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文檔簡介
補腎中藥更康顆粒的藥效學及急性毒理實驗研究絕經(jīng)綜合征是女性性激素的轉(zhuǎn)變所致一系列癥候群,可能導致身體、情感和社交障礙,每一位女性都要經(jīng)歷這一時期,只是癥狀輕重不一,而且中國人口基數(shù)大,發(fā)病率高,絕經(jīng)綜合征引起了重視?,F(xiàn)代醫(yī)學治療以激素治療為主,臨床見效快,但其使用時機、持續(xù)治療時間、劑型選擇、副作用等備受爭議。中醫(yī)藥療效好、治療方式豐富,副作用小的特點已受到人們的關(guān)注,近來隨著中醫(yī)藥事業(yè)的崛起,中藥復(fù)方的開發(fā)研究成了熱點。國內(nèi)外許多學者都從臨床隨機對照試驗、動物實驗、基因研究等多方面對中藥復(fù)方進行了作用和機制的研究,而實驗研究主要通過中藥復(fù)方對調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌、抗氧化衰老、增強鎮(zhèn)靜催眠作用、增強免疫功能、增強學習和記憶功能等方面來進行,采取的動物模型主要有自然衰老模型、去勢模型、化學藥物誘導模型、細胞模型等。更康顆粒是王小云主任經(jīng)過臨床驗證30余年的驗方,功效:補腎填精,燮調(diào)陰陽。主要適合絕經(jīng)綜合征腎虛型人群。絕經(jīng)綜合征中醫(yī)病機以腎虛為本,更康顆粒用藥從治療腎虛著手,兼顧他臟。目的:1.圍繞補腎中藥更康顆粒的臨床療效進一步開展其藥效學研究,包括對更年期去勢大鼠血清相關(guān)性激素、下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、β-內(nèi)啡肽、抗氧化功能相關(guān)物質(zhì)及子宮的影響。2.觀察研究SD大鼠24h內(nèi)3次灌胃給予更康顆粒,在一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng),了解其急性毒性作用劑量。方法:1.藥效學研究:選取SD雌性大鼠80只,按隨機數(shù)字表分為8組:空白對照組、假手術(shù)組、模型組、戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組、更康顆粒低劑量組、更康顆粒中劑量組、更康顆粒高劑量組,每組各10只,除空白組和假手術(shù)組外,其余6組大鼠手術(shù)去勢,各組經(jīng)過灌胃給藥4周(空白對照組、假手術(shù)組與模型組給予蒸餾水),采用ELISA法測定大鼠血清性激素、下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、5-HIAA、DA、NE)含量、β-EP、抗氧化相關(guān)物質(zhì)(SOD、MDA、GSH-Px),取出子宮,計算臟器指數(shù)及檢測子宮內(nèi)膜厚度。使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。2.急性毒理實驗:最大給藥量方法:選取40只雌性大鼠,按體重分層后,試驗隨機分為2組[受試物組(148.5g生藥/kg)和溶媒對照組(純凈水)],每組20只,各組均按30mL/kg體重1天內(nèi)連續(xù)灌胃給藥3次,每次間隔4h;每次灌胃給藥后連續(xù)4h觀察大鼠出現(xiàn)的毒性癥狀及癥狀起始的時間等情況。在灌藥前、灌藥第1天、灌藥第7天、灌藥第14天測量體重。藥后連續(xù)觀察14日,每天上下午各1次,觀察大鼠外觀、行為、精神、對刺激的反應(yīng)、分泌物、排泄物等。所有大鼠均進行大體解剖,肉眼觀察其器官體積、顏色、質(zhì)地的改變;若任何器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時,均進行組織病理學檢查。結(jié)果:1.更康顆粒的藥效學研究(1)更康顆粒對去勢模型大鼠性激素的作用:①與空白對照組、假手術(shù)組相比,模型組大鼠血清E2含量水平降低(P<0.01),LH、GnRH、T含量升高(P<0.01),FSH含量升高(P<0.05),空白組與假手術(shù)組比較,FSH、LH、E2、GnRH、T含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②與模型組相比,更康顆粒高劑量組大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P<0.05、P<0.01),血清E2含量升高(P<0.01);中劑量組大鼠血清FSH、LH、GnRH、T含量降低(P<0.05、P<0.01),E2含量升高(P<0.05);低劑量組大鼠血清FSH、LH、GnRH、T、E2與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。③更康顆粒中、高劑量組血清FSH、LH、GnRH、T水平與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),更康顆粒中、高劑量組血清E2含量與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),調(diào)節(jié)作用相近。④更康顆粒低劑量組T、E2含量與空白對照組、假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),更康顆粒低劑量組FSH、LH、GnRH以及中、高劑量組的FSH、LH、GnRH、T、E2與空白組、假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑤在調(diào)節(jié)性激素水平上,更康顆粒高劑量組均值優(yōu)于更康顆粒低、中劑量組。(2)更康顆粒對去勢模型大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的作用:①與空白對照組、假手術(shù)組相比,模型組大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA、NE含量升高(P<0.01),空白對照組與假手術(shù)組相比,5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②與模型組相比,更康顆粒高劑量組大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA、NE含量降低(P<0.01);中劑量組大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA、NE水平降低(P<0.05,P<0.01);低劑量組大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA、NE水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。③更康顆粒低劑量組去勢大鼠下丘腦5-HT、DA含量與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組作用優(yōu)于低劑量組;更康顆粒低劑量組5-HIAA、NE含量以及中、高劑量組去勢大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA、NE含量與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),調(diào)節(jié)作用相近。④更康顆粒低劑量組去勢大鼠下丘腦NE含量與空白組、假手術(shù)組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),更康顆粒低劑量組去勢大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA以及中、高劑量組5-HT、5-HIAA、DA、NE含量與空白組、假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),使之趨于正常水平。⑤在調(diào)節(jié)下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)上,更康顆粒高劑量組均值優(yōu)于更康顆粒低、中劑量組。(3)更康顆粒對去勢模型大鼠下丘腦β-EP的作用:①與空白對照組、假手術(shù)組相比,模型組大鼠下丘腦β-EP含量降低(P<0.01),空白對照組與假手術(shù)組相比,β-EP含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②與模型組相比,更康顆粒高劑量組大鼠下丘腦β-EP含量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);中劑量組大鼠下丘腦β-EP含量升高(P<0.05);低劑量組大鼠下丘腦β-EP含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),③更康顆粒中、高劑量組大鼠下丘腦β-EP含量與與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),調(diào)節(jié)作用接近。④更康顆粒低劑量組與空白組、假手術(shù)組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),更康顆粒中、高劑量組丘腦β-EP含量與空白對照組、假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑤在調(diào)節(jié)β-EP水平上,更康顆粒高劑量組均值高于更康顆粒低、中劑量組。(4)更康顆粒對去勢模型大鼠抗氧化相關(guān)物質(zhì)的作用:①與空白對照組、假手術(shù)組相比,與空白對照組相比,模型組大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P<0.01),與假手術(shù)組相比,模型組大鼠血清SOD、GSH-Px含量降低(P<0.05、P<0.01);與空白對照組、假手術(shù)組相比,MDA含量升高(P<0.01),空白對照組與假手術(shù)組相比,血清SOD、MDA、GSH-Px含量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②與模型組相比,更康顆粒高劑量組大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01);中劑量組大鼠血清SOD、GSH-Px含量升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05);低劑量組大鼠血清GSH-Px含量升高(P<0.05),SOD、MDA指標含量差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。③與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組比較,更康顆粒中、高劑量組SOD、MDA含量與與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),更康顆粒的低、中、高劑量組大鼠血清GSH-Px與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。④更康顆粒中、高劑量組大鼠血清SOD、MDA含量與空白對照組、假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),更康顆粒低、中、高劑量組大鼠血清GSH-PX含量與空白對照組、假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑤在調(diào)節(jié)抗氧化相關(guān)物質(zhì)上,更康顆粒高劑量組均值優(yōu)于更康顆粒低、中劑量組。(5)更康顆粒對去勢大鼠子宮的作用:①與空白對照組、假手術(shù)組相比,模型組大鼠子宮系數(shù)降低(P<0.01),子宮內(nèi)膜厚度減小(P<0.01),空白對照組與假手術(shù)組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②與模型組相比,更康顆粒高劑量組大鼠子宮系數(shù)升高(P<0.05),子宮內(nèi)膜厚度增加(P<0.05);更康顆粒低、中劑量組大鼠子宮系數(shù)與子宮內(nèi)膜厚度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。③與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組比較,更康顆粒低、中、高劑量組大鼠子宮系數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度與戊酸雌二醇組、坤泰膠囊組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),說明其作用相近。④與空白組、假手術(shù)組相比,更康顆粒低、中、高劑量組子宮系數(shù)、子宮內(nèi)膜厚度與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01、P<0.05);更康顆粒中、低劑量組大鼠子宮內(nèi)膜厚度與假手術(shù)組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01、P<0.05),高劑量組子宮內(nèi)膜厚度與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。⑤在調(diào)節(jié)子宮系數(shù)、子宮內(nèi)膜厚度方面,更康顆粒高劑量組均值高于更康顆粒低、中劑量組。2.更康顆粒的急性毒理實驗研究在此期間,大鼠精神狀態(tài)良好,外觀未見異常表現(xiàn),行為活動正常,未見異常分泌物及排泄物,至試驗結(jié)束時無大鼠死亡。受試物組大鼠體重在灌藥前、灌藥第1天、灌藥第7天、灌藥第14天與溶媒對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。受試物組與溶媒對照組大鼠在觀察期結(jié)束時按計劃處死,大體解剖肉眼觀察其體表完整、被毛柔順、無外傷及破潰等;皮下無出血點及色素沉著等;腹腔、胸腔無積水,臟器位置正常;各器官的體積、顏色及質(zhì)地等均未發(fā)現(xiàn)病變及異
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