微柱凝膠免疫檢測技術(shù)博迅產(chǎn)品操作03版課件

反響原理微柱凝膠免疫反響的本質(zhì)是紅細胞凝集試驗，也可稱之微柱凝膠血凝試驗〔MicrocolumnGelHeamagglutinationAssay，MGHA〕。在微柱凝膠管中，紅細胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細胞凝集團塊。在一定離心力下，該凝集團塊位于膠外表或膠中；而紅細胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的紅細胞，在同樣的離心力下，紅細胞沉降到微柱管尖底部。4+2+-特點和優(yōu)點簡單：不需洗滌，對陰性結(jié)果不需確證試驗，適用于大量標本檢測，解決了Coombs試驗因為程序復(fù)雜費時等原因未能在臨床常規(guī)應(yīng)用問題。使不完全抗體檢測理論“金標準〞成為臨床的“金標準〞。多份標本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標本檢測。另外還具備準確、敏感、標本用量少、結(jié)果保存時間長、易于標準化、操作更平安等優(yōu)點。產(chǎn)品操作一.準備工作檢測卡的準備1.在18-25℃條件下平衡30分鐘。2.離心2-3分鐘，均衡反響介質(zhì)。3.外觀檢查應(yīng)無氣泡、干膠和雜質(zhì)。4.要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結(jié)〔因冷熱交替產(chǎn)生的〕污染鄰孔。離心！檢測標本的準備1.標本要求用EDTA抗凝管采集的新鮮血〔如陳舊血需設(shè)陰性對照〕。2.抗凝血樣標本要上清澄清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、溶血、脂肪等狀，應(yīng)再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影響紅細胞沉降，建議使用紅細胞稀釋液。3.血辮血樣須放置試管中離心處理，確保血清澄清微黃。必要時需洗滌。4.在18-25℃條件下平衡30分鐘，防止冷凝集。紅細胞懸液的制備1.將紅細胞配制為0.8%的懸液，最高濃度不要超過1%。如:取8μl壓積紅細胞，參加到1ml的紅細胞稀釋液〔抗人球蛋白試驗要求用低離子液配置紅細胞懸液〕中，配制出的紅細胞懸液濃度大約為0.8%。2.外觀檢查呈均勻淡紅色，無血塊、無絮狀物〔如有纖維蛋白需去除〕。

二.結(jié)果判定陽性結(jié)果：紅細胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠外表或膠中，為陽性反響。陰性結(jié)果：紅細胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反響。反響強度：特異性紅細胞抗原抗體復(fù)合物位于膠外表，為強陽性反響；復(fù)合物在膠中，為弱陽性反響；愈靠近膠底部顆粒愈小，反響愈弱。

？4+紅細胞復(fù)合物〔凝集〕位于凝膠外表3+大局部紅細胞復(fù)合物位于凝膠外表，少局部位于凝膠中部2+大局部紅細胞復(fù)合物位于凝膠中部，少局部位于凝膠中上部1+紅細胞復(fù)合物位于凝膠中下部±與同一卡中陰性管結(jié)果對照，如與陰性結(jié)果有差異，即為±-紅細胞完全沉積在凝膠管尖底部完全溶血凝膠和液體無凝集或未凝集的紅細胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色不完全溶血殘留紅細胞在膠外表、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色混合凝集紅細胞復(fù)合物位于凝膠外表和凝膠底部４＋３＋２＋＋±－ＨＨＭ

完全不完全混合凝集現(xiàn)象及說明反響強度三、標準操作規(guī)程1、ABO、RhD血型定型檢測卡〔單克隆抗體〕操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將待檢者血漿分別參加5-6管中，各50μl；50μl50μl待檢者血漿3〕將待檢者0.8%紅細胞懸液分別參加1-4管中，各50μl；待檢者0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl4〕取0.8%的ABO血型反定型紅細胞試劑，分別參加5-6管中，各50μl；50μl50μlA細胞B細胞5〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；6〕結(jié)果判讀。結(jié)果：A型RhD陽性50μl50μl50μl2、ABO、RhD血型檢測卡〔微柱凝膠〕操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將待檢者0.8%紅細胞懸液分別參加第1—3或4—6管中，各50μl；待檢者的0.8%紅細胞懸液3〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；4〕結(jié)果判讀。結(jié)果：1.A型RhD陽性；2.B型RhD陽性

3、Rh血型抗原檢測卡〔單克隆抗體〕操作步驟:1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將待檢者0.8%紅細胞懸液分別參加1—6管中，各50μl；待檢者0.8%紅細胞懸液50μl50μl50μl50μl50μl50μl3〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；4〕結(jié)果判讀。結(jié)果：RhD、C、e陽性4、抗人球蛋白檢測卡—不規(guī)那么抗體篩檢操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞各50μl分別參加對應(yīng)的微管中;

50μl50μl50μlⅠⅡⅢ0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞3〕將待檢者血漿各50μl分別參加Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中；4〕37℃孵育15分鐘；待檢者血漿50μl50μl50μlll50μl50μl50μl5〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；6〕結(jié)果判讀。根據(jù)當前使用的篩檢紅細胞的反響格局來判定5、抗人球蛋白檢測卡—交叉配血試驗操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將供血者0.8%紅細胞懸液與受血者血漿各50μl先后參加主側(cè)管中；受血者血漿50μl供血者紅細胞懸液50μl3〕將受血者0.8%紅細胞懸液與供血者血漿各50μl先后參加次側(cè)管中；4〕37℃孵育15分鐘；供血者血漿50μl受血者紅細胞懸液50μl5〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；6〕結(jié)果判讀。例如上圖：1、3不配合；2配合操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將0.8%待檢者和陰性對照〔健康男性O(shè)型〕紅細胞懸液各50μl分別參加微管中；150μl50μl50μl50μl50μl50μl2345

0.8%待檢者紅細胞懸液陰性對照

6、抗人球蛋白檢測卡—抗人球蛋白試驗

3〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；4〕結(jié)果判讀。結(jié)果：1、2、3和5陽性4陰性7.抗人球蛋白檢測卡—母體IgG抗體效價檢測操作步驟1〕在試管中分別參加200μl母體血清和200μl2-ME應(yīng)用液，然后置于37℃水浴30-60分鐘。以充分破壞血清中IgM類抗體；200μl母體血清200μl2-Me37℃水浴30-60分鐘2〕取6只干凈試管，分別做好標記。將處理后的血清做倍比稀釋；326412825651216350μl

200μl

200μl

200μl

200μl

200μl

標記并參加稀釋液326412825616滅活后的血清50μl

200μl

200μl

200μl

200μl

200μl

5123〕將準備好的HDN母體IgG抗體效價檢測卡做好標記，在所有孔中分別參加50μl父親〔或父親同型〕的0.8%紅細胞懸液〔ABO血型系統(tǒng)IgG血型抗體〕或在所有孔中分別參加50μl標準O型0.8%紅細胞懸液〔測定孕婦ABO血型系統(tǒng)以外IgG血型抗體〕；50μl50μl50μl50μl50μl50μl0.8%紅細胞懸液4〕依次將50μl倍比稀釋血清分別參加對應(yīng)孔中；163250μl

50μl

50μl

50μl

50μl

50μl

645122561285〕37℃孵育15分鐘；6〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；7〕結(jié)果判讀。結(jié)果：效價為1：128提示：將每次采集的血清標本分裝凍存，每次檢測要以同樣的方法、同樣的表型抗原紅細胞，當次檢測的血清要和以前凍存的血清同時對照試驗。

HDN母體IgG抗體效價檢測實驗本卷須知1.血清標本：血清標本必須充分去除纖維蛋白，否那么標本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，阻礙紅細胞沉淀，呈假陽性反響。2.父親紅細胞標本也可用與其同型的A型或B型紅細胞代替。3.每日試驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。4.紅細胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%，最高不超過1%。5.檢測卡應(yīng)放在18-25℃儲存，如假設(shè)長期放在4℃冰箱，建議每1-2個月取出，用專用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。6.倍比稀釋時要注意正確更換槍頭。7.滅活時要注意用封口膜密封試管口。50μl50μl50μl50μl50μl50μl操作步驟：1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將0.8％待檢者紅細胞懸液分別參加1-6管中,各50μl；待檢者0.8%紅細胞懸液8、新生兒ABO、RhD血型檢測卡〔微柱凝膠〕—新生兒溶血病檢測卡Ⅰ3〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；4〕結(jié)果判讀。結(jié)果：AB型RhD陽性，

直抗試驗陽性。

9、抗人球蛋白檢測卡-新生兒溶血病胎〔嬰〕兒不完全抗體檢測卡準備工作熱放散：取同體積的壓積血〔至少洗滌三次〕和６％牛血清白蛋白混勻，置于56℃水浴10分鐘，期間不斷搖動，然后離心２－３分鐘〔2000rpm〕，取上清。即放散液。酸放散：a.用生理鹽水洗滌待檢紅細胞4次。b.配制放散液(取4體積的放散液A與1體積的放散液B混合均勻)。c.將待檢壓積紅細胞與酸放散液等體積混合均勻，室溫孵育1-2分鐘。d.以3000rpm離心1-2分鐘。e.立即將酸放散液移到另一只干凈試管中，并參加紫紅色中和液調(diào)至肉色或水粉色〔500ul放散液參加中和液80-85ul〕，此時PH值近中性。f.將中和后的酸放散液再次進行離心〔3000rpm離心1-2分鐘〕取上清即放散夜。操作步驟1〕將準備好的檢測卡做好標記；2〕將0.8％A型紅細胞懸液各50μl分別參加1號、4號管中；將0.8％B型紅細胞懸液各50μl分別參加2號、5號；將0.8％的O型紅細胞懸液各50μl分別參加3號、6號孔中；3〕將1~3管分別參加50μl新生兒血漿，4~6管分別參加50μl新生兒紅細胞放散液；50μl50μl50μl50μl50μl50μlABO0.8%紅細胞懸液新生兒血漿50μl50μl50μl50μl50μl50μl新生兒紅細胞放散液4〕37℃孵育15分鐘；5〕離心5分鐘〔900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘〕；6〕結(jié)果判讀。結(jié)果：游離抗體陽性、放散試驗陽性

臨床遇到的一些問題及原因的分析

問題1：正反定型卡反定型側(cè)出現(xiàn)弱陽性結(jié)果原因及分析可能是一些特殊標本〔如血液病、腫瘤病人和老年人等〕抗體比較弱，有些大醫(yī)院做過統(tǒng)計〔當?shù)?0%左右的人群存在此情況〕，不同地區(qū)比例可能不同。處理方法加樣后2-8℃孵育10—15分鐘，可增加弱抗體檢出率。

問題2.正反定型卡正定型結(jié)果陽性弱原因及分析可能是一些特殊疾病引起抗原減弱。處理方法加樣后室溫孵育10—15分鐘，可增加弱抗原檢出率。問題3.交叉配血陰性結(jié)果不好〔假陽性，有1+或2+結(jié)果〕原因及分析a.標本本身的問題〔放置時間長、標本本身存在致敏現(xiàn)象、標本被污染〕。b.低于實驗要求溫度或沒有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問題。問題4.正反定型不符原因及分析a.一些特殊疾病引起。b.新生兒抗體弱或無抗體。c.抗原弱或亞型引起。問題5.血型卡或抗人球卡出現(xiàn)混合凝集及疑似現(xiàn)象原因及分析a.不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。b.標本存放時間過長，存在一些細胞碎片、細胞團塊或纖維蛋白〔在膠上部形成紅線或紅色圓環(huán)〕。c.亞型問題6.母體效價卡結(jié)果各稀釋度都為陽性原因及分析滅活不完全或者稀釋度不夠。處理方法重新滅活或先將血清標本稀釋，取4+最高稀釋倍數(shù)的血清用等量2-me滅活。問題7.卡式法檢測HDN母體IgG抗體效價的臨界值

卡式法靈敏度較高，比試管法高1-2個滴度。