維生素類藥物的分析

維生素類藥物的分析2024年1月4日維生素類藥物的分析維生素維持人類機(jī)體正常代謝功能所必須的一類活性物質(zhì),主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié),體內(nèi)不能合成,須從食物中攝取。通俗來講，即維持生命的物質(zhì)，是維持人體生命活動必須的一類有機(jī)物質(zhì)，也是保持人體健康的重要活性物質(zhì)。維生素在體內(nèi)的含量很少，但不可或缺。2024年1月4日維生素類藥物的分析維生素醇從化學(xué)結(jié)構(gòu)上來講，維生素類均屬于有機(jī)化合物，但并非同一類化合物。酯酸胺酚醛各具有不同的理化性質(zhì)和生理作用2024年1月4日按溶解度分2024年1月4日維生素類藥物的分析方法生物法微生物法化學(xué)法物理化學(xué)法都是依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)與生物特性來進(jìn)行分析2024年1月4日AB1CDEVitaminsContents主要講解2024年1月4日維生素A的分析維生素A是一種不飽和脂肪醇，在自然蜀中主要來源于鮫類海魚肝臟中提取的脂肪油（魚肝油）。鮫類海魚？具有多種異構(gòu)體，有不同的名稱，其中活性最好的是維生素A1，也是通常所指的維生素A2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體維生素A醇（Retinol)2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體維生素A醋酸酯

（VitaminAAcetate)2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體維生素A棕櫚酸酯

（VitaminAPalmitate)2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體去氫維生素A

（A2dehydroretinol)2024年1月4日維生素A的分析維生素A具有一個共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個異構(gòu)體去水維生素A

（A3anhydroretinol)2024年1月4日第一節(jié)VitA912345678Retinol(VitAalcohol)VAacetateVApalmitate2-CisNeovitaminAa4-CisNeovitaminAb2,4-dicisNeovitaminAc6-CisIsovitaminAa2024年1月4日第一節(jié)VitA二、主要性質(zhì)

溶解性:與三氯甲烷、乙醚、環(huán)已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。

不穩(wěn)定性：含有多個不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，特別是在加熱和金屬離子存在時更易氧化變質(zhì)從而失活。紫外吸收：共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325-328nm之間有最大吸收，可用于鑒別

與三氯化銻呈色:三氯甲烷+三氯化銻=不穩(wěn)定的藍(lán)色2024年1月4日第一節(jié)VitA二、鑒別試驗(yàn)VitASbCl3CHCl3(無水無醇)藍(lán)色紫紅色1.三氯化銻反應(yīng)(Carr-Price反應(yīng))書上的有點(diǎn)小錯誤2024年1月4日第一節(jié)VitA二、鑒別試驗(yàn)反應(yīng)應(yīng)在無水無醇條件下進(jìn)行。因?yàn)樗墒谷然R水解，而乙醇可以使碳正離子作用而使反應(yīng)不能進(jìn)行Notice2024年1月4日第一節(jié)VitA2.UVVitAVitA3維生素A在無水乙醇鹽酸溶液中溶解,立即進(jìn)行UV掃描,在360nm處有一最大吸收峰.如1.水浴加熱30s,迅速冷卻,此過程發(fā)生脫水反應(yīng),掃描時出現(xiàn)三個吸收峰2024年1月4日第一節(jié)VitA2.UVVitAVitA33.TLC：三氯化銻顯色，磷鉬酸顯色維生素A去水維生素A最大吸收峰向長波方向移動：紅移2024年1月4日三、含量測定維生素A的測定CHP收載三種HPLC法UV三氯化銻法2024年1月4日三、含量測定UV維生素A?；煊须s質(zhì)，包括多種異構(gòu)體，氧化降解產(chǎn)物，合成中間體，副產(chǎn)物等以及常用稀釋油類。都有紫外吸收，干擾測定。咋辦呢？請用三點(diǎn)校正法！2024年1月4日第一節(jié)VitA維生素A在325-328nm的波長范圍內(nèi)具有最大吸收，其最大吸收峰的位置隨溶劑的不同而異。如下：應(yīng)用三點(diǎn)校正法時要注意2024年1月4日第一節(jié)VitAAnmVitAsamplepureVAacetateimpurities測定原理

雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減?。唬僭O(shè)）物質(zhì)對光的吸收具有加和性。（真理）2024年1月4日第一節(jié)VitA第一法——等波長差法λ2λ1λ3nmAVitAsamplepureVAacetateimpurities328340316A1A2A3Aλ1Aλ2Aλ3X1X2X3設(shè)：已知Aλ1=A1-X1=A1-(mλ1+C)Aλ2=A2-X2=A2-(mλ2+C)Aλ3=A3-X3=A3-(mλ3+C)VitA醋酸酯Y=mX+C2024年1月4日第一節(jié)VitA第一法——等波長差法λ2λ1λ3nmAVitAsamplepureVAacetateimpurities328340316A1A2A3Aλ1Aλ2Aλ3X1X2X3A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)VitA醋酸酯經(jīng)過一系列變換,得出下式通過實(shí)驗(yàn)求出A1、A2、A3，再用純品求出K1、K2，再轉(zhuǎn)換波長為chp2010藥典規(guī)定2024年1月4日第二法——等吸收比法第一節(jié)VitAAλ2λ1λ3nm310325334Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1A1A2A3Aλ2Aλ1Aλ3FLDMEA325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334VitA醇波長為chp2010藥典規(guī)定2024年1月4日測定方法一、基本步驟第一步：選擇A

（A328或A328(校正后)）選擇依據(jù)——所選A值中雜質(zhì)的干擾已基本消除第二步：求第三步：求效價（每克供試品所含維生素A的國際單位數(shù)）規(guī)定具體步驟測定A2024年1月4日測定方法1IU=0.344μgVitA醋酸酯1gVitA醋酸酯=106μg/0.344(μg/IU)=2.907×106IU

VitA

醋酸酯換算因子

=2.907×106IU/1530=19002024年1月4日第四步：求標(biāo)示量(百分)測定方法Why?2024年1月4日第四步：求標(biāo)示量測定方法這是因?yàn)闃?biāo)示量是以效價的形式存在的2024年1月4日第四步：求標(biāo)示量測定方法測定含量單位質(zhì)量1g對應(yīng)的效價效價占單位樣品質(zhì)量的百分比效價占單位質(zhì)量的百分比經(jīng)過變形可得下式2024年1月4日第四步：求標(biāo)示量測定方法這是因?yàn)闃?biāo)示量是以效價的形式存在的2024年1月4日二、第一法——純度高的VitAacetate測定方法合成VitA天然魚肝油①②λmax應(yīng)為328nm。若λmax不在326～329nm之間，則不能用本法測定，改為第二法③計(jì)算，選擇AA值的選擇測量吸光度判斷2024年1月4日測定方法A.若【(Aλ/A328nm)-規(guī)定值】≤(±0.02)

——A328不校正B.若【(Aλ/A328nm)-規(guī)定值】

有超過

(±0.02)者A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)A328不校正?A=A328校正?第二法?2024年1月4日測定方法三、第二法——VitAalcohol皂化法6/7法①樣品前處理酯乙醚提取VA醇，洗滌，過濾異丙醇溶解殘?jiān)?00，310，325，334nm處分別測Ai②λmax應(yīng)為325nm。若λmax不在323～327nm之間，則供試品中雜質(zhì)含量過高，改為色譜法將未皂化部分純化后進(jìn)行測定。③計(jì)算，選擇A2024年1月4日測定方法A.若(A300/A325)≤0.73A325不校正?A=A325校正?A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334B.若(A300/A325)>0.73色譜法純化后再測2024年1月4日測定方法應(yīng)用示例一VitAD膠丸中VitA的含量測定精密稱取本品(規(guī)格10,000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.07985g/丸）的內(nèi)容物0.1287g至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度如下，計(jì)算VitA的標(biāo)示量百分含量。2024年1月4日測定方法A=A328校正2024年1月4日測定方法2024年1月4日測定方法應(yīng)用示例二稱取VitA滴劑0.1082g(標(biāo)示量50000I.U./g)，加環(huán)已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50ml量瓶中，加環(huán)已烷至刻度，搖勻后置石英比色皿中，以環(huán)已烷為空白，分別于以下波長處測得相應(yīng)的吸收度值，試求此滴劑中VitA的標(biāo)示量百分率：2024年1月4日A=A328校正測定方法2024年1月4日測定方法2024年1月4日第一節(jié)VitA(二)HPLCRF-HPLC同時測定人血清中VitA和VitE含量色譜條件

色譜柱：C18

流動相：甲醇-水

流速：1.2ml/min

檢測波長與AUFS：

0～8min(330nm,0.25AUFS);8min后(292nm,0.05AUFS)

內(nèi)標(biāo)：VitA酯VitAVitE2024年1月4日(三)三氯化銻比色法第一節(jié)VitAλmax618nm～620nm缺點(diǎn)呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性2024年1月4日習(xí)題1.藥典中的雜質(zhì)檢查按照操作方法不同可分為下列三種類型對照法、靈敏度法、比較法。2024年1月4日習(xí)題2.藥物中存在的雜質(zhì)，主要來源于兩個方面，即

和

。2024年1月4日習(xí)題3.藥物中微量的氯化物在

酸性條件下與

反應(yīng)，生成氯化銀的膠體微粒而顯白色渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（濃度為

）在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較，判斷供試品中氯化物是否符合限量規(guī)定。2024年1月4日習(xí)題4.巴比妥類藥物具有的特性為：A.弱堿性B.弱酸性C.易與重金屬離子絡(luò)合D.易水解E.具有紫外特征吸收

2024年1月4日習(xí)題5.苯巴比妥鈉與銅鹽的鑒別反應(yīng)生成物為:A.紫色B.綠色C.藍(lán)色D.黃色E.紫堇色

2024年1月4日習(xí)題6．巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成配位化合物，顯綠色的藥物是:A.苯巴比妥B.異戊巴比妥C.司可巴比妥D.巴比妥E.硫噴妥鈉

2024年1月4日習(xí)題7.巴比妥類藥物的鑒別方法有:A.與鋇鹽反應(yīng)生成白色化合物B.與鎂鹽反應(yīng)生成紅色化合物C.與銀鹽反應(yīng)生成白色沉淀D.與銅鹽反應(yīng)生成有色產(chǎn)物E.與氫氧化鈉反應(yīng)生成白色沉淀

2024年1月4日習(xí)題8.于Na2CO3溶液中加AgNO3試液，開始生成白色沉淀經(jīng)振搖即溶解，繼續(xù)加AgNO3試液，生成的沉淀則不再溶解，該藥物應(yīng)是:A.鹽酸可待因B.咖啡因C.新霉素D.維生素CE.苯巴比妥2024年1月4日習(xí)題9.與NaNO2～H2SO4反應(yīng)生成橙黃至橙紅色產(chǎn)物的藥物是:A.苯巴比妥B.司可巴比妥C.巴比妥D.硫噴妥鈉E.硫酸奎寧

2024年1月4日習(xí)題10.銀量法測定苯巴比妥鈉含量時,若用自身指示法來判斷終點(diǎn),樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾比應(yīng)為:A.1:2B.2:1C.1:1D.1:4E.以上都不對

2024年1月4日習(xí)題11.用酸量法測定巴比妥類藥物含量時，適用的溶劑為:A.堿性B.水C.酸水D.醇－水E.以上都不對

2024年1月4日第二節(jié)VitB亦稱鹽酸硫胺,具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)亞甲基季銨2024年1月4日第二節(jié)VitB性質(zhì)噻唑環(huán)溶解性季銨干燥品在空氣中迅速吸收4%的水分。在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性2024年1月4日第二節(jié)VitB性質(zhì)硫色素反應(yīng)噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化成具有熒光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈藍(lán)色熒光2024年1月4日第二節(jié)VitB性質(zhì)分子中具有兩個雜環(huán)，可與某些生物堿沉淀試劑如碘化鉀、三硝基苯酚、碘溶液、硅鎢酸反應(yīng)生成恒定的沉淀紫外吸收特性2024年1月4日第二節(jié)VitB性質(zhì)維生素B1為鹽酸鹽，可呈氯化物的鑒別反應(yīng)氯化物的特征2024年1月4日第二節(jié)VitB一、Identification1.硫色素?zé)晒夥磻?yīng)——為維生素B1所特有NaOH－H2O2024年1月4日環(huán)合[O]－2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，顯藍(lán)色熒光第二節(jié)VitB2024年1月4日第二節(jié)VitB取本品約5mg，加NaOHT.S.2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀

T.S.0.5ml與正丁醇5ml，強(qiáng)力振搖2min，放置使分層，上層顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光；加酸使呈酸性，熒光即消失；再加堿使呈堿性，熒光又重現(xiàn)。方法2024年1月4日第二節(jié)VitB沉淀反應(yīng)維生素B1與碘化汞鉀生成淡黃色沉淀[B].H2HgI4維生素B1與苦酮酸生成扇形白色結(jié)晶維生素B1與碘生成紅色沉淀[B].HI.I2維生素B1與硅鎢酸反應(yīng)生成白色沉淀[B]2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O2024年1月4日氯化物反應(yīng)本品是鹽酸鹽,水溶液呈氯化物的鑒別反應(yīng)硫元素反應(yīng)2024年1月4日紅外分光光度法本品對照品對照2024年1月4日第二節(jié)VitB三、含量測定

非水溶液滴定法

(Non-aqueousTitrimetry)

紫外分光光度法

(UV)

硫色素?zé)晒夥?/p>

(ThiochroneFluoremetry)2024年1月4日第二節(jié)VitB三、含量測定非水滴定法原理維生素B1分子中含有兩個堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán),在非水溶液中均可與高氯酸作用,以電位指示終點(diǎn).根據(jù)消耗的高氯酸量即可算出維生素B1的含量.2024年1月4日第二節(jié)VitB1.

Non-aqueousTitrimetry喹那啶紅－亞甲藍(lán)

（紫紅→天藍(lán)）2024年1月4日第二節(jié)VitB紫外分光光度法原理維生素B1分子中含有共軛雙鍵結(jié)構(gòu),在紫外區(qū)有吸收,根據(jù)最大吸收波長處的吸光度即可以計(jì)算含量.2024年1月4日第二節(jié)VitB2.

UV1——0.1MHCl2——H203——H3PO4buffer4——alcohol2462322552024年1月4日第二節(jié)VitB3.

ThiochroneFluoremetryVitB1鐵氰化鉀NaOH硫色素異丁醇熒光λex-365nmλem-435nm+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇對照液+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇供試液SdAb硫色素?zé)晒夥?024年1月4日第三節(jié)VitC612345烯二醇結(jié)構(gòu)共軛酸性強(qiáng)酸性弱﹡﹡內(nèi)酯結(jié)構(gòu)2024年1月4日第三節(jié)VitC一、主要性質(zhì)

溶解性

酸性

旋光性

還原性L-抗壞血酸(有生物活性)L-二酮古羅糖酸L-去氫抗壞血酸無生物活性2024年1月4日第三節(jié)VitC

水解性

糖類性質(zhì)50℃

UV2024年1月4日第三節(jié)VitC二、鑒別1.與AgNO3反應(yīng)2.與2,6-二氯靛酚反應(yīng)氧化型還原型酸式色堿式色3.與氧化劑反應(yīng)2024年1月4日第三節(jié)VitC4.與糖類反應(yīng)H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50℃藍(lán)色其它還有薄層色譜法,百分吸收系數(shù)法2024年1月4日雜質(zhì)檢查溶液的澄清度與顏色檢查維生素C長期貯存會被氧化變色,因而應(yīng)通過此項(xiàng)檢查控制其純度.鐵與銅離子的檢查維生素C中可能存在一些鐵與銅離子,因而可以采用標(biāo)準(zhǔn)添加對照法進(jìn)行檢查.草酸的檢查一般加CaCl2形成草酸鈣對測定其濁度.2024年1月4日三、含量測定(強(qiáng)還原性)第三節(jié)VitC1.碘量法取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O62024年1月4日2.2,6-二氯靛酚滴定法第三節(jié)VitC快速滴定，用于含VitC的制劑與食品分析3.HPLC人血漿中VitC濃度的HPLC法測定2024年1月4日第三節(jié)VitC標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：取VC對照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀釋至刻度，得維生素C儲備液濃度為1mg/ml，置冰箱中2℃保存，3日內(nèi)可用。血漿樣品預(yù)處理：取受試者靜脈血，立即置肝素化的離心試管中，3000rpm離心5min；取血漿0.5ml，加入0.5ml10%偏磷酸溶液，渦旋混合0.5min，離心，分取上清液，置冰箱2℃貯存，直至測定。穩(wěn)定性考察：VC在血漿中不穩(wěn)定，在5%偏磷酸溶液中也難以保持長期穩(wěn)定，應(yīng)盡可能縮短藥物分離和處理時間。樣品測定：每天抽取的血樣應(yīng)當(dāng)日測定，每天建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低濃度的雙樣本質(zhì)控樣品。2024年1月4日第四節(jié)VitD膽甾醇7-脫氫膽甾醇維生素D3維生素D2麥角甾醇甾醇衍生物2024年1月4日第四節(jié)VitD維生素D2維生素D3

溶解性:在三氯甲烷中極易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶.

不穩(wěn)定性:雙鍵極不穩(wěn)定,易氧化變色,毒性增強(qiáng).

旋光性:有五到六個手性碳原子,均具有旋光性.

顯色反應(yīng):在三氯甲烷+醋酐+硫酸會從黃到紫再到綠色.

紫外吸收:具有吸收基團(tuán)2024年1月4日第四節(jié)VitD二、鑒別顯色反應(yīng):三氯甲烷+醋酐+硫酸三氯甲烷+三氯化銻三氯化鐵=橙黃色初顯黃色逐漸變紅迅即變紫最后變綠溶液顯橙紅色,逐漸變粉紅色二氯丙醇和乙酰氯=綠色2024年1月4日第四節(jié)VitD二、鑒別比旋度鑒別測定比旋度進(jìn)行鑒別其它鑒別法TLC\HPLC\熔點(diǎn)\UV\IR等2024年1月4日第四節(jié)VitD三、雜質(zhì)檢查1、麥角醇的檢查90％乙醇溶解后，加洋地黃皂苷溶液，放置18h，不得發(fā)生渾濁。2、前維生素D的光照產(chǎn)物λ＝280nm~320nm2024年1月4日第四節(jié)VitDCh.P2010——NP-HPLC含量測定USP34-NF29化學(xué)法色譜法微生物法BP2010化學(xué)法色譜法光譜法2024年1月4日

固定相：硅膠

流動相：正己烷－正戊醇（997：3）

檢測波長：254nm第一法：用于無維生素A醇及其他干擾的供試品第二法：(1)皂化提取;(2)凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素D，得供試品溶液B;(3)按第一法進(jìn)行測定。第三法：當(dāng)樣品經(jīng)皂化提取及凈化用色譜系統(tǒng)分離收集后，前維生素D峰仍受干擾時，采用此法。第四節(jié)VitD2024年1月4日第五節(jié)VitER1R2﹡﹡苯并二氫吡喃醇VitE(dl-α-TocopherylAcetate)SyntheticNatural2024年1月4日苯并二氫吡喃環(huán)+飽和烴鏈第五節(jié)VitE

溶解性

水解性

氧化性

紫外吸收△二、鑒別1.硝酸反應(yīng)生育酚HNO3（橙紅色）生育紅2024年1月4日第五節(jié)VitE2.三氯化鐵反應(yīng)生育酚[O]對-生育醌3.UV0.01%無水乙醇中，λmax=284nm，λmin=254nm2024年1月4日第五節(jié)VitE4.三氯化鐵反應(yīng)薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）VitERf

=0.72024年1月4日第五節(jié)VitE三、雜質(zhì)檢查1.酸度2.生育酚取VitE0.1g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得過1.0ml2024年1月4日第五節(jié)VitE四、含量測定載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔(dān)體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→氫火焰離子化檢測器(FID)內(nèi)標(biāo)→正三十二烷n≥500R≥21.GC——Ch.P24.40′內(nèi)標(biāo)14.54′VEUSP內(nèi)標(biāo)十六酸十六醇酯R≥1.02024年1月4日內(nèi)標(biāo)液

取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0