遺傳病產(chǎn)前篩查與診斷

遺傳病產(chǎn)前篩查與診斷產(chǎn)前篩查遺傳病與遺傳學(xué)檢測方法產(chǎn)前診斷一三四二遺傳學(xué)檢測方法在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用一、產(chǎn)前篩查產(chǎn)前篩查（

Prenatal

screening

）是指通過使用無創(chuàng)方法對孕早、中期孕婦進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)胎兒的檢測。不是診斷，高風(fēng)險(xiǎn)胎兒必須產(chǎn)前診斷為什么要做產(chǎn)前篩查！染色體病綜合征目前已報(bào)道112種染色體微缺失微重復(fù)綜合癥目前已報(bào)道139種染色體異常染色體非整倍體染色體部分重復(fù)/缺失小的染色體拷貝數(shù)變異（CNVs）異常表型外觀異常生長、發(fā)育異常、精神發(fā)育遲滯多發(fā)畸形自閉癥行為目前產(chǎn)前篩查技術(shù)病種NIPT（n=311,283）傳統(tǒng)血清篩查特異性靈敏度PPV特異性靈敏度T2199.97%99.26%94.80%1.00%65.00%T1899.98%100.00%89.81%<1.00%<50.00%T1399.98%100.00%49.63%NA*NA*NIPT的科學(xué)基礎(chǔ)

–

血漿游離胎盤DNA胎兒游離DNA：cell-free

fetal

DNA（cffDNA）Lancet.1997胎盤來源母體外周血含有的cffDNA，幾乎全部來源于胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞。檢出時(shí)限懷孕4周可檢出，8周后含量上升并穩(wěn)定存在。1220%

胚胎DNA含量NIPT技術(shù)實(shí)現(xiàn)過程-高通量測序?qū)嶒?yàn)室證實(shí)臨床實(shí)踐香港中文大學(xué)PNAS文章(2008.10)協(xié)和前瞻性臨床試驗(yàn)(2011.4-2011.10)T21/T18/T13：100%，99.5%T18母親嵌合體，失敗率3.8%，X/Y檢測率低共計(jì)2023例有效樣本T21/T18/T13/T9/XY：100%，99.7%湘雅回顧性臨床試驗(yàn)(2009.3-2011.6)共計(jì)412例有效樣本2011年9月至今NIPT循序漸進(jìn)的研究成果被ISP回D顧的性2015年NIPT指前瞻南性所引臨用床試的驗(yàn)唯二的中文臨文床獻(xiàn)試驗(yàn)自2012年，多國出臺(tái)NIPT指南國際專業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)表NIPT指導(dǎo)意見美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)（ACOG）和美國母胎醫(yī)學(xué)會(huì)（SMFM）美國遺傳學(xué)咨詢協(xié)會(huì)（NSGC）國際婦產(chǎn)科超聲協(xié)會(huì)（ISUOG）國際產(chǎn)前診斷協(xié)會(huì)（ISPD）加拿大婦產(chǎn)科醫(yī)師協(xié)會(huì)（SOGC）美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)及基因組學(xué)學(xué)院（ACMG）意大利母胎醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)中國《2012年產(chǎn)前分子診斷新技術(shù)專家座談會(huì)》討論NIPT技術(shù)"CommitteeOpinionSummaryNo.640:Cell-FreeDnaScreeningForFetalAneuploidy."ObstetGynecol

126(3):691-692.(2015)"PositionstatementfromtheChromosomeAbnormalityScreeningCommitteeonbehalfoftheBoardoftheInternationalSocietyforPrenatalDiagnosis."PrenatDiagn

35(8):725-734.(Benn,Borrelletal.

2015)已有越來越多的數(shù)據(jù)顯示NIPT可以用于中風(fēng)險(xiǎn)人群;首次提出盡管失敗風(fēng)險(xiǎn)高于單胎檢測，但NIPT仍可拓展至雙胎的檢測；明確指出NIPT可以針對研究清楚的染色體微缺失微重復(fù)綜合征進(jìn)行檢測；盡管在中低風(fēng)險(xiǎn)人群中游離DNA檢測的敏感性和特異性與在高危人群中相似，但由于缺乏足夠數(shù)據(jù)，并考慮衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)問題，NIPT仍不能代替現(xiàn)有的一線篩查；取消了NIPT僅能針對高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的說法缺乏足夠的臨床數(shù)據(jù)，對于無創(chuàng)染色體CNV檢測以及雙胎妊娠的檢測，ACOG同樣持保守意見；2015年，ACOG及ISPD權(quán)威指南新進(jìn)展NIPT

Plus，從過去現(xiàn)在到未來T21T18T13T21T18T1345XXXYXYYXXXT21T18T1345XXXYXYYXXX1p362q33.1DiGeorgeCri-du-chatAngelmanPrader-WilliLanger-GiedionT21T18T1345XXXYXYYXXX1p362q33.1DiGeorgeCri-du-chatAngelmanPrader-WilliLanger-Giedion….more全球NIPT-Plus開展情況自2013年，全球共有6家公司提供該項(xiàng)服務(wù)；美國的Sequenom，Natera，Verinata（illumina），Ariosa（羅氏）；歐洲的LifeCodexx；中國貝瑞和康產(chǎn)品名檢測范圍技術(shù)平臺(tái)NateraPanoramaTM T21、T18、T13；45XO、47,XXX、47,XYY、47XXY；；DiGeorge；1p36

deletionIlluminasyndrome；Prader-Willisyndromes/Angelmansyndromes；Cri-du-chat

syndrome；SequenomMATERNIT21 T21、T18、T13、T16、T22；45,XO、47,XXX、47,XYY、47,XXY；DiGeorge；Cri-IlluminaPLUSdu-chatsyndrome；Prader-Willi/Angelmansyndromes；1p36deletion

syndrome；Wolf-Hirschhornsyndrome；Langer-Giedionsyndrome；Jacobsen

syndrome；MaterniTTMGENOME>7Mb的CNVIlluminaIlluminaverifi

PrenatalTestT21、T18、T13、T9、T16；45XO、47,XXX、47，XXY、47，XYY；22q11.2deletionsyndrome；1p36deletionsyndrome；Prader-Willi/Angelmansyndromes；Cri-du-chatsyndrome；Wolf-Hirschhorn

syndrome；IlluminaXcelom敏兒安T21express

TMT21、T18、T13；45,XO、47,XXX、47,XYY、47,XXY；1p36

deletion

syndrome；2q33.1deletionsyndrome；Angelmansyndrome；Cri-du-chatsyndrome；22q11deletion

syndrome（包括DiGeorge

syndrome）；Langer-Giedion

syndrome；Prader-Willi

syndromes；IlluminaNIPT-Plus在湖南省衛(wèi)計(jì)委技術(shù)備案助力湖南出生缺陷防治，健康寶寶特別行動(dòng)“健康寶寶”特別行動(dòng)由湖南省衛(wèi)計(jì)委、湖南省婦幼保健院與湖南家輝遺傳?？漆t(yī)院共同發(fā)起，通過健康教育、高通量基因測序產(chǎn)前篩查、風(fēng)險(xiǎn)評估、遺傳咨詢和妊娠結(jié)局追蹤隨訪等服務(wù)手段，旨在減少出生缺陷的發(fā)生，幫助群眾孕育一個(gè)健康寶寶。試點(diǎn)范圍：衡山縣、耒陽市、桃江縣、桂陽縣、會(huì)同縣、麻陽縣為群眾提供優(yōu)質(zhì)精準(zhǔn)的產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷服務(wù)。通過抽取孕婦外周血，應(yīng)用高通量測序技術(shù)檢測孕婦血漿游離DNA篩查胎兒常見染色體?。ㄒ韵潞喎QNIPT-plus檢測）。試點(diǎn)為期一年時(shí)間，實(shí)施對象為符合生育政策和NIPT-plus檢測條件，夫婦至少一方具有衡山戶籍的中孕期(懷孕12+6-26+6周)孕婦。二、產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷（prenatal

diagnosis），是指對胎兒進(jìn)行先天性缺陷和遺傳性疾病的診斷。《中華人民共和國母嬰保健法》檢測手段：影像學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞和分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等提高人口素質(zhì)，降低出生缺陷使病人安心（結(jié)果是正常的）診斷疾病，提供產(chǎn)前治療（部分疾?。┻x擇合適生育場所盡可能保證安全分娩選擇合適醫(yī)院對患病胎兒出生時(shí)提供治療提供終止妊?的機(jī)會(huì)產(chǎn)前診斷的作用：單基因病染色體病基因組病體細(xì)胞遺傳病線粒體疾病多基因病遺傳病三、遺傳病與遺傳學(xué)檢測方法嚴(yán)重遺傳性疾病，是指由于遺傳因素先天形成，患者全部或者部分喪失自主生活能力，后代再現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)高，醫(yī)學(xué)上認(rèn)為不宜生育的遺傳性疾病。測序?yàn)榛A(chǔ)，MLPAsouthern

blot等10余項(xiàng)技術(shù)組成。以CMA、FISH、NGS等技術(shù)為基礎(chǔ)，共由10余項(xiàng)技術(shù)組成以染色體G顯帶技術(shù)加染色體原位雜交技術(shù)（FISH）為基礎(chǔ)，共由20余項(xiàng)技術(shù)組成。基因?。▎位虿?、多基因病）基因組病染色體病基因病診斷技術(shù)平臺(tái)基因組病診斷技術(shù)平臺(tái)染色體病診斷技術(shù)平臺(tái)三、遺傳病與遺傳學(xué)檢測方法染色體核型分析通過顯帶技術(shù)（如G顯帶）來檢測染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)是否存在異常。（分辨率：>5MB）特納綜合征核型：45,X基因組拷貝數(shù)變異檢測通過染色體微陣列芯片（如SNP-array）等方法來檢測染色體微小片段的缺失或重復(fù)。（分辨率>100KB）7q11.23區(qū)域雜合性缺失324KB測序STK11基因c.545T>CMLPA

（多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)）1bp到數(shù)百bp針對靶序列的點(diǎn)突變、缺失或重復(fù)STK11基因del(exon1)染色體核型分析基因拷貝數(shù)變異檢測一代測序二代測序染色體分辨率>5Mb>100Kb1bp～數(shù)百bp1bp～數(shù)十bp檢測范圍染色體結(jié)構(gòu)或數(shù)目變異染色體數(shù)目變異，不能檢測平衡易位、倒位或插入一個(gè)基因數(shù)百基因、全外顯子組或全基因組檢測時(shí)間長短短長結(jié)果通過主觀判斷更依靠經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)過電腦分析，更加客觀數(shù)據(jù)經(jīng)過電腦分析，更加客觀數(shù)據(jù)經(jīng)過電腦分析，更加客觀費(fèi)用++++～++++++四、遺傳學(xué)檢測方法在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用1.評估2.檢測3.結(jié)果1、胎兒患遺傳病的風(fēng)險(xiǎn)；2、胎兒患何種遺傳??；3、孕婦能否進(jìn)行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷。1、選擇合適的取材方法和時(shí)間進(jìn)行取樣；2、選擇恰當(dāng)?shù)倪z傳學(xué)方法進(jìn)行檢測。1、分析檢測結(jié)果；2、根據(jù)檢測結(jié)果給孕婦及家屬進(jìn)行遺傳咨詢。胎兒狀態(tài)：有無畸形、有無生長發(fā)育遲緩等孕婦孕期有無特殊：孕婦年齡、是否接觸有害物質(zhì)、產(chǎn)前篩查有無異常等、其他：羊水量、胎盤狀況試管嬰兒等家族史：夫婦是否為染色體異常攜帶者、是否生育過嚴(yán)重缺陷嬰兒、是否家族中有遺傳病患者等1.1評估胎兒患遺傳病的風(fēng)險(xiǎn)染色體?。孩?/p>

羊水過多或者過少的；②

胎兒發(fā)育異?；蛘咛河锌梢苫蔚?；③

孕早期接觸過可能導(dǎo)致胎兒先天缺陷物質(zhì)的；④

曾經(jīng)分娩過先天性嚴(yán)重缺陷嬰兒或生育過染色體異?；純?；⑤

夫婦雙方之一為染色體平衡易位、倒位或插入攜帶者⑥

孕婦年齡超過35周歲；⑦

產(chǎn)前篩查提示胎兒染色體疾病高風(fēng)險(xiǎn)⑧

其他1.2

評估胎兒患何種遺傳病基因組病：①

胎兒發(fā)育異常或者胎兒有可疑畸形的；②

孕早期接觸過可能導(dǎo)致胎兒先天缺陷物質(zhì)的；③

夫婦曾生育過智力低下、發(fā)育遲緩或器官畸形的患兒，且經(jīng)過遺傳學(xué)檢測診斷為基因組病的；④

夫婦雙方之一為基因組病攜帶者；⑤

產(chǎn)前篩查提示胎兒基因組疾病高風(fēng)險(xiǎn)；⑥

其他1.2

評估胎兒患何種遺傳病單基因?。孩?夫婦為隱性致病基因攜帶者或夫婦一方是顯性遺傳病患者；② 曾生育過單基因病患兒；③ 胎兒發(fā)現(xiàn)明顯畸形，高度懷疑為某一遺傳病的（此種產(chǎn)前診斷較為困難）；④ 其他線粒體疾病、多基因遺傳病、體細(xì)胞突變遺傳病與單基因病類似，但其產(chǎn)前診斷目前較難進(jìn)行1.2

評估胎兒患何種遺傳病有創(chuàng)產(chǎn)前診斷禁忌癥下列情況慎重行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷：完全性前置胎盤；先兆流產(chǎn)未穩(wěn)定；孕婦體溫超過37.2℃孕婦為病毒攜帶者，如HBV、HIV孕婦血型為RH陰性邊緣性或部分性前置胎盤1.3

評估孕婦能否進(jìn)行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷2.1

檢測

選擇合適的取材方式和時(shí)間絨毛膜取樣羊水穿刺臍帶血穿刺手術(shù)示意圖手術(shù)時(shí)間孕10周~13+6周孕16周~22+6周孕18周之后可行檢測細(xì)胞遺傳學(xué)檢測、分子遺傳學(xué)檢測、生化檢測手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)胎兒丟失率0.3%~0.6%0.3%~0.6%<2%其他風(fēng)險(xiǎn)宮內(nèi)感染肢體短缺···宮內(nèi)感染羊水栓塞羊水泄露···宮內(nèi)感染羊水栓塞···禁忌癥1、完全性前置胎盤；2、先兆流產(chǎn)未穩(wěn)定；3、孕婦體溫超過37.2℃相對禁忌癥病毒（如HBV、HIV）攜帶者、孕婦RH血型陰性等遺傳病染色體病單基因病染色體核型分析、FISH···測序、MLPA、Southern

blot···測序、染色體微陣列分析、

FISH···

基因組病2.2

檢測

選擇合適的遺傳學(xué)方法3.1

分析檢測結(jié)果陽性結(jié)果（positive

res