二甲雙胍對高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞影響的機制研究的中期報告

二甲雙胍對高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞影響的機制研究的中期報告本研究旨在探究二甲雙胍（Metformin）對高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞（Osteoblast）的影響機制。本中期報告主要介紹研究的實驗設(shè)計、方法、結(jié)果和討論。一、實驗設(shè)計1.建立高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞模型取新干線小鼠頜骨組織進行初代細胞培養(yǎng)，接種到含10%熱滅的胎牛血清的Dulbecco修正的Eagle培養(yǎng)基（DMEM）中，孵育至細胞密度達到80%左右，再分別將細胞接種到含25mM葡萄糖和含5mM葡萄糖的培養(yǎng)基中，建立高糖和正常糖環(huán)境下頜骨成骨細胞模型。2.細胞處理實驗組：-對照組：在含5mM葡萄糖的DMEM中處理細胞-實驗組：在含25mM葡萄糖的DMEM中處理細胞，同時添加不同濃度的二甲雙胍（0,0.5,1,2,4mM）。3.細胞處理時間：高糖和不同濃度二甲雙胍處理細胞24小時。4.細胞相關(guān)實驗：-細胞增殖實驗-堿性磷酸酶（ALP）活性實驗-成骨基因表達實驗：mRNA表達水平的測定（RT-qPCR）二、方法1.細胞增殖實驗采用CCK8法及流式細胞術(shù)法測定高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的增殖情況。2.ALP活性實驗采用ALP顯色法測定細胞ALP活性。3.成骨基因表達實驗采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測成骨基因ALP、OCN、COL-I、BMP-2mRNA表達水平。三、結(jié)果1.細胞增殖實驗結(jié)果顯示，高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞增殖明顯高于對照組，二甲雙胍可抑制高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的增殖。當二甲雙胍濃度達到4mM時，抑制作用最為明顯。2.ALP活性實驗結(jié)果顯示，高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞ALP活性顯著高于對照組。而二甲雙胍處理可顯著降低高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞ALP活性。此外，二甲雙胍對于正常糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的ALP活性沒有明顯的影響。3.成骨基因表達實驗結(jié)果顯示，高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的ALP、OCN、COL-I和BMP-2mRNA表達水平明顯高于對照組，而二甲雙胍可降低這些成骨基因的表達水平。此外，二甲雙胍對于正常糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的成骨基因表達水平?jīng)]有明顯的影響。四、討論研究結(jié)果表明，高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞增殖、ALP活性和成骨基因ALP、OCN、COL-I和BMP-2mRNA表達水平都明顯高于正常糖環(huán)境。而二甲雙胍處理可降低高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的增殖、ALP活性和成骨基因表達水平。這表明二甲雙胍可能通過調(diào)節(jié)細胞增殖、ALP活性和成骨基因表達等方面影響高糖環(huán)境下頜骨成骨細胞的生物學特性。本研究