內(nèi)膜炎猩紅熱(scarletfever)

由產(chǎn)生致熱外毒素的化膿性鏈球菌所致。細(xì)菌經(jīng)咽喉粘膜侵入機(jī)體，增殖并產(chǎn)生毒素引起高熱、全身紅疹等病癥，病后獲得較強(qiáng)的免疫力。25整理ppt鏈球菌是直徑小于2μm的球形或卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長(zhǎng)短和細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。1.形態(tài)染色三、微生物學(xué)特性26整理ppt肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對(duì)尖端向外，成雙排列，無(wú)芽胞、無(wú)動(dòng)力，但能形成莢膜和粘液層。27整理ppt兼性厭氧菌營(yíng)養(yǎng)要求高血平板α、β、γ三種特征性溶血現(xiàn)象肺炎鏈球菌莢膜多糖使菌落呈粘液狀產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng)48h后出現(xiàn)“臍窩狀〞菌落。

2．培養(yǎng)特性28整理ppt29整理ppt3．生化特性和抗原構(gòu)造發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn)氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性

分20個(gè)群M抗原莢膜蛋白質(zhì)多糖肽聚糖細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)30整理ppt近年對(duì)青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注。4.抵抗力大多數(shù)細(xì)菌對(duì)枯燥和消毒劑敏感；較少引起細(xì)菌耐藥性。31整理ppt32整理ppt〔二〕標(biāo)本采集咽拭子、痰液、膿汁和血液等標(biāo)本采集后在2h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行檢查和接種。對(duì)B群溶血鏈球菌的檢查，用無(wú)菌棉簽采集第35周~37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育18~24h，再作別離培養(yǎng)。33整理ppt〔三〕標(biāo)本直接檢查直接顯微鏡檢查標(biāo)本涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查見(jiàn)鏈狀排列革蘭陽(yáng)性球菌有助于無(wú)正常菌群污染標(biāo)本的診斷莢膜腫脹試驗(yàn)用于檢查肺炎鏈球菌直接檢測(cè)抗原咽拭標(biāo)本的A群鏈球菌和女性生殖道標(biāo)本的B群鏈球菌可用抗原檢測(cè)34整理ppt莢膜腫脹試驗(yàn)35整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定用羊血瓊脂平板培養(yǎng)初代別離需用5%CO2環(huán)境，35~37℃孵育24h。觀察菌落性狀：溶血現(xiàn)象及菌落大小。革蘭染色為革蘭陽(yáng)性球菌，鏈狀或短鏈狀排列，觸酶試驗(yàn)陰性，6.5%NaCl不生長(zhǎng)者可確定為鏈球菌屬細(xì)菌。36整理ppt(1)Lancefield群特異性抗原鑒定：B群為無(wú)乳鏈球菌，F(xiàn)群為米勒鏈球菌。(2)PYR試驗(yàn)：化膿性鏈球菌陽(yáng)性(3)桿菌肽敏感試驗(yàn)：化膿性鏈球菌陽(yáng)性。(4)VP試驗(yàn)：挑取平板上孵育過(guò)夜菌落置于2mlVP肉湯中，孵育6h后參加VP試劑，搖勻30秒，出現(xiàn)桃紅色者為陽(yáng)性。〔5〕CAMP試驗(yàn)β-溶血鏈球菌鑒定37整理ppt鏈球菌屬內(nèi)的鑒定試驗(yàn)38整理ppt非β溶血鏈球菌鑒定

菌種optochin敏感試驗(yàn)

膽汁溶菌試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)肺炎鏈球菌S+—草綠色鏈球菌R——牛鏈球菌R—+39整理ppt抗鏈球菌溶素O抗體檢測(cè)常用于風(fēng)濕熱的輔助診斷。活動(dòng)性風(fēng)濕熱患者抗體效價(jià)一般超過(guò)400單位。40整理ppt標(biāo)本別離培養(yǎng)膿汁，血液，咽喉拭子直接涂片鏡檢革蘭陽(yáng)性鏈球菌與葡萄球菌菌的鑒別H2O2陽(yáng)性1.肚臍樣菌落2.莢膜腫脹試驗(yàn)3.膽汁溶菌試驗(yàn)溶血環(huán)與肺炎鏈球菌的鑒別αLancefeild、PYR、桿菌肽敏感試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)βH2O2陰性6.5%NaCl不生長(zhǎng)者41整理ppt第三節(jié)腸球菌屬?gòu)V泛分布在自然界。常棲居在人、動(dòng)物的腸道和女性生殖道。為醫(yī)院感染的重要病原菌。42整理ppt一、分類腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬。于1984年將其命名為腸球菌屬。至今，經(jīng)由16SrRNA序列分析和核酸雜交等，證實(shí)腸球菌可分為5群19個(gè)種。臨床標(biāo)本別離的腸球菌多屬于第2群。43整理ppt二、臨床意義腸球菌所致感染最多見(jiàn)于泌尿道感染,是重要的醫(yī)院感染病原菌。多與泌尿道器械操作、留置導(dǎo)尿、尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān)。腹腔和盆腔創(chuàng)傷時(shí)也是常見(jiàn)的感染菌。腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴(yán)重根底疾患的老年人、長(zhǎng)期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者。44整理ppt近年來(lái)不斷上升的腸球菌感染率和廣泛使用抗菌藥物出現(xiàn)的耐藥性有關(guān)。在臨床診斷前應(yīng)認(rèn)真評(píng)估別離菌的臨床意義。臨床標(biāo)本中別離的80%~90%是糞腸球菌。屎腸球菌約占5%~10%。很少別離到腸球菌屬的其它種。45整理ppt腸球菌為革蘭陽(yáng)性球菌、呈單個(gè)，成對(duì)或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌呈球桿狀。液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無(wú)芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛。1.形態(tài)46整理ppt2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度35℃，10℃和45℃均能生長(zhǎng)。營(yíng)養(yǎng)要求不高。所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長(zhǎng)。在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷。47整理ppt48整理ppt3.生化反響和抗原構(gòu)造多數(shù)菌種具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺〔PYR〕。不含細(xì)胞色素氧化酶和觸酶。但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細(xì)胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株表現(xiàn)為觸酶弱陽(yáng)性。含鏈球菌D群抗原。G+C為37~45mol%。49整理ppt4.抵抗力對(duì)頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥。近年來(lái)獲得性耐藥菌株不斷增多，表現(xiàn)為對(duì)氨基糖苷類耐藥和對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥。對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥是由vanA、vanB和vanC等基因介導(dǎo)。50整理ppt〔一〕檢驗(yàn)程序

51整理ppt〔二〕標(biāo)本采集常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標(biāo)本和其他拭子，標(biāo)本于1小時(shí)內(nèi)接種完畢。〔三〕標(biāo)本直接檢查涂片染色顯微鏡檢查可見(jiàn)單個(gè)、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌。52整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本接種于含血瓊脂平板。假設(shè)送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有：疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長(zhǎng)，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落；哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂(CAN)和苯乙基乙醇瓊脂(PEA)。由于耐萬(wàn)古霉素腸球菌發(fā)生率增高，為早期檢出耐藥菌株，可使用含萬(wàn)古霉素瓊脂篩