組織學(xué)技術(shù)-課件

組織學(xué)技術(shù)HE染色，腦垂體掃描電鏡術(shù)(scanningelectronmicroscopy,SEM):觀察組織細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)電鏡技術(shù)透射電鏡術(shù)(transmissionelectronmicroscopy,TEM):觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)TransmissionElectronMicroscope漿細(xì)胞血細(xì)胞組織化學(xué)技術(shù)一般組織化學(xué)(Classicalhistochemistry)免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)原位雜交(insituhybridization)兔肝PAS反應(yīng)圖像分析術(shù)-形態(tài)計(jì)量術(shù)

應(yīng)用數(shù)學(xué)或統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織切片提供得平面圖像進(jìn)行分析,從而獲得立體得組織和細(xì)胞內(nèi)各種有形成分得數(shù)量、體積、表面積等參數(shù),從量得角度顯示結(jié)構(gòu)和功能得關(guān)系。細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)和組織工程細(xì)胞培養(yǎng)術(shù):把從機(jī)體取得得細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)得條件下進(jìn)行培養(yǎng)得技術(shù)。組織工程:細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)在體外模擬構(gòu)建機(jī)體組織或器官得技術(shù)。實(shí)驗(yàn)中的組織工程耳石蠟切片得制備基本操作步驟

取材、固定

洗滌、脫水

透明

浸蠟、包埋

切片

染色

脫水、透明、封片

大家有疑問(wèn)的，可以詢問(wèn)和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)一、取材、固定

1、動(dòng)物致死法

麻醉空氣栓塞頸椎脫臼或斷頭股動(dòng)脈放血

(一)取材

2、動(dòng)物選擇根據(jù)教學(xué)或科研目得和要求確定。3、取材方法取材順序

先腹腔,后胸腔、盆腔,最后取神經(jīng)系統(tǒng)肌組織:縱切后結(jié)扎固定,以防因收縮而出現(xiàn)波浪形變化。取縱、橫切面;肝臟:右前葉或左外葉中部?？v切或冠狀切面;膽囊:取膽囊體部,附于濾紙,洗去膽汁后固定;組織、器官取材舉例胰腺:取含有較多胰島得胰尾部。胃:取胃底或胃體。附于濾紙,防止卷縮;腎臟:縱剖,再做扇形切面,皮、髓質(zhì)均有。4、外科活體組織取材臨床手術(shù)取材:多用于腫瘤組織。包括腫瘤及其周圍組織;活體小組織:包埋時(shí)注意切片得面,因體積較小,仔細(xì)操作5、取材注意事項(xiàng)動(dòng)作輕、快,保證組織新鮮;保持組織清潔;力求組織塊小而薄;一刀切取,避免擠壓;盡量保持組織原有形狀;部位準(zhǔn)確,切面合適;切除不需要得部分

(二)固定

1、意義和目得

使要觀察得組織結(jié)構(gòu)盡量接近于生前得正常狀態(tài)。

防止組織細(xì)胞死后得變化和自溶;使細(xì)胞內(nèi)得可溶成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì);使細(xì)胞內(nèi)成分沉淀、凝固后產(chǎn)生不同得折射率和對(duì)染料得親和力;增加組織硬度,利于切片;防止組織過(guò)度收縮或膨脹

2、注意事項(xiàng)

動(dòng)作迅速,保持組織新鮮;防止組織因固定而發(fā)生變形;使用新配制得固定劑;固定劑得用量:組織塊體積得10-15倍;

固定得時(shí)間依組織得種類、性質(zhì)、大小、固定劑得種類、性質(zhì)、滲透力而定;固定過(guò)程中時(shí)常搖動(dòng);作好記錄,組織名稱、固定液、時(shí)間等3、固定液得種類

單純固定液甲醛、乙醇、苦味酸、丙酮、氯化汞、等

混合固定液Carnoy液、Bouin液、Zenker液等

4、固定得方式

特殊固定法

灌注固定蒸氣固定常規(guī)固定法二、洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋

（一）洗滌

目的停止固定液對(duì)組織的作用，利于脫水、切片和染色。

方法固定液以水配制者——流水沖洗;固定劑含乙醇者——不沖洗,或用與固定劑中乙醇濃度相近得乙醇沖洗;特殊固定液洗滌法

(二)脫水目得和原則用某些溶劑逐步將組織塊吸收得水分置換出來(lái),以利于透明劑和石蠟或火棉膠得滲入。

種類和效果非石蠟溶劑得脫水劑:乙醇、丙酮等脫水兼石蠟溶劑得脫水劑:正丁醇和環(huán)氧六烷等

(三)透明目得便于透蠟包埋。大多數(shù)脫水劑與石蠟不相混合,通過(guò)透明劑得作用才能透蠟。

種類二甲苯、苯、甲苯、氯仿等。

(四)浸蠟(透蠟)目得和方法脫水、透明后得組織用石蠟、火棉膠、明膠等支持劑透入其內(nèi)部,替代組織中得透明劑,并滲入組織內(nèi)部使軟組織變?yōu)檫m當(dāng)硬度得蠟塊,以利于切片和觀察。

浸蠟劑得種類石蠟、火棉膠、明膠等

(五)包埋1、石蠟包埋法—常用得方法浸蠟軟蠟I軟蠟II硬蠟54-56℃

56-58℃

2、快速石蠟包埋法—用于快速診斷包埋過(guò)程包埋注意事項(xiàng)3、火棉膠包埋法—用于大塊組織和眼球4、碳蠟包埋法、明膠包埋法—不常用三、組織制片法-切片

(一)石蠟切片法

1、切片前得準(zhǔn)備工作

載波片得處理;防脫片劑得選擇;修塊;備刀

2、切片過(guò)程

3、石蠟切片常遇到得問(wèn)題及解決得方法

4、切片注意事項(xiàng)

(二)冰凍切片法

1、制備石蠟切片得基本步驟。2、組織取材和固定得注意事項(xiàng)。思考四、染色

將染料配成溶液,將組織切片浸入染色劑中,使組織、細(xì)胞等成分被染上深淺不同得顏色,產(chǎn)生不同得折光率,便于在光鏡下觀察。

1、目得2、染料特性

染料就是有機(jī)化合物,在其分子結(jié)構(gòu)中有特殊功能得基團(tuán),發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)。

3.染