實驗6 微生物液體深層培養(yǎng)-發(fā)酵罐的使用課件

CentralLaboratoryofBiology實驗六微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用微生物學(xué)實驗實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用目的要求與基本原理【目的要求】1.了解微生物液體深層培養(yǎng)的方法和設(shè)備的使用?！净驹怼亢醚跷⑸锏纳L繁殖需充足的氧。為了進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)，微生物需進(jìn)行液體深層培養(yǎng)，其氧的供給由空氣系統(tǒng)完成，“通風(fēng)攪拌”是最常用的方式。生產(chǎn)前，空氣過濾器至罐體以及其他與罐體相通的管道、培養(yǎng)基都需進(jìn)行徹底地滅菌。然后，控制好微生物培養(yǎng)所需的溫度、風(fēng)量、攪拌速度并接種，方可正常生產(chǎn)。實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用【實驗用品】1.材料：玉米粉、豆餅粉2.試劑：K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H20、紅曲霉液體菌種3.儀器：小型通風(fēng)發(fā)酵罐【方法步驟】1.準(zhǔn)備工作1）培養(yǎng)基的配制：玉米粉5%，豆餅粉2%，K2HPO4·3H2O0.5%，MgSO4·7H200.1%，pH自然。2）檢查本系統(tǒng)各單件設(shè)備，確保各設(shè)備能正常運行時方可開機。3）溫度、pH、轉(zhuǎn)速、消泡設(shè)定值的調(diào)節(jié)實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用【方法步驟】2.空氣過濾及空氣管路的消毒1）慢慢打開蒸汽閥門，排盡冷凝水。2）蒸汽通過空氣過濾器進(jìn)入發(fā)酵罐內(nèi)。3）消毒時間一般為30分鐘。4）吹干空氣過濾器需20分鐘左右。3.空消1）排盡夾套中的水。2）排盡蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐進(jìn)入發(fā)酵罐。3）空消時間一般為30～50分鐘。排盡發(fā)酵罐內(nèi)的冷凝水。實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用4.加培養(yǎng)基液1）將培養(yǎng)基原液加入發(fā)酵罐內(nèi)，并加水至所配培養(yǎng)液總量的75～85%左右。5.實消1）排盡夾套中的水。2）夾套預(yù)熱：調(diào)節(jié)電機轉(zhuǎn)速至150rpm左右，進(jìn)行慢速攪拌。3）發(fā)酵罐內(nèi)溫度達(dá)到80℃左右時，排盡蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐進(jìn)入發(fā)酵罐。4）當(dāng)培養(yǎng)液溫度達(dá)到95～100℃后方可停止攪拌。5）實消時間一般為30分鐘。自然冷卻10分鐘左右。6）通冷卻水進(jìn)行冷卻。7）當(dāng)罐內(nèi)溫度降至70℃以下時，慢速攪動培養(yǎng)基。【方法步驟】實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用6.接種1）當(dāng)發(fā)酵液溫度降到接種溫度時即可進(jìn)行接種。2）準(zhǔn)備合格的搖床菌種。3）在接種口四周圍上酒精棉。4）點燃酒精棉，擰下接種口螺母，并將其放入預(yù)先準(zhǔn)備的盛有酒精的培養(yǎng)基中。5）將裝菌種的瓶口在火焰上燒一會兒，在火焰下拔下瓶塞，迅速將菌種倒入發(fā)酵罐內(nèi)，蓋上接種口螺母，滅火焰?！痉椒ú襟E】實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用7.培養(yǎng)1）按照工藝要求調(diào)節(jié)通氣量、培養(yǎng)溫度及攪拌轉(zhuǎn)速。8.取樣蒸汽通過取樣口，保持20～30分鐘，消毒后再取樣。取完樣再通蒸汽約5min。9.出料1）出料管的滅菌。2）出料。3）出料完畢后用蒸汽消毒出料管。4）發(fā)酵罐應(yīng)及時清洗干凈。5）如果發(fā)酵罐暫時不用，則需排盡罐內(nèi)及各管道內(nèi)的余水。【方法步驟】實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用10.發(fā)酵罐的清洗1）關(guān)閉電源，旋下電機及個傳感器的連線插頭。2）如果攪拌軸及機械密封裝置不干凈，則可用水沖刷。3）安裝完畢后，檢查管道及發(fā)酵罐的密封性?！痉椒ú襟E】實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用【注意事項】1）必須確保所有單件設(shè)備能正常運行時使用本系統(tǒng)。2）在過濾器消毒時，流經(jīng)空氣過濾器（金屬濾芯）的蒸汽壓力不得超過0.17MPa，否則過濾器濾芯會被損壞，失去過濾能力。3）在操作過程中，罐壓不得超過0.12MPa，防止引起設(shè)備的損壞。注意：在空、實消升溫過程中冷卻按鈕必須處于停止?fàn)顟B(tài)，否則當(dāng)設(shè)定值設(shè)定在培養(yǎng)溫度時，冷卻水管中會自動通冷卻水，不僅會影響升溫速度、浪費蒸汽，更重要的是會引起冷凝水過多，造成培養(yǎng)液的浪費。實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用4）在空、實消結(jié)束后冷卻時，發(fā)酵罐內(nèi)嚴(yán)禁產(chǎn)生負(fù)壓，以免損壞設(shè)備或造成污染。5）在發(fā)酵過程中，罐壓應(yīng)維持在0.03～0.05MPa之間，以免引起污染。在各操作過程中，必須保持空氣管道中的壓力大于發(fā)酵罐的罐壓，否則會引起發(fā)酵罐中的液體倒流到過濾器中，堵塞過濾器芯或失去過濾能力。【注意事項】實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用【實驗報告】1.以自己的理解寫出發(fā)酵罐使用的基本流程。2.思考題1）怎樣防止由通風(fēng)引起的發(fā)酵液污染？實驗6微生物液體深層培養(yǎng)—發(fā)酵罐的使用Central