實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞形態(tài)課件

坎坎坷坷細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)生命科學(xué)學(xué)院

實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞器的顯微結(jié)構(gòu)的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解普通光學(xué)顯微鏡的工作原理，掌握光學(xué)顯微鏡的使用方法。2.熟悉光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞的基本形態(tài)與結(jié)構(gòu)。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞是生物體的基本結(jié)構(gòu)單位。構(gòu)成生物機(jī)體的細(xì)胞是多種多樣的。要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研究，首先要從其形態(tài)結(jié)構(gòu)人手。所以，要借助顯微鏡的成像及放大原理，在顯微鏡下，才能觀察到細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。顯微鏡物象是否清楚不僅決定于放大倍數(shù)，還與顯微鏡的分辨力有關(guān)。制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65~1.78，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。對(duì)于干燥物鏡來(lái)說(shuō)，介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為0.05~0.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近1.5。普通光線的波長(zhǎng)為400~700nm，因此顯微鏡分辨力數(shù)值不會(huì)小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般顯微鏡設(shè)計(jì)的最大放大倍數(shù)通常為1000X。厚標(biāo)本和薄標(biāo)本4-5um2um基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)三、顯微鏡概述

顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見(jiàn)光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。1.光學(xué)顯微鏡普通生物顯微鏡由3部分構(gòu)成：①照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。②光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成，是顯微鏡的主體。③機(jī)械裝置：用于固定材料和觀察方便，包括鏡臺(tái)(載物臺(tái))、調(diào)節(jié)器和、物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)等。尼康E-600顯微鏡

數(shù)碼互動(dòng)顯微鏡2.體視顯微鏡可直接進(jìn)行解剖及觀察并具有正像立體感3.熒光顯微鏡

尼康E800熒光DIC顯微鏡

熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍(lán)色）

熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：1.照明方式通常為落射式，即光源通過(guò)物鏡投射于樣品上。2.光源為紫外光，波長(zhǎng)較短，分辨力高于普通顯微鏡。3.有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見(jiàn)光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人目。4.激光共聚焦掃描顯微鏡（具有高分辨率可進(jìn)行顯微斷層掃描）

LCSM照片藍(lán)色為細(xì)胞核，綠色為微管

（能觀察活細(xì)胞）5.暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡（darkfieldmicroscope）的聚光鏡中央有當(dāng)光片，使照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見(jiàn)到小至4-200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。6.相差顯微鏡

一種介殼蟲的染色體

7.偏光顯微鏡（對(duì)于雙折射物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究）

偏光顯微鏡（polarizingmicroscope）用于檢測(cè)具有雙折射性的物質(zhì)，如纖維絲、紡錘體、膠原、染色體等等。8.微分干涉差顯微鏡（圖像具有浮雕感）

DIC顯微鏡其優(yōu)點(diǎn)是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。

DIC顯微鏡下的硅藻（偽彩色）

9.倒置顯微鏡（組織培養(yǎng)中長(zhǎng)工作距離的）組成和普通顯微鏡一樣，只不過(guò)物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺(tái)之下，后者在載物臺(tái)之上（右圖），用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，具有相差物鏡。10.顯微操作技術(shù)

尼康NT-88NE顯微操作/注射儀

四、實(shí)驗(yàn)用品各種組織切片五、

實(shí)驗(yàn)步驟

(一)顯微鏡的使用1.觀察前的準(zhǔn)備工作

(1)觀察者要養(yǎng)成顯微鏡鏡檢的工作習(xí)慣，觀察時(shí)要雙眼同時(shí)睜開(kāi)，一邊觀察一邊進(jìn)行記錄或描繪。

(2)觀察時(shí)所用的材料、藥品和各種器具要預(yù)先準(zhǔn)備好。

(3)顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它的各個(gè)部件是否完整和正常，并對(duì)載物臺(tái)、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進(jìn)行必要的清潔工作。然后進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)。

學(xué)生操作規(guī)程及注意事項(xiàng)一、觀察前準(zhǔn)備檢查：底座右側(cè)的光源亮度旋鈕是否在“1”位置，即順時(shí)針選到最底位。開(kāi)機(jī)：1.打開(kāi)后座主電源開(kāi)關(guān)——綠色按鈕

2.打開(kāi)后座CCD電源開(kāi)關(guān)——紅色按鈕白平衡調(diào)整：不放切片，在10倍物鏡下將電源調(diào)整到最亮，然后按底座右方的白平衡按鈕（紅色）3－5秒之后將光源亮度調(diào)回到適中狀態(tài)。二、觀察操作放上切片，將光源調(diào)到自己習(xí)慣的亮度。視度補(bǔ)償：調(diào)節(jié)目鏡雙筒找到自己的瞳距，此時(shí)兩眼鏡下的圖象重合在一起，橫拉板上的數(shù)字（例如：64）就是自己的瞳距，然后將兩只目鏡外側(cè)的刻度線調(diào)到瞳距的數(shù)字的位置。調(diào)焦：將綠色光標(biāo)移至視野中央，開(kāi)始觀察，如需提問(wèn)，按呼叫按鈕。三、下課時(shí)的操作1.將光源亮度調(diào)到最低“1”刻度。2.關(guān)掉紅色CCD電源開(kāi)關(guān)，再關(guān)綠色主電源開(kāi)關(guān)。3.套上顯微鏡套。4.耳機(jī)及凳放整齊。瞳距調(diào)節(jié)2.顯微鏡的調(diào)節(jié)屈光度調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)粗調(diào)松緊調(diào)節(jié)旋鈕聚光鏡中心調(diào)節(jié)⑤光軸中心調(diào)節(jié)螺釘③視場(chǎng)光欄③孔徑光欄②10X物鏡①標(biāo)本④聚光鏡升降旋鈕孔徑光欄調(diào)節(jié)N.A聚=(0.6-0.8)N.A物孔徑光欄開(kāi)度與圖象100%70%30%六、注意事項(xiàng)