多重耐藥鮑曼不動桿菌的分子流行特征分析及整合子介導的耐藥機制研究

多重耐藥鮑曼不動桿菌的分子流行特征分析及整合子介導的耐藥機制研究目的鮑曼不動桿菌是醫(yī)院感染常見的病原菌之一,隨著抗生素的廣泛使用,已出現(xiàn)了多重耐藥、廣泛耐藥,甚至全耐藥的菌株。住院患者特別是重癥患者一旦感染,將面臨無藥可救的局面。多重耐藥鮑曼不動桿菌(MDRAB)引起的醫(yī)院感染爆發(fā)流行已成為國內(nèi)外學者關注的重要公共衛(wèi)生問題。多項研究表明由于各地醫(yī)院抗菌藥物使用情況不同及耐藥菌控制的差異,MDRAB在世界各地的流行也存在差異。本課題通過研究本地區(qū)MDRAB的流行特征及其耐藥機制,為預防和控制MDRAB在本地區(qū)的爆發(fā)流行提供參考。方法1.回顧性調(diào)查分析2011年1月至2012年6月在某綜合性醫(yī)院住院且發(fā)生鮑曼不動桿菌感染的患者病歷資料,以MDRAB感染者為病例組,同時期鮑曼不動桿菌敏感株感染者為對照組進行病例對照研究,調(diào)查結(jié)果采用t檢驗、χ2檢驗及多因素logistic回歸進行數(shù)據(jù)分析。2.隨機收集2009年~2012年某綜合性醫(yī)院各類臨床標本分離出的MDRAB菌株286株,采用VITEK260細菌鑒定儀鑒定,K-B法進行藥敏試驗,采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)進行同源性分析。3.細菌抗菌藥物敏感性結(jié)果采用WHONET5.6軟件進行統(tǒng)計分析,耐藥率差別統(tǒng)計采用χ2檢驗。4.采用懸液定量殺菌試驗測定MDRAB對常用消毒劑酒精、含氯消毒劑和碘伏的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),并與鮑曼不動桿菌敏感株和銅綠假單胞菌標準株作平行比較。結(jié)合細菌藥敏結(jié)果,分析消毒劑抗性與抗生素耐藥性之間是否存在聯(lián)系。采用聚合酶鏈反應(PCR)測定MDRAB中耐消毒劑基因qacE△1的攜帶率。5.采用PCR方法鑒定收集的MDRAB菌株,瓊脂稀釋法進行藥物敏感性試驗,PFGE進行菌株的同源性分析以及通過PCR方法篩查整合子的種類和基因盒,并對基因盒片段進行基因測序。結(jié)果1.某綜合性醫(yī)院鮑曼不動桿菌感染者以院內(nèi)感染(58.76%)居多,常見感染部位為呼吸道(85.05%);mdrab感染的病人較敏感株感染病人延長的住院天數(shù)平均增加13.39天,治療總費用平均增加95171.58元;mdrab感染患者的病死率及自動出院率總和較敏感菌株感染的患者增加了31.96%。多因素logistic回歸分析表明,基礎疾病個數(shù)(or=3.012,95%ci:1.153~7.868)、入住icu(or=2.935,95%ci:1.093~7.885)、病情的嚴重程度(or=6.481,95%ci:2.524~16.644)、碳青酶烯類藥物使用(or=7.988,95%ci:2.961~21.547)和深靜脈置管(or=2.875,95%ci:1.049~7.880)為mdrab感染的獨立危險因素。敏感組和多重耐藥病例組的耐藥率統(tǒng)計,差異有意義(p<0.05);多重耐藥組的耐藥情況嚴重,14種測試抗菌藥物中9種藥物的耐藥率達100%。2.某綜合性醫(yī)院286株多重耐藥鮑曼不動桿菌按90%相似度可分為43種基因群,其中g23、g25為優(yōu)勢基因群,且2009年~2012年中均有檢出,流行科室以外科片區(qū)為主,綜合icu為高發(fā)科室,另環(huán)境中也檢出同基因群菌株;結(jié)合藥敏結(jié)果,各基因群除頭孢哌酮/舒巴坦和米諾環(huán)素的耐藥率低于40%外,其余耐藥率均大于65%,且g23群的耐藥比例最高,對碳青酶烯類的耐藥率與g25群相比較,分布差異有統(tǒng)計學意義。3.某綜合性醫(yī)院mdrab主要克隆群的代表株對酒精、碘伏和含氯消毒劑進行抗性測試表明,與標準菌株及敏感株比較,酒精對mdrab的mbc和mic值較高,有一定程度的抗性,碘伏及含氯消毒劑的差別不大;但三種消毒劑的常規(guī)使用濃度均超過試驗的mic值及mbc值。結(jié)合消毒劑抗性與菌株對抗菌藥物的耐藥情況,發(fā)現(xiàn)二者并無必然聯(lián)系。mdrab的耐消毒劑基因qace△1檢出率為57.97%。4.中國東南部地區(qū)及北京和煙臺收集的425株mdrab菌株,同源性分析表明該地區(qū)主要有5種克隆群,流行于10個地市的13家醫(yī)院;c25、c33為兩個最主要的優(yōu)勢克隆群,其中c25群的分布除福建省外,杭州、溫州及煙臺也有檢出,而c33群則為福建本地的流行群,分布于福州、南平及泉州。425株mdrab除米諾環(huán)素外,對其余藥物的耐藥率均大于70%,其中78%為耐碳青酶烯的鮑曼不動桿菌(crab)。其int?整合子檢出率為69.6%,未檢出intⅡ和intⅢ整合子。整合子陽性菌株的耐藥率高于陰性菌株,也存在4種優(yōu)勢克隆群,且優(yōu)勢克隆群p4為本地流行株,其泛耐藥株所占比例較高。研究中整合子所攜帶的基因盒為aacA4-catB8-aadA1和dfrⅫ-orfF-aadA2,屬福建省首次報道。結(jié)論1.MDRAB的耐藥情況嚴重,其感染者愈后和轉(zhuǎn)歸不佳,應加強對MDRAB感染者的監(jiān)測和控制,特別是入住ICU病情嚴重合并基礎疾病多的患者;強調(diào)抗菌藥物的合理使用,特別是碳青酶烯類藥物;應采取有效控制措施,避免其引起的爆發(fā)流行。2.控制MDRAB菌株的流行應加強對優(yōu)勢克隆群的監(jiān)測,加強高發(fā)及流行科室的消毒滅菌工作及醫(yī)務人員的手衛(wèi)生,及時隔離感染病人,減少不必要的轉(zhuǎn)科。3.臨床工作中遇到可疑MDRAB爆發(fā)流行及污染的情況按常規(guī)濃度使用消毒劑能夠有效地將其殺滅;根據(jù)qacE△1基因是主導對季胺鹽類和雙胍類消毒劑的外排泵基因,建議消毒MDRAB污染的環(huán)境應減少季胺鹽類消毒劑的使用,對于皮膚的消毒也不建議單純使用雙胍類消毒劑,提倡使用含有酒精成份復配的消毒劑以保證消毒效果。4.中國東南部地區(qū)存在MRDAB的優(yōu)勢克隆群的流行,福建省內(nèi)MDRAB的流行模式為本地克隆株和國內(nèi)流行克隆株的流行共同存在。該地區(qū)MDRAB耐藥形勢嚴峻,CRAB的檢出率高,甚至出現(xiàn)廣泛耐藥的菌株。5、中國東南部地區(qū)MDRAB檢出的整合