飼料中脂溶維生素檢測技術(shù)及研究進展

飼料中脂溶維生素檢測技術(shù)及研究進展國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（北京）趙小陽報告內(nèi)容維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素質(zhì)控案例分析及解決方案維生素檢測風險規(guī)避維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）

?飼料和飼料添加劑管理條例?2012年5月1日起實行。目前飼料和飼料添加劑生產(chǎn)企業(yè)及用戶最為關(guān)注的。

第三章第十四條第三項中規(guī)定：飼料和飼料添加劑生產(chǎn)企業(yè)必須具備有必要的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗機構(gòu)、人員、設(shè)施和質(zhì)量管理制度。相關(guān)配套法規(guī)：?飼料添加劑（混合劑）生產(chǎn)企業(yè)許可條件??飼料生產(chǎn)企業(yè)許可條件?中規(guī)定：

固、液態(tài)維生素預混合飼料生產(chǎn)企業(yè)配備高效液相色譜儀（配備紫外檢測器），要求能夠檢測維生素。維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）一.已頒布實施的13項飼料和飼料添加劑維生素A、D3、E、K3的國家標準：GB/T7292-1999飼料添加劑維生素A乙酸酯微粒GB/T23386-2009

飼料添加劑維生素A棕櫚酸酯GB/T9840-2006飼料添加劑維生素D3微粒NY/T1246-2006飼料添加劑維生素D3（膽鈣化醇）油GB/T7293-2006飼料添加劑維生素E粉GB/T9454-2008飼料添加劑維生素EGB/T9455-2009飼料添加劑維生素AD3微粒GB/T7294-2009飼料添加劑亞硫酸氫鈉甲鈉醌（維生素K3）GB/T26442-2010飼料添加劑亞硫酸氫煙酰胺甲鈉醌GB/T17817-2010飼料中維生素A的測定高效液相色譜法GB/T17818-2010飼料中維生素D3的測定高效液相色譜法GB/T17812-2008飼料中維生素E的測定高效液相色譜法GB/T18872-2002飼料中維生素K3的測定高效液相色譜法維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）項目標準號1224號公告產(chǎn)品規(guī)格樣品制備檢測方法技術(shù)指標維生素A乙酸酯微粒GB/T7292-1999粉劑≥50萬IU/g油劑≥250萬IU/g50萬IU/g0.1%氨水酶解，乙醇提取液相色譜含量為標示量的90-120%維生素E粉GB/T7293-2006≥50.0%≥50.0%1.1mol/L鹽酸超聲提取，加乙醇、內(nèi)標2.甲醇超聲提取30min1.氣相色譜(仲裁法)2.液相色譜≥50.0%維生素K3GB/T7294-2006≥96.0%≥98.0%≥50.0%≥51.0%水溶解,三氯甲烷和碳酸鈉溶液萃取1.紫外分光光度法2.液相色譜(仲裁法)≥50.0%≥51.0%維生素EGB/T9454-2008

油劑≥92.0%≥92.0%1.內(nèi)標溶液(正三十二烷)溶解2.甲醇超聲溶解10min.1.氣相色譜(仲裁法)2.液相色譜≥92.0%維生素D3微粒GB/T9840-2006≥50萬IU/g50萬IU/g1.皂化乙醚萃取2.正己烷萃取1.正、反相色譜2.正相色譜含量為標示量的90-120%維生素D3油NY/T1246-2006≥100萬IU/gVD3油劑正己烷萃取正相色譜含量為標示量的90-110%維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）二.在研標準：GB/T7292-1999飼料添加劑維生素A乙酸酯微粒標準名稱改為《飼料添加劑維生素A乙酸酯（微粒/油）》；增加適用范圍：包括：50萬IU/g、65萬IU/g、100萬IU/g，或根據(jù)合同要求確定。鑒別實驗補充高效液相色譜法鑒別。根據(jù)不同企業(yè)合成工藝，對提取方法進行改進，由超聲提取10min改為30min；規(guī)定重復性：同一分析者對同一試樣同時兩次平行測定所得結(jié)果的相對偏差不大于5%。補充衛(wèi)生指標及檢驗方法。

補充了維生素A油劑的檢驗標準。

維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素A乙酸酯標準溶液色譜圖維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素A乙酸酯樣品溶液色譜圖維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）二.在研標準：GB/T9840-2006飼料添加劑維生素D3微粒參與的修訂工作：建議補充反相色譜檢驗方法。

NY/T1246-2006飼料添加劑維生素D3（膽鈣化醇）油（制定強制性國家標準）進一步完善標準的適用范圍，增加了反相色譜檢驗方法，增加了強制執(zhí)行的衛(wèi)生指標,技術(shù)關(guān)鍵點：預D3與D3的轉(zhuǎn)換系數(shù)的測定。維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素D3標準溶液反相色譜圖維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素D3標準溶液90℃加熱30min后反相色譜圖維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）維生素D3油劑樣品反相色譜圖維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）二.在研標準：GB/T18872-2002飼料中維生素K3的測定高效液相色譜法1224號公告在配合飼料或全混合日糧中的推薦添加量：

豬：0.5mg/kg；雞：0.4～0.6mg/kg；鴨：0.5mg/kg；水產(chǎn)動物：2～16mg/kg。最高限量：

豬：10mg/kg；雞：5mg/kg。定量限改為0.4mg/kg，補充MNB、MPB的檢驗方法，氨水水解改為碳酸鈉水解。

維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）三.飼料中維生素A、D3、E的檢驗方法標準：ISO方法：

ISO6867-2000動物飼料維生素E含量的測定高效液相色譜法

ISO14565-2002動物飼料維生素A含量的測定高效液相色譜法AOAC(美國官方分析化學家協(xié)會)方法：

AOACOfficialMethod2001.13DeterminationofVitamin

A(Retinol)inFoodsLiquidChromatography(FirstAction2001)

AOACOfficialMethod999.15VitaminKinMilkandInfantFormulasLiquidChromatographicMethod(FirstAction1999)

AOACOfficialMethod995.05VitaminDInfantFormulasandEnteralProductsLiquidChromatographicMethod(FirstAction1995)維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）國家標準與國際方法比較：ISO、AOAC方法：樣品預處理也是皂化法，石油醚萃取，HPLC測定。國家標準：對于維生素預混料的檢測補充了快速提取法，可針對不同樣品用不同提取方法，提高了工作效率，方法更加科學完善。維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）國標仲裁法原理維生素A以堿水解，將酯轉(zhuǎn)化為醇，乙醚提取維生素A，去除水溶性物質(zhì),經(jīng)色譜柱分離,HPLC帶紫外可調(diào)波長檢測器(或二極管矩陣檢測器)檢測含量。維生素D3以堿溶液皂化試樣，去除脂肪，乙醚提取維生素D3，HPLC測定，外標法計算含量。維生素E以堿溶液皂化試樣，使試樣中生育酚釋放出來，添加的生育酚乙酸酯轉(zhuǎn)化為游離的生育酚，乙醚提取，HPLC測定，外標法計算含量。維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）第一法：皂化提取法（仲裁法）:

維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）第二法：直接提取法:

適用范圍：適用維生素預混料，第二法樣品預處理簡單、快速、準確，提高了實驗室工作效率。

原理：用甲醇提取維生素預混料中的維生素A、D3、E，經(jīng)色譜柱分離，紫外檢測器（或二極管矩陣檢測器）測定，外標法計算含量。

關(guān)鍵點：VA在甲醇中不穩(wěn)定，樣品處理之后，馬上上HPLC檢測。維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）

維生素預混料中維生素A的色譜圖：維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）

維生素預混料中維生素D3的色譜圖：維生素檢測依據(jù)（現(xiàn)行標準及在研進展）

維生素預混料中維生素E的色譜圖：維生素質(zhì)控案例分析及解決方案一.標準的適用范圍：例如：本標準方法適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混料和維生素預混料。

案例一：送檢的樣品：液體多維（VA）、稚蟹粉（VD3）、竹葉提取物飼料添加劑預混料（A、D3、E、K3）、棕櫚顆粒（A、D3、E、K3）酵母粉（VA）等，如果不在標準適用范圍內(nèi)，可以檢測，但不接受檢測結(jié)果的復議。

維生素質(zhì)控案例分析及解決方案二.適用范圍符合,但是沒有達到定量限案例二:生產(chǎn)企業(yè)自檢：魚用多維中維生素D3含量100萬IU/kg（定量限500萬IU/kg），用直接提取法檢測含量不夠，使用客戶投訴生產(chǎn)企業(yè)。

原因：使用檢測方法不對，雖然是維生素預混料，但是含量沒有達到方法規(guī)定的定量限，色譜峰基線沒有回到原點，基線傾斜，積分誤差大，結(jié)果偏低，必須用皂化方法處理樣品，才能得到準確結(jié)果。由于皂化法很煩瑣，處理兩三個樣品需要一整天的時間，多數(shù)維生素生產(chǎn)企業(yè)不愿意使用皂化方法。

案例三:復合預混料中葉酸添加200mg/kg，未檢出，標準方法中規(guī)定的定量限500mg/kg，生產(chǎn)企業(yè)可以跟使用企業(yè)協(xié)商用企標檢驗。

新標準對企業(yè)的影響-維生素質(zhì)控案例分析及解決方案定量限第一法第二法維生素A1000IU/kg106IU/kg維生素D3500IU/kg5×106IU/kg維生素E1mg/kg20mg/kg維生素K3(測量范圍)≥2.0mg/kg維生素質(zhì)控案例分析及解決方案

三.標準中的仲裁檢驗方法：

如果使用標準中的非仲裁方法（快速、簡便）檢測結(jié)果不符，一般要再用仲裁法檢測。案例四：送檢維生素預混和飼料中的維生素D3,檢測結(jié)果只有添加量的60%，為了查找原因又送來同一批六個維生素D3原料檢測，用非皂化方法檢測含量只有38-40萬IU/g,用仲裁法檢測，檢測結(jié)果為54萬IU/g。原因：維生素D3的劑型不同，水彌散型的劑型樣品預處理必須皂化，直接用有機溶劑提取不完全，后來得知客戶所用的該產(chǎn)品的生產(chǎn)企業(yè)確實生產(chǎn)水溶維生素D3。由于客戶沒有提供詳細的樣品信息，同時生產(chǎn)企業(yè)與使用企業(yè)之間對標準了解欠缺，造成了一些糾紛。維生素質(zhì)控案例分析及解決方案檢測結(jié)果仲裁法(萬IU/g)直接提取法(萬IU/g)VD354.139.2VD354.640.6VD354.439.0VD354.640.6VD353.541.5VD355.239.8維生素質(zhì)控案例分析及解決方案三.企業(yè)標準與國家標準產(chǎn)品含量規(guī)定不一致：飼料標簽是強制執(zhí)行的基礎(chǔ)標準，標簽上必須注明產(chǎn)品質(zhì)量執(zhí)行的標準。

案例五：標簽注明的是執(zhí)行國家標準，國標中該產(chǎn)品含量計算時沒有注明以干基計，但是標簽上產(chǎn)品含量標注的是以干基計，與國標不一致。

維生素質(zhì)控案例分析及