甘肅省隴南市重點中學(xué)2024屆高三第二次模擬考試生物試卷含解析

甘肅省隴南市重點中學(xué)2024屆高三第二次模擬考試生物試卷注意事項：1．答題前，考生先將自己的姓名、準考證號填寫清楚，將條形碼準確粘貼在考生信息條形碼粘貼區(qū)。2．選擇題必須使用2B鉛筆填涂；非選擇題必須使用0．5毫米黑色字跡的簽字筆書寫，字體工整、筆跡清楚。3．請按照題號順序在各題目的答題區(qū)域內(nèi)作答，超出答題區(qū)域書寫的答案無效；在草稿紙、試題卷上答題無效。4．保持卡面清潔，不要折疊，不要弄破、弄皺，不準使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．下列關(guān)于細胞結(jié)構(gòu)和功能的敘述，正確的是（）A．藍藻細胞形成細胞壁需要高爾基體參與 B．人體細胞中的線粒體能夠產(chǎn)生二氧化碳C．麻風桿菌的蛋白質(zhì)是由宿主細胞合成的 D．細胞增殖時細胞膜凹陷依靠紡錘絲牽引2．自2019年12月，武漢出現(xiàn)新型冠狀病毒引起的肺炎疫情以來，我們政府與世衛(wèi)組織通力合作，全力防控，目前疫情在我國基本得到遏制，下列有關(guān)此病毒的說法不正確的是（）A．新型冠狀病毒主要成分是RNA和蛋白質(zhì)B．新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)是RNAC．該病毒侵入人體肺泡細胞后，會被效應(yīng)T細胞識別，使該肺泡細胞裂解死亡D．組成該病毒的遺傳物質(zhì)的單體共有5種3．下表為人睪丸中甲、乙、丙、丁四個細胞內(nèi)的染色體組和同源染色體的數(shù)量，據(jù)表推測下列說法正確的是（）細胞類別甲乙丙丁同源染色體對數(shù)230046染色體組數(shù)2214A．甲、丁分別表示減數(shù)分裂和有絲分裂過程中的細胞B．甲細胞內(nèi)可能發(fā)生非同源染色體的自由組合C．丁細胞內(nèi)的染色單體數(shù)是乙細胞的兩倍D．乙細胞內(nèi)含有一條X或Y染色體4．如圖分別表示載體蛋白和通道蛋白介導(dǎo)的兩種物質(zhì)運輸方式，其中通道蛋白介導(dǎo)的運輸速率比載體蛋白介導(dǎo)的運輸速率快1000倍以上。下列敘述錯誤的是（）A．通道蛋白介導(dǎo)的運輸速率較快可能是因為消耗的能量較少B．載體蛋白在細胞膜上具有一定的流動性C．兩種膜蛋白對運輸?shù)奈镔|(zhì)均具有專一性D．載體蛋白介導(dǎo)的運輸速率會受到載體蛋白數(shù)量的限制5．圖為物質(zhì)進出細胞的兩種方式，有關(guān)該圖的敘述正確的是（）A．Ⅰ和Ⅱ分別表示協(xié)助擴散和主動運輸B．Ⅰ和Ⅱ分別表示胞吞作用和胞吐作用C．葡萄糖、性激素是以Ⅱ方式進入細胞的D．水、二氧化碳、氧氣是以Ⅰ方式進入細胞的6．下列關(guān)于人類遺傳病及優(yōu)生的敘述，錯誤的是（）A．各種遺傳病在青春期的患病率很低B．葛萊弗德氏綜合征可以通過其染色體核型進行診斷C．通過檢查發(fā)現(xiàn)胎兒有缺陷，可診斷該胎兒患有遺傳病D．羊膜腔穿刺技術(shù)可確診神經(jīng)管缺陷、某些遺傳性代謝疾病二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）將玉米的PEPC酶基因?qū)胨竞?，測量光照強度對轉(zhuǎn)基因水稻和原種水稻的氣孔導(dǎo)度及光合速率的影響結(jié)果，如下圖所示。（注：氣孔導(dǎo)度越大，氣孔開放程度越高）（1）水稻葉肉細胞進行光合作用的場所是______________，捕獲光能的色素在層析液中溶解度最大的是______________。（2）CO2通過氣孔進入葉肉細胞后，首先與______________結(jié)合而被固定，固定產(chǎn)物的還原需要光反應(yīng)提供______________。（3）光照強度低于8×102μmol·s-1時，影響轉(zhuǎn)基因水稻光合速率的主要因素是______________；光照強度為10～14×102μmol·s-1時，原種水稻的氣孔導(dǎo)度下降但光合速率基本不變，可能的原因是______________。（4）分析圖中信息，PEPC酶所起的作用是____________________________；轉(zhuǎn)基因水稻更適合栽種在____________________________環(huán)境中。8．（10分）模式生物是科學(xué)家選定的用于研究具有普遍生命規(guī)律的生物，如果蠅、酵母菌、小鼠等。某一果蠅新品系，圓眼和棒眼是關(guān)于眼型的一對相對性狀，現(xiàn)用一只圓眼果蠅和一只棒眼果蠅進行雜交，F(xiàn)1的表現(xiàn)型及比例為圓眼♀：圓眼♂∶棒眼♀∶棒眼♂=1∶1∶1∶1（不考慮基因位于X、Y染色體上的同源區(qū)段的情況）。請回答下列有關(guān)問題：（1）果蠅作為遺傳學(xué)模式生物的主要優(yōu)點是____________；相對性狀是指______________________________________。（2）現(xiàn)有純合圓眼和純合棒眼雌雄果蠅若干只，請設(shè)計雜交實驗，以確定控制果蠅眼型相對性狀的等位基因是位于常染色體上還是位于X染色體上。寫出實驗思路并預(yù)測結(jié)果和結(jié)論。_______________________________。（3）若研究發(fā)現(xiàn)控制圓眼和棒眼的等位基因位于X染色體上?，F(xiàn)以題中所述F，為實驗材料，請設(shè)計一次雜交實驗，確定該相對性狀的顯隱性。寫出實驗思路并預(yù)測結(jié)果和結(jié)論。____________________________。9．（10分）番茄紅素具有一定的藥用價值，但普通番茄合成的番茄紅素易發(fā)生轉(zhuǎn)化（如圖甲），科學(xué)家設(shè)計了一種重組DNA（質(zhì)粒三），該DNA能表達出雙鏈RNA（發(fā)卡），番茄細胞能識別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，從而提高果實中番茄紅素的含量（如圖乙）。請分析回答下列問題：（1）在體外快速大量獲得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用___________技術(shù)，該技術(shù)的原理是________________________。

（2）根據(jù)圖甲推知，轉(zhuǎn)錄出“發(fā)卡”的DNA片段實際上是兩個反向連接的________________基因，上述過程通過阻止該基因在細胞內(nèi)的_______________（填“轉(zhuǎn)錄”或“翻譯”），提高了果實中番茄紅素的含量。（3）為保證圖中的片段A反向連接，處理已開環(huán)質(zhì)粒所用的兩種限制酶是______________________。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側(cè)游離的磷酸基團。對已開環(huán)的質(zhì)粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其_____________，該DNA分子仍可以和目的基因連接，形成缺少___________個磷酸二酯鍵的重組質(zhì)粒，隨后在細胞中被修復(fù)。（5）可利用___________________法將質(zhì)粒三導(dǎo)入植物細胞。10．（10分）癌細胞表面蛋白“PDL-1”與T細胞表面蛋白“PD-1”特異性結(jié)合后，可抑制T細胞活性并啟動其凋亡，導(dǎo)致腫瘤細胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對“PD-1”基因進行克隆、表達及生物學(xué)活性鑒定，為制備抗體打基礎(chǔ)。研究中所用引物α和β堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識別序列與酶切位點見圖2：α鏈：5'-TCACTCGAGACCATGCAGATCCCACAGGCGCCC-3'β鏈：5'-CTCGAATTCTCAGAGGGGCCAAGAGCAGTG-3'圖1（1）首先提取細胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成____________________作為模板；設(shè)計含有不同的限制酶切點的α和β序列為引物，通過____________________技術(shù)擴增目的基因。（2）選用圖1中的兩種名稱分別為____________________的限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)粒”載體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建表達載體。該表達載體的組成，除了目的基因、標記基因抗卡那霉素基因外，還必須具有____________________等。（3）而后一定溫度下，與經(jīng)過處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____________培養(yǎng)基中，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌，繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴增重組DNA。（4）將擴增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達外源基因的原代293T細胞。一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，檢測細胞膜表面是否具有____________________。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能，則可裂解293T細胞，提取該物質(zhì)看能否與____________________發(fā)生結(jié)合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。研究中還會有一步驟，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細胞，其目的是_________________________。11．（15分）海藻糖是由兩個葡萄糖（G）結(jié)合而成的非還原性二糖，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、耐高溫，能幫助酵母菌克服極端環(huán)境。在無壓力狀態(tài)下，葡萄糖的代謝產(chǎn)物G6P和UDPG可抑制海藻糖合成酶基因（TPS復(fù)合體）的表達，胞內(nèi)海藻糖水解酶（Nthl）水解已經(jīng)存在的海藻糖，分解膜外海藻糖的水解酶（Ath1）處于小液泡中（如圖所示）。在有壓力狀態(tài)下，TPS復(fù)合體微話，Nth1失活，轉(zhuǎn)運蛋白（Agt1）將細胞內(nèi)海藻糖運至膜外，結(jié)合在磷脂上形成隔離保護，酵母菌進入休眠狀態(tài)以度過惡劣的環(huán)境?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題：無壓力狀態(tài)下酵母海藻糖代謝圖（1）與大腸桿菌細胞相比，酵母菌細胞最主要的結(jié)構(gòu)特征是________________。在無壓力狀態(tài)下下，細胞內(nèi)海藻糖含量低的原因有_____________________________________________。（2）在有壓力狀態(tài)下，TPS復(fù)合體激活，胞內(nèi)產(chǎn)生大量海藻糖，此時磨碎酵母菌制成溶液，加入斐林試劑，在水浴加熱條件下，_________________（填“出現(xiàn)”或“不出現(xiàn)”）磚紅色沉淀，原因是______________________________。（3）發(fā)面時所用的干酵母因海藻糖的保護而表現(xiàn)為代謝_______________，對其活化的過程中，酵母菌內(nèi)的變化有_______________、_______________，由于海藻糖被分解為葡萄糖，葡萄糖的代謝產(chǎn)物G6P和UDPG抑制TPS復(fù)合體基因的活性，在這種調(diào)節(jié)機制下，酵母菌迅速活化，從而適應(yīng)環(huán)境。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、B【解題分析】

有氧呼吸的第一、二、三階段的場所依次是細胞質(zhì)基質(zhì)、線粒體基質(zhì)和線粒體內(nèi)膜。有氧呼吸第一階段是葡萄糖分解成丙酮酸和[H]，合成少量ATP；第二階段是丙酮酸和水反應(yīng)生成二氧化碳和[H]，合成少量ATP；第三階段是氧氣和[H]反應(yīng)生成水，合成大量ATP。【題目詳解】A、藍藻是原核生物，細胞內(nèi)唯一的細胞器是核糖體，沒有高爾基體，A錯誤；B、人體細胞中的線粒體能夠產(chǎn)生二氧化碳，在有氧呼吸的第二階段，B正確；C、麻風桿菌是原核生物，有獨立的新陳代謝能力，蛋白質(zhì)自身細胞合成的，C錯誤；D、動物細胞增殖時細胞膜凹陷與紡錘絲無關(guān)，植物細胞增殖時形成細胞板，D錯誤。故選B。2、D【解題分析】

病毒是非細胞生物，專性寄生在活細胞內(nèi)。病毒依據(jù)宿主細胞的種類可分為植物病毒、動物病毒和噬菌體；根據(jù)遺傳物質(zhì)來分，分為DNA病毒和RNA病毒；病毒由核酸和蛋白質(zhì)組成?！绢}目詳解】A、新型冠狀病毒屬于RNA病毒，其主要成分是RNA和蛋白質(zhì)，A正確；B、新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，B正確；C、該病毒進入人體后，會啟動人體的體液免疫和細胞免疫，T淋巴細胞增殖分化產(chǎn)生的效應(yīng)T細胞會識別被該病毒侵入的肺泡細胞后，使該肺泡細胞裂解死亡，病毒暴露出來，被抗體消滅，C正確；D、組成該病毒的遺傳物質(zhì)的單體共有4種，D錯誤。故選D。3、B【解題分析】

通過表格數(shù)據(jù)分析，甲有23對同染色體，2個染色體組可能處于有絲分裂的前中期和減數(shù)第一次分裂；乙沒有同源染色體，但有兩個染色體組，處于減數(shù)第二次分裂后期；丙沒有同源染色體，但有1個染色體組，是精細胞；丁有46對同源染色體，4個染色體組，處于有絲分裂后期?！绢}目詳解】A、通過分析可知，甲可能表示減數(shù)分裂或有絲分裂過程中的細胞，A錯誤；B、通過分析可知，甲細胞可能處于減數(shù)第一次分裂后期，故可能發(fā)生非同源染色體的自由組合，B正確；C、丁細胞處于有絲分裂后期，細胞內(nèi)沒有染色單體數(shù)，C錯誤；D、乙細胞處于減數(shù)第二次分裂后期，細胞內(nèi)含有兩條X或Y染色體，D錯誤。故選B。4、A【解題分析】

據(jù)圖分析，兩種溶質(zhì)分子通過載體蛋白和通道蛋白的方式都是協(xié)助擴散，都不消耗能量。【題目詳解】A、圖中通道蛋白介導(dǎo)的運輸屬于協(xié)助擴散，不需要消耗能量，A錯誤；B、載體蛋白在運輸物質(zhì)時變形，說明細胞膜上具有一定的流動性，B正確；C、兩種膜蛋白均轉(zhuǎn)運相應(yīng)的物質(zhì)，因此兩種膜蛋白均具有專一性，C正確；D、由于載體蛋白數(shù)量有限，則介導(dǎo)的運輸速率會受到載體蛋白數(shù)量的限制，D正確。故選A。5、D【解題分析】【分析】特點、舉例被動運輸主動運輸自由擴散協(xié)助擴散運輸方向（逆、順濃度梯度）高濃度→低濃度高濃度→低濃度低濃度→高濃度是否需要載體不需要不需要需要是否消耗細胞的代謝的能量不需要不需要需要代表例子水、氧氣、二氧化碳、甘油、乙醇等葡萄糖通過紅細胞等Na+、K+等離子通過細胞膜；葡萄糖、氨基酸通過小腸上皮細胞題圖分析：Ⅰ是高濃度運輸?shù)降蜐舛?，不需要載體和能量，屬于自由擴散，Ⅱ是從低濃度一側(cè)運輸?shù)礁邼舛纫粋?cè)，是需要載體和能量，屬于主動運輸?！绢}目詳解】A、Ⅰ和Ⅱ分別表示自由擴散和主動運輸，A錯誤；B、有分析可知，Ⅰ和Ⅱ分別表示自由擴散和主動運輸，故Ⅰ和Ⅱ不能表示胞吞作用和胞吐作用，B錯誤；C、性激素屬于固醇，以Ⅰ自由擴散的方式進入細胞的，而葡萄糖主要以Ⅱ主動運輸方式進入細胞內(nèi)，C錯誤；D、水、二氧化碳、氧氣的運輸方式是自由擴散，所以是以Ⅰ方式進入細胞的，D正確。故選D。6、C【解題分析】

各類遺傳病在人體不同發(fā)育階段的發(fā)病風險：①一般來說，染色體異常的胎兒50%以上會因自發(fā)流產(chǎn)而不出生。②新出生嬰兒和兒童容易表現(xiàn)單基因病和多基因病。③各種遺傳病在青春期的患病率很低。④成人很少新發(fā)染色體病，但成人的單基因病比青春期發(fā)病率高。⑤更顯著的是多基因遺傳病的發(fā)病率在中老年群體中隨著年齡增加加速上升?！绢}目詳解】A、由分析可知，各種遺傳病在青春期的患病率很低，A正確；B、葛萊弗德氏綜合征(47，XXY)屬于染色體數(shù)目異常遺傳病，可以通過分析染色體核型進行診斷，B正確；C、胎兒有缺陷，可能只是由環(huán)境因素導(dǎo)致的，不一定是遺傳病，C錯誤；D、羊膜腔穿刺是用于確診胎兒是否有染色體異常、神經(jīng)管缺陷以及某些能在羊水中反映出來的遺傳性代謝疾病，D正確。故選C。【題目點撥】本題考查人類遺傳病及優(yōu)生的相關(guān)知識，要求識記人類遺傳病的類型，掌握監(jiān)測和預(yù)防人類遺傳病的方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準確判斷各選項。二、綜合題：本大題共4小題7、葉綠體胡蘿卜素C5[H]和ATP光照強度光照強度增加與CO2供應(yīng)不足對光合速率的正負影響相互抵消（或“CO2供應(yīng)已充足且光照強度已達飽和點”）增大氣孔導(dǎo)度，提高水稻在強光下的光合速率強光【解題分析】

氣孔導(dǎo)度即為氣孔開放程度，因此氣孔導(dǎo)度越大，二氧化碳吸收越多，光合速率越高。解答本題應(yīng)從光合作用的場所、條件以及影響因素等方面進行解題，影響光合作用的環(huán)境因素有：光照強度、溫度、二氧化碳濃度等。【題目詳解】（1）植物光合作用的場所是葉綠體，其中有四種色素，胡蘿卜素在層析液中的溶解度最大，擴散速率最快。（2）光合作用的暗反應(yīng)中，進入植物細胞內(nèi)的CO2首先被C5化合物固定成為C3化合物，再被光反應(yīng)提供的ATP和[H]還原。（3）分析題圖曲線可知，當光照強度低于8×102μmol?m-2?s-1時，隨光照強度增加，氣孔導(dǎo)度和光合作用速率增強，說明影響光合作用的因素主要是光照強度。光照強度為10～14×102μmol·s-1時，原種水稻的氣孔導(dǎo)度下降但光合速率基本不變，可能的原因是光照強度增加與CO2供應(yīng)不足對光合速率的正負影響相互抵消。（4）由氣孔導(dǎo)度與光強度關(guān)系曲線可看出轉(zhuǎn)基因水稻較普通水稻的氣孔度大，其原因為轉(zhuǎn)基因水稻導(dǎo)入了PEPC酶的因素，說明此酶有促進氣孔打開或增大作用，同理分析，此酶能提高水稻在強光下的光合速率；轉(zhuǎn)基因水稻在較強光照下光合速率卻更強說明更能適應(yīng)較強光照環(huán)境?！绢}目點撥】本題綜合考查光合作用的場所、色素的種類及含量、暗反應(yīng)的過程、影響光合作用的環(huán)境因素等，意在考查考生對基礎(chǔ)知識的識記和理解能力，以及獲取圖象信息能力，難度中等。針對此類題型，復(fù)習過程需要對光合作用的基本過程重點復(fù)習，同時借助圖表曲線引導(dǎo)學(xué)生分析影響光合作用的環(huán)境因素，培養(yǎng)學(xué)生能力。8、果蠅的生活史短、易飼養(yǎng)、繁殖快、染色體數(shù)目少、突變型多一種生物的同一種性狀的不同表現(xiàn)類型取圓眼果蠅與棒眼果蠅進行正交和反交[即圓眼（♀）×棒眼（♂）和棒眼（♀）×圓眼（♂）]，觀察后代的性狀表現(xiàn)。若正、反交后代性狀表現(xiàn)相同，則該等位基因位于常染色體上；若正、反交后代性狀表現(xiàn)不同，則該等位基因位于X染色體上方案一：任取相同性狀的雌雄果蠅雜交，觀察子代的性狀表現(xiàn)。若子代只出現(xiàn)一種性狀，則親本性狀為隱性；若子代出現(xiàn)兩種性狀，則親本性狀為顯性。方案二：任取不同性狀的雌雄果蠅雜交，觀察子代的性狀表現(xiàn)。若子代雌雄果蠅表現(xiàn)出不同的性狀，則親本雄果蠅表現(xiàn)的性狀為顯性；若子代雌雄果蠅均有圓眼和棒眼，則親代雄果蠅表現(xiàn)出的性狀為隱性【解題分析】

判斷基因位置：若已知顯隱性，則可通過隱性做母本，顯性純合作父本的雜交實驗進行確定，若未知顯隱性則可以通過正反交實驗確定?！绢}目詳解】（1）因為果蠅的生活史短、易飼養(yǎng)、繁殖快、染色體數(shù)目少、突變型多，所以果蠅常作為遺傳學(xué)模式生物；相對性狀是指一種生物的同一種性狀的不同表現(xiàn)類型。（2）圓眼和棒眼的顯隱性未知，因此確定控制果蠅眼型相對性狀的等位基因是位于常染色體上還是位于X染色體上常用正反交的方法：取圓眼果蠅與棒眼果蠅進行正交和反交[即圓眼（♀）×棒眼（♂）和棒眼（♀）×圓眼（♂）]，觀察后代的性狀表現(xiàn)。若正、反交后代性狀表現(xiàn)相同，則該等位基因位于常染色體上；若正、反交后代性狀表現(xiàn)不同，則該等位基因位于X染色體上。（3）因已知圓眼和棒眼的等位基因位于X染色體上，性狀的遺傳與性別有關(guān)，則可通過子代性狀進行判斷。方案一：任取相同性狀的雌雄果蠅雜交，觀察子代的性狀表現(xiàn)。若子代只出現(xiàn)一種性狀，則親本性狀為隱性；若子代出現(xiàn)兩種性狀，則親本性狀為顯性。方案二：任取不同性狀的雌雄果蠅雜交，觀察子代的性狀表現(xiàn)。若子代雌雄果蠅表現(xiàn)出不同的性狀，則親本雄果蠅表現(xiàn)的性狀為顯性；若子代雌雄果蠅均有圓眼和棒眼，則親代雄果蠅表現(xiàn)出的性狀為隱性?！绢}目點撥】基因位于性染色體上的性狀遺傳與性別有關(guān)，常染色體上的基因控制的性狀與性別無關(guān)。9、PCRDNA雙鏈復(fù)制番茄紅素環(huán)化酶翻譯Ecl和BamH1自身成環(huán)2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍、花粉管通道）【解題分析】

分析圖一：番茄紅素可以轉(zhuǎn)化為胡蘿卜素。分析圖二：圖二位重組DNA（質(zhì)粒三）的構(gòu)建過程，該質(zhì)粒能表達出雙鏈RNA（發(fā)卡），番茄細胞可以識別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，提高了果實中番茄紅素的含量?！绢}目詳解】（1）在體外快速大量獲得目的基因或含有目的基因的“片段A”可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制。（2）根據(jù)圖二可知，目的基因是番茄紅素環(huán)化酶基因，因此表達出“發(fā)卡”的DNA片段實際上是兩個反向連接的番茄紅素環(huán)化酶基因；“發(fā)卡”能導(dǎo)致雙鏈RNA、mRNA被降解，而mRNA為翻譯的模板，因此“發(fā)卡”阻止了其在細胞內(nèi)的翻譯過程，所以提高了果實中番茄紅素的含量。（3）為保證第二個目的基因片段反向連接，應(yīng)該用兩種限制酶切割。由圖可知，第二個目的基因片段兩側(cè)的限制酶識別序列為Ecl和BamHⅠ，因此處理已開環(huán)質(zhì)粒所用的兩種限制酶是Ecl和BamHⅠ。（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側(cè)游離的磷酸基團。對已開環(huán)的質(zhì)粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其自身成環(huán)（自身環(huán)化）；構(gòu)建重組質(zhì)粒三時，要用限制酶Ecl和BamHⅠ切割，這樣會去除黏性末端最外側(cè)缺少磷酸基團的脫氧核苷酸，因此形成的重組質(zhì)粒缺少2個磷酸二酯鍵。（5）將目的基因?qū)胫参锛毎?，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此可利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將質(zhì)粒三導(dǎo)入植物細胞。【題目點撥】解答第（5）題，關(guān)鍵能理清將目的基因?qū)胧荏w細胞的方法，總結(jié)如下：1、將目的基因?qū)胫参锛毎?，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。2、將目的基因?qū)雱游锛毎?，最常用的方法是顯微注射技術(shù)。3、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為

感受態(tài)細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。10、cDNAPCRXhoIEoRI啟動子、終止子、復(fù)制原點卡那霉素PD-1蛋白PDL-1或答PD-1抗體作為對照【解題分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因采用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA采用分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)采用抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！绢}目詳解】（1）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫（cDNA）。其中基因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，可以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA；由于PCR技術(shù)利用的是DNA分子復(fù)制的原理，所以用該cDNA進行PCR技術(shù)擴增短時間內(nèi)可以獲得大量的目的基因。（2）分析圖1中堿基序列，α鏈上有“—CTCGAC—”識別序列，β鏈上有“—GAATTC—”堿基識別序列，與圖2中XhoI限制酶和EoRI限制酶的識別序列相同。故選用XhoI限制酶和EoRI限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)?！陛d體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構(gòu)建基因表達載體?；虮磉_載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點等。（3）根據(jù)第（2）題可知，基因表達載體上的標記基因是卡那霉素抗性基因，因此一定溫度下，與經(jīng)過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有卡那霉素的培養(yǎng)基，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的