兔單B細胞單抗制備服務技術問答-20240109

兔單抗制備過程中的常見問題及解決措施在制備兔單抗的過程中，可能會遇到一些常見問題，以下是一些可能的問題和相應的解決方法：兔單抗的特異性不足是什么導致的？抗體如果發(fā)生了與非目標蛋白的結合，那么可能導致抗體的特異性不足。發(fā)生這種情況可以重新評估抗原選擇，優(yōu)化抗原的純度和質量，調整免疫方案以提高特異性[1]。用流式可以一次分選多少個抗原特異性的單個B細胞？目前，F(xiàn)ACS法的通量是一天可以分選10板抗原特異性的單B細胞。抗體的產量低該怎么辦？如出現(xiàn)抗體產量低的情況，可以調整免疫方案，適當增加免疫次數(shù)，也可以使用強化的免疫佐劑?？贵w親和力低怎么辦？如出現(xiàn)抗體親和力低的情況，可以調整免疫方案，重新評估抗原選擇，也可以通過親和純化步驟來提高親和力FACS分選單B細胞，除特異性抗原標記外，還需要其他什么surfacemarker染色？小鼠B細胞可以用CD19作為表面marker，然后通過IgG陽性，IgM陰性來分選單細胞。兔子B細胞的表面marker目前信息比較少，分選的時候可以先根據(jù)物理參數(shù)，比如大小、顆粒度進行分選，然后再根據(jù)IgG陽性IgM陰性以及抗原特異性上進行分選[2]。培養(yǎng)的記憶B細胞可以分泌抗體嗎？需要先增殖后分化成漿細胞嗎？是的，記憶B細胞需要分化成終端的漿細胞，才能分泌抗體[3]。用單個B細胞技術制備抗體，記憶B細胞和漿細胞哪種細胞更有優(yōu)勢？兩種細胞各有優(yōu)勢，記憶B細胞抗體基因拷貝數(shù)較低但在B細胞中的比例比漿細胞高。漿細胞在B細胞中的比例很低，但每個細胞含有抗體基因的拷貝數(shù)相對較高?？返律飺碛胸S富的經驗積累、嚴格的質控體系，提供的兔單B細胞單抗制備服務的周期短、不限種屬、可獲得抗體序列，得到的抗體具有更高的特異性和親和力。為了滿足客戶的不同需求，卡梅德生物能夠提供從抗原設計，合成與修飾，到動物免疫，噬菌體文庫構建與篩選，下游抗體修飾與應用鑒定等一站式技術服務。參考文獻GrossA,SchoendubeJ,ZimmermannS,etal.TechnologiesforSingle-CellIsolation.IntJMolSci.2015;16(8):16897-16919.[2]WallaceJL,ArforsKE,McknightGW.AmonoclonalantibodyagainsttheCD18leukocyteadhesionmoleculepreventsindomethacin-inducedgastricdamageintherabbit[J].Gastroenterology,1991,100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.[3]Powell,WilliamC,Hicks,etal.Anewrabbitmonoclonalantibody(4B5)fortheimmunohistochemical(IHC)determinationoftheHER2statusinbreastcancer:comparisonwithCB11,fluorescenceinsituhybridization(FISH),andinterlaboratoryreproducibility.[J].ApplImmu