人教課標(biāo)實(shí)驗(yàn)版生物技術(shù)實(shí)踐（選修1）專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

第40講

微生物的利用第十一單元生物技術(shù)實(shí)踐考綱要求

1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。3.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。4.微生物在其他方面的應(yīng)用。考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)考點(diǎn)二微生物的篩選和計(jì)數(shù)內(nèi)容索引知識(shí)網(wǎng)絡(luò)

答題語(yǔ)句重溫高考演練模擬課時(shí)作業(yè)考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其_____

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)組成：一般都含有

和無(wú)機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)

、氧氣以及

的要求。(3)種類①按照物理性質(zhì)可分為

培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來(lái)源可分為天然培養(yǎng)基和

培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、

培養(yǎng)基等。梳理知識(shí)要點(diǎn)生長(zhǎng)水、碳源、氮源pH特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)液體合成鑒別營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)繁殖2.無(wú)菌技術(shù)(1)含義：在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止

的方法。(2)常用方法煮沸消毒法______________紫外線消毒法區(qū)別：能否殺死消毒無(wú)菌

技術(shù)滅菌防止________的入侵灼燒滅菌____________________全部微生物關(guān)鍵化學(xué)藥劑消毒法外來(lái)雜菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌雜菌污染____3.大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量滅菌倒平板計(jì)算溶化____→→→→______(2)純化大腸桿菌的方法①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面

的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。連續(xù)劃線特別提醒a(bǔ).操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：

第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者b.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。c.第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。d.劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。e.劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的

，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。梯度稀釋(3)菌種的保存方法①對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用

的方法。②對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用

的方法。臨時(shí)保藏甘油管藏1.判斷常考語(yǔ)句，澄清易混易錯(cuò)(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)(

)(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(

)(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(

)(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(

)(5)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落(

)診斷與思考√×√√×2.分析命題熱圖，明確答題要點(diǎn)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)思考：(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？獲得效果A的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果B的接種方法為平板劃線法。提示(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。提示(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域。提示

命題點(diǎn)一培養(yǎng)基及其制備方法分析探究命題方向1.下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸餾水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培

養(yǎng)基B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C.該培養(yǎng)基缺少提供生長(zhǎng)因子的物質(zhì)D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用答案解析分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒(méi)有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍(lán)等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項(xiàng)錯(cuò)誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，B項(xiàng)正確；該培養(yǎng)基中存在的無(wú)機(jī)鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是生長(zhǎng)因子，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進(jìn)行滅菌等操作后才能使用，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2.高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答：答案解析命題點(diǎn)一培養(yǎng)基及其制備方法分析(1)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來(lái)看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入_____作為凝固劑，從用途來(lái)看屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以____作為唯一碳源。瓊脂淀粉固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實(shí)驗(yàn)的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養(yǎng)基加熱溶化時(shí)，要注意加入瓊脂后要不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對(duì)培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細(xì)觀察題圖可知過(guò)程，

①是菌液稀釋過(guò)程，②是采用涂布法接種。能產(chǎn)生淀粉酶的部分細(xì)菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以擴(kuò)大培養(yǎng)用于生產(chǎn)。

(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板答案(3)溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地_____，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法一般為_____________。(4)①過(guò)程是_____，②過(guò)程所使用的接種方法是________法。(5)部分嗜熱菌在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放_(tái)______分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行_____培養(yǎng)。答案攪拌高壓蒸汽滅菌稀釋涂布分離淀粉酶擴(kuò)大1.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。歸納整合2.微生物對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求特點(diǎn)(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)鹽，碳源可來(lái)自大氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。

命題點(diǎn)二無(wú)菌技術(shù)的操作3.微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作?，F(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染。請(qǐng)分析下列操作中錯(cuò)誤的是①煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢②接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行③無(wú)菌繁殖脫毒苗時(shí)，植物的外植體要進(jìn)行消毒④家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌⑤培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌⑥加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌A.①③ B.②④ C.③⑤ D.④⑥答案解析無(wú)菌操作包括消毒和滅菌。需進(jìn)行消毒處理的有植物的外植體及操作人員的雙手等，需進(jìn)行滅菌的有器皿、培養(yǎng)基、添加劑(指示劑或染色劑)等。煮沸可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢，屬于消毒；為防止空氣中雜菌污染，接種時(shí)要在酒精燈火焰附近進(jìn)行；家庭制作葡萄酒時(shí)所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。故④⑥操作錯(cuò)誤。4.牛奶是微生物培養(yǎng)的良好培養(yǎng)基，牛奶在飲前都要經(jīng)過(guò)巴氏消毒，以殺死有害微生物，為檢測(cè)消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況，做如圖所示操作。用無(wú)菌吸管從錐形瓶中吸取1mL生牛奶稀釋液至盛有9mL無(wú)菌水的試管中，混合均勻，如此再重復(fù)2次。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：命題點(diǎn)二無(wú)菌技術(shù)的操作(1)巴氏消毒的方法是__________________________________，使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是______________________。(2)取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的涂布工具是圖中的__。答案在70～75℃煮30min(在80℃煮15min)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞B(3)圖中所示方法為稀釋涂布平板法，理想情況下，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個(gè)、33個(gè)、34個(gè)，則可以推測(cè)生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為________個(gè)，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值_____(填“偏大”或“偏小”)，原因是____________________________________。答案3.4×106偏小個(gè)別菌落可能是由2個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死，若繼續(xù)用該方法檢測(cè)消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量，則在操作步驟上應(yīng)做什么改動(dòng)？_____________。(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌，從中檢測(cè)出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入_________，菌落具有__________________特征的可以認(rèn)定為大腸桿菌。答案稀釋次數(shù)減少伊紅美藍(lán)(金屬光澤的紫)黑色易混辨析消毒和滅菌項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對(duì)人體有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌5.下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結(jié)果。命題點(diǎn)三大腸桿菌的純化方法及過(guò)程分析

下列敘述中錯(cuò)誤的是A.甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液B.對(duì)于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不一

定是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端答案解析灼燒后的涂布器如果沒(méi)有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過(guò)低會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密度越來(lái)越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，D正確。6.下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：命題點(diǎn)三大腸桿菌的純化方法及過(guò)程分析(1)圖甲是利用________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用_____________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和_______；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是_________和酒精消毒。平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)涂布器灼燒滅菌答案解析圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于酒精燈火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進(jìn)行。在微生物培養(yǎng)過(guò)程中為防止培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)形成水珠落入培養(yǎng)基中影響菌體生長(zhǎng)，故需要倒置培養(yǎng)。(2)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？______________________。答案火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域(3)接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？______________________________________________。(4)下圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是_____(填“圖甲”或“圖乙”)。防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基圖乙歸納提升兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌考點(diǎn)二微生物的篩選和計(jì)數(shù)1.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣?/p>

，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到

作用。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用

。梳理知識(shí)要點(diǎn)脲酶催化稀釋涂布平板法①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中

個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是________________________________________。③利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)?/p>

。特別提醒用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低

，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→

→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。130～300(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)稀釋度樣品的稀釋知識(shí)拓展用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法①結(jié)構(gòu)：常用的是1mm×1mm×0.1mm方格的計(jì)數(shù)板(如圖)。每個(gè)計(jì)數(shù)板上有兩個(gè)計(jì)數(shù)室，每個(gè)計(jì)數(shù)室上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的大方格為計(jì)數(shù)室，大方格的長(zhǎng)和寬各為1mm，深度為0.1mm，其容積為0.1mm3；大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格，即大方格是由400個(gè)小方格組成。②操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的菌液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，充滿計(jì)數(shù)室。③計(jì)數(shù)：在顯微鏡下計(jì)數(shù)4～5個(gè)中方格內(nèi)的菌體數(shù)，求出每個(gè)小方格所含有的細(xì)菌的平均數(shù)，按照以下公式計(jì)算：每毫升原液含有的菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×104×原液被稀釋倍數(shù)。2.分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一種

，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即________________________。復(fù)合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶②作用(2)纖維素分解菌的篩選①原理纖維素葡萄糖苷酶C1酶CX酶_________纖維二糖_______葡萄糖剛果紅纖維素___________紅色復(fù)合物纖維素分解菌纖維素酶紅色消失，出現(xiàn)_______透明圈②篩選方法：

染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生

來(lái)篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基：以

為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。剛果紅透明圈纖維素④實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含

的環(huán)境

↓選擇培養(yǎng)：用

培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度

↓

：制備系列稀釋液

↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上

↓挑選產(chǎn)生

的菌落纖維素選擇培養(yǎng)基梯度稀釋透明圈1.判斷?？颊Z(yǔ)句，澄清易混易錯(cuò)(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(

)(2)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法(

)(3)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源(

)(4)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(

)(5)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌(

)診斷與思考××××√2.分析命題熱圖，明確答題要點(diǎn)研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同的溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見(jiàn)圖2，請(qǐng)分析：圖1圖2(1)透明圈是如何形成的？提示剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。細(xì)菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解成纖維二糖和葡萄糖，形成透明圈。(2)圖中透明圈大小代表什么？降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是哪種？透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強(qiáng)的是菌株①。提示(3)結(jié)合圖2推測(cè)哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。提示圖2

命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析探究命題方向1.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢怼⒒瘜W(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來(lái)。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為A.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基B.含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基C.含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基D.含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基答案解析酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)榍嗝顾匾种萍?xì)菌生長(zhǎng)，但不能抑制真菌生長(zhǎng)。硝化細(xì)菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用氨轉(zhuǎn)變?yōu)閬喯跛岷拖跛崴尫诺哪芰?，把無(wú)機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物以維持自身生命活動(dòng)，利用含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基可進(jìn)行選擇培養(yǎng)。2.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析(1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入_____作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基_____(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用_____________法。苯酚影響稀釋涂布平板答案解析根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，在培養(yǎng)基中加入或不加某些物質(zhì)以達(dá)到促進(jìn)目的菌生長(zhǎng)，抑制或阻止其他雜菌生長(zhǎng)的目的，然后再用稀釋涂布平板法、平板劃線法或其他方法篩選出單個(gè)目的菌落，再進(jìn)行接種培養(yǎng)即可獲得純目的菌。為防止培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)形成的水珠落入培養(yǎng)基中影響菌體生長(zhǎng)，所以要將培養(yǎng)皿倒置。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意單一變量原則和對(duì)照原則，操作中要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。(2)④為對(duì)照，微生物在④中不生長(zhǎng)，在⑤中生長(zhǎng)，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_________________________________________________________________；使用_________________________法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是_____________________________________________。④的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基答案(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其他微生物的污染？_______________________________________________。答案培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程進(jìn)行無(wú)菌操作規(guī)律方法(1)在培養(yǎng)基全部營(yíng)養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，從而可將該菌分離出來(lái)；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)，從而分離得到酵母菌和霉菌。選擇培養(yǎng)基的制作方法(2)通過(guò)改變培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無(wú)法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無(wú)法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。(3)利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生長(zhǎng)，從而分離出能消除石油污染的微生物。(4)通過(guò)某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無(wú)法生存。命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)3.下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，據(jù)此回答下列問(wèn)題：培養(yǎng)基配方KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)從作用上看，該培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基，提供氮源的物質(zhì)是______，細(xì)菌能利用該氮源是由于體內(nèi)能合成__________________酶。答案解析選擇尿素脲(催化尿素分解的)題干指出表中是分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，其中尿素是唯一氮源，能生長(zhǎng)的菌落說(shuō)明能利用尿素中的氮源，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇尿素分解菌，所以從用途上屬于選擇培養(yǎng)基。(2)在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入_____指示劑，若指示劑變___，說(shuō)明有目的菌株存在。答案解析在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說(shuō)明有目的菌株存在。酚紅紅(3)為了測(cè)定微生物的數(shù)量，接種時(shí)應(yīng)采用____________法，某同學(xué)在4個(gè)培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106的土壤樣液0.1mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則每毫升原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為________個(gè)，測(cè)定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)____(填“低”、“高”或“基本一致”)。純化微生物可以用稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法能用于微生物的計(jì)數(shù)。1mL原土壤樣液中上述微生物數(shù)量＝(180＋155＋176＋129)÷4×106×10＝1.6×109個(gè)；稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)的數(shù)量比實(shí)際數(shù)量會(huì)偏少，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。稀釋涂布平板1.6×109低答案解析4.(2016·天水一中期末)某實(shí)驗(yàn)小組欲從豆油污染的土壤中篩選出高效降解脂肪的菌株。請(qǐng)回答：(1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_____為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。(2)為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈____狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行_________處理。為了排除________________________________________________，需設(shè)置接種等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。答案命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)豆油選擇倒置梯度稀釋實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(培養(yǎng)基被污染)(3)為了篩選出菌株，可將適量的________________試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是___________________________________，則說(shuō)明此種菌能夠分泌脂肪酶。(4)純化菌種時(shí)，為了得到菌落，可采用________法接種于新的培養(yǎng)基平板上。(5)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行的原因是__________________________。答案蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)出現(xiàn)透明圈(不出現(xiàn)橘黃色圈或紅色圈)平板劃線避免周圍環(huán)境中微生物的污染歸納提升兩種微生物篩選方法的比較項(xiàng)目土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長(zhǎng)，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長(zhǎng)，從而起到選擇作用因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會(huì)而大量繁殖特有代表過(guò)程知識(shí)網(wǎng)絡(luò)答題語(yǔ)句構(gòu)建知識(shí)網(wǎng)絡(luò)1.無(wú)菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。2.培養(yǎng)基的制備包括計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。3.大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次劃線，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。4.微生物的計(jì)數(shù)要求制作多個(gè)平板，且每個(gè)平板上能長(zhǎng)出30～300個(gè)菌落。5.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。必背答題語(yǔ)句重溫高考演練模擬1.漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是(多選)答案解析A.生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C.在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株√√1234漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場(chǎng)所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落可能還有其他雜菌，可再通過(guò)平板劃線法進(jìn)一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在低溫下長(zhǎng)期保存菌株，D錯(cuò)誤。12342.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上√答案解析1234A項(xiàng)，高壓滅菌過(guò)程中加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻，待壓力表的壓力降到零時(shí)，再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項(xiàng)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項(xiàng)，灼燒接種環(huán)之后，要在火焰旁冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項(xiàng)，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。12343.(2016·全國(guó)乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作無(wú)菌平板；③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。1234回答下列問(wèn)題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于______________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_____。答案解析牛肉膏、蛋白胨瓊脂牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。1234(2)步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_____________________________________________________________。答案解析將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，需要設(shè)置多個(gè)平行組。位置上，開蓋暴露一段時(shí)間1234(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了

現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法______(填“正確”或“不正確”)。答案解析污染在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過(guò)程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。不正確12344.(2016·四川，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。答案解析(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_____為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加____作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成___色。尿素酚紅紅1234脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。1234(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是______________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為____×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較__。答案解析稀釋涂布平板法1.75少1234用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為(156＋178＋191)÷3÷0.1×105＝1.75×108。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。1234(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_____，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含____個(gè)氨基酸。答案解析1234UGA115密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，箭頭處插入的70個(gè)核苷酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊隨其后是UGA，應(yīng)為終止密碼，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個(gè)氨基酸。課時(shí)作業(yè)1.(2017·張家口檢測(cè))下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說(shuō)法，正確的是A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基B.接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的

滅菌處理C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過(guò)程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D.分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源√答案解析12345678910天然培養(yǎng)基是指用天然物質(zhì)制成的培養(yǎng)基，但也需要加工；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手應(yīng)消毒，不能滅菌；分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳源。123456789102.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的重要工具，下列敘述正確的是A.每塊血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的正中央有1個(gè)計(jì)數(shù)室B.計(jì)數(shù)室的容積為1mm×1mm×0.1mmC.蓋蓋玻片之前，應(yīng)用吸管直接向計(jì)數(shù)室滴加樣液D.計(jì)數(shù)時(shí)，不應(yīng)統(tǒng)計(jì)壓在小方格角上的細(xì)胞√答案解析123456789101mm×1mm×0.1mm方格的計(jì)數(shù)板，有兩個(gè)計(jì)數(shù)室，A項(xiàng)錯(cuò)誤，B項(xiàng)正確；滴加樣液時(shí)，采用的是“滲入法”，滴之前，先將蓋玻片蓋住計(jì)數(shù)室，然后從一側(cè)滴加培養(yǎng)液，C項(xiàng)錯(cuò)誤；計(jì)數(shù)時(shí)對(duì)壓在方格四條線上的細(xì)胞只計(jì)數(shù)相鄰兩邊及其夾角上的細(xì)胞，D項(xiàng)錯(cuò)誤。123456789103.(2016·鄭州測(cè)試)下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列敘述正確的是答案解析A.在五個(gè)區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B.劃線操作時(shí)完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C.接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來(lái)，以便比較前后的菌落數(shù)√12345678910在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌；進(jìn)行劃線操作時(shí)，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。123456789104.下面關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的敘述中，正確的是A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則

表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌答案解析√12345678910只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正確；篩選分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，采用的是以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，

B錯(cuò)誤；統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用稀釋涂布平板法，C錯(cuò)誤；在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑變紅，這樣就能初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素，

D錯(cuò)誤。123456789105.某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次√答案解析培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再?gòu)纳洗蝿澗€的末端開始進(jìn)行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)過(guò)程中一般每隔12h或24h觀察一次。123456789106.(2015·全國(guó)Ⅰ，39)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問(wèn)題：(1)顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈_______________染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_______(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。答案解析蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)萃取法生物組織中的油脂能被蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)染成橘黃色(或紅色)。12345678910(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以_____為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。答案解析油脂為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應(yīng)選用只能讓該菌落生長(zhǎng)的選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中只能選用油脂作為唯一碳源。12345678910(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用______________直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用_____________法進(jìn)行計(jì)數(shù)。答案解析血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板可用于直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計(jì)數(shù)活菌數(shù)量可采用稀釋涂布平板法。12345678910(4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、

6mg，則上述三個(gè)溫度中，__℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞___℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。答案解析4540溫度影響酶的活性，在三個(gè)溫度中，45℃需酶量最高，說(shuō)明酶活性最低；在三個(gè)溫度實(shí)驗(yàn)中，40℃所需酶量最少，低于35℃和45℃所用酶量，說(shuō)明酶的最適溫度介于35℃和45℃之間，因此應(yīng)圍繞40℃設(shè)計(jì)不同溫度梯度，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。123456789107.在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進(jìn)行微生物的分離和計(jì)數(shù)。(1)下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方：A組KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0g12345678910B組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質(zhì)溶解后，均用蒸餾水定容至1000mL。12345678910①?gòu)墓δ苌蟻?lái)看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于_____培養(yǎng)基。答案解析②如果要對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離，則需要選擇__培養(yǎng)基(填“A”或“B”)，該培養(yǎng)基中的碳源是_______。選擇A葡萄糖據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析，A組中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離時(shí)，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)選擇A組培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是葡萄糖。答案解析12345678910③在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入_____指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細(xì)菌能否分解尿素，若有分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基將會(huì)呈現(xiàn)_____。答案解析酚紅尿素分解菌可以用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘倍筽H升高，使酚紅指示劑呈紅色。紅色12345678910(2)右圖是某同學(xué)采用的接種微生物的方法，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：據(jù)圖分析，圖示表示平板劃線法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上應(yīng)注意每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。①本實(shí)驗(yàn)采用的接種微生物的方法是_________法，把聚集的菌種逐步_____分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意：__________________________________________________________(至少答2項(xiàng))。平板劃線稀釋每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線答案解析12345678910②三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)計(jì)結(jié)果：甲同學(xué)涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；乙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中，___同學(xué)的統(tǒng)計(jì)是正確的。答案解析乙在進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板，同時(shí)為避免誤差應(yīng)選擇至少3個(gè)或3個(gè)以上的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)并取平均值。123456789108.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請(qǐng)回答有關(guān)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的問(wèn)題：(1)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的含量時(shí)，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為_______________。判斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是____。答案解析稀釋涂布平板法D12345678910D中菌落分布情況為平板劃線法所得。為判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格，本實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對(duì)照。要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，若發(fā)現(xiàn)有菌落說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染。消毒是指使用較溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行滅菌處理，對(duì)操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒。12345678910(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)