食品微生物檢驗(yàn)

?食品微生物學(xué)檢驗(yàn)?主要內(nèi)容食品微生物檢測(cè)根底食品微生物檢測(cè)指標(biāo)食品微生物檢測(cè)程序第一局部食品微生物檢測(cè)根底1微生物〔microorganism,microbe〕非分類學(xué)上名詞，來自法語“Microbe〞一詞。

是形體微小、單細(xì)胞或個(gè)體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的多細(xì)胞、甚或無細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物的通稱。通常人肉眼看不見，必須借助于光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能看到的生物。一、什么是微生物E.coli體積小、

大小以u(píng)m計(jì)，但比外表積〔外表積/體積〕大，必然有一個(gè)巨大的營養(yǎng)吸收，代謝廢物排泄和環(huán)境信息接受面。

這一特點(diǎn)也是微生物與一切大型生物相區(qū)別的關(guān)鍵所在。

小微小生物包括：有細(xì)胞結(jié)構(gòu)：原核結(jié)構(gòu)的細(xì)菌〔Bacteria〕、古生菌〔Archeae〕真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)的真菌〔酵母、霉菌、蕈菌〕、單細(xì)胞藻類、原生動(dòng)物。無細(xì)胞結(jié)構(gòu)：不能獨(dú)立生存的病毒、亞病毒〔類病毒、擬病毒、朊病毒〕2微生物的生境

生境：生物生命的環(huán)境區(qū)間；依據(jù)生境的理化指標(biāo)分為溫和環(huán)境和極端環(huán)境。

紅色代表古細(xì)菌；藍(lán)色代表細(xì)菌；淺綠色代表藻類；棕色代表真菌；黃色代表原生動(dòng)物；綠色代表植物；紫色代表動(dòng)物

紅色代表古細(xì)菌；藍(lán)色代表細(xì)菌；淺綠色代表藻類；棕色代表真菌；黃色代表原生動(dòng)物；綠色代表植物；紫色代表動(dòng)物溫和的環(huán)境無處不存在微生物的生存環(huán)境。意味著微生物無處不在，我們無時(shí)不生活在“微生物的海洋〞中。

細(xì)菌數(shù)億/g土壤，土壤中的細(xì)菌總重量估計(jì)為：10034×1012

噸；每張紙幣帶細(xì)菌：900萬個(gè)；人體體表及體內(nèi)存在大量的微生物：皮膚外表：平均10萬個(gè)細(xì)菌/平方厘米；腸道：微生物總量達(dá)100萬億，糞便干重的1/3是細(xì)菌，每克糞便的細(xì)菌總數(shù)為：1000億個(gè)；口腔：細(xì)菌種類超過500種；每個(gè)噴嚏的飛沫含4500-150000個(gè)細(xì)菌，重感冒患者為8500萬；常見的極端環(huán)境ABCDE極端環(huán)境：普通生物無法生存的環(huán)境。大公古鹽井〔自貢，鑿于北周時(shí)期〕二、微生物與食品工業(yè)

一般來說，微生物既可以在食品制造中起有益作用，又可以通過食品給人類帶來危害。

遠(yuǎn)古人類發(fā)現(xiàn)，吃剩的米粥數(shù)日后變成了醇香可口的飲料—酒微生物引起的食物中毒霍亂病人微生物在食品中的應(yīng)用有三種方式微生物菌體的應(yīng)用：食用菌就是受人們歡送的食品，乳酸菌可引起蔬菜和乳類及其它多種食品的發(fā)酵，所以，人們?cè)谑秤盟崤Ｄ毯退崤莶藭r(shí)也食用了大量的乳酸菌；單細(xì)胞蛋白就是微生物體中獲得的蛋白質(zhì)，也是人們對(duì)微生物菌體的利用。微生物代謝產(chǎn)物的應(yīng)用：如酒類、食醋、氨基酸、有機(jī)酸、維生素等。微生物酶的應(yīng)用：總之，食品微生物學(xué)的任務(wù)在于研究有益微生物在食品中的應(yīng)用，為人類提供有益與健康、營養(yǎng)豐富的食品，并防止在食品制造、流通和保藏中有害微生物的污染，防止食品腐敗和產(chǎn)毒，保證食品的平安性。三、食品微生物學(xué)檢測(cè)的意義背景國內(nèi)外食品平安形勢(shì)嚴(yán)峻，惡性事件不斷發(fā)生。歐洲“二噁英〞、“瘋牛病〞〔20世紀(jì)90年代〕日本大腸桿菌O157:H7中毒〔1996〕中國SARS〔2003〕、東南亞國家禽流感〔2004〕美國菠菜大腸桿菌O157:H7污染事件〔2006〕準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是正確評(píng)價(jià)和保證食品平安性的先決條件，也是國際貿(mào)易上公平交易的有力科學(xué)依據(jù)。食品微生物檢驗(yàn)方法：為食品監(jiān)測(cè)必不可少的重要組成局部。它是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,也是判定被檢食品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一?？梢耘袛嗍称芳庸きh(huán)境及食品衛(wèi)生環(huán)境,能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評(píng)價(jià),為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù),提供傳染病和人類,動(dòng)物和食物中毒的防治措施?？梢詾橹贫ㄕ_、平安的加工、貯存、銷售等提供科學(xué)依據(jù)四、食品檢測(cè)所涉及的類群微生物非細(xì)胞生物細(xì)胞生物病毒原核生物真核生物細(xì)菌酵母菌、霉菌中國微生物物種數(shù)與世界物種數(shù)的比較類群中國的物種數(shù)世界的物種數(shù)中國/世界（％）病毒40050008.0細(xì)菌500476010.5真菌80007200011.6生物的種數(shù)和估計(jì)總種數(shù)類群已知種數(shù)估計(jì)總種數(shù)已知種百分?jǐn)?shù)（％）病毒50001300004細(xì)菌47604000012真菌7200015000005好氧菌總數(shù)腸桿菌科大腸菌群糞大腸菌群大腸桿菌沙門氏菌致瀉性大腸桿菌金黃色葡萄球菌糞鏈球菌弧菌科單增李斯特氏菌志賀氏菌芽孢桿菌O157厭氧梭菌彎曲菌

食品中常規(guī)指示菌和致病菌的關(guān)系常規(guī)指示菌和致病菌的“危害分類〞VeryfewmicrobesarealwayspathogenicManymicrobesarepotentiallypathogenicMostmicrobesareneverpathogenic如霍亂弧菌、O157、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等如腸球菌、蠟樣芽孢桿菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌等如乳酸桿菌、雙歧桿菌等食品微生物檢驗(yàn)的任務(wù)和內(nèi)容食品微生物檢驗(yàn)的指標(biāo)就是根據(jù)食品衛(wèi)生的要求，從微生物學(xué)的角度，對(duì)不同食品所提出的與食品有關(guān)的具體指標(biāo)要求。我國衛(wèi)生部公布的食品微生物指標(biāo)有菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌三項(xiàng)。菌落總數(shù)〔個(gè)/1g、1cm、1cm2)：清潔狀態(tài)的標(biāo)志；預(yù)測(cè)食品可能存放的期限.大腸菌群(MPN/100ml):較為理想的糞便污染的指標(biāo)菌群；作為腸道致病菌污染食品的指示菌.致病菌(不得檢出〕：沙門氏菌、肉毒梭菌、志賀氏菌、變形桿菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌、霉菌第二局部食品微生物檢驗(yàn)的范圍及檢測(cè)指標(biāo)一、食品的特點(diǎn)：

1、有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)微生物進(jìn)行正常的生理活動(dòng)和生長繁殖,首先要有適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)條件,如碳源氮源無機(jī)鹽類和生長素,碳源是構(gòu)成菌體成分重要元素…2、含有一定量的水分菌體所需的營養(yǎng)物質(zhì)要成為水溶液狀態(tài)才能被吸收……3、常具有天然防御結(jié)構(gòu)和抑菌物質(zhì)二、微生物危害:美國，每年約有7200萬人發(fā)生食源性疾病，造成3500億美元的損失2001年，江蘇、安徽等地，腸出血性大腸桿菌O157:H7，造成177人死亡，中毒人數(shù)超過2萬人1999年，寧夏，沙門氏菌污染肉品，食物中毒爆發(fā)，發(fā)病人數(shù)上千人80年代，上海，毛蚶，甲型肝炎爆發(fā)，累及30萬人三、食品微生物來源及污染途徑

食品微生物來源：土壤、空氣、水、人和動(dòng)物污染的途徑是多方面的：土壤：糧食蔬菜和水果等植物性食品是經(jīng)土壤培育出來的，與土壤接觸密切，最易受到土壤中微生物的污染。以細(xì)菌最多，其次是放線菌、霉菌與酵母菌。

空氣：在空氣中，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)一些病源微生物，如結(jié)核桿菌和金黃色葡萄球菌等病原菌，可通過污染的食品而引起感染?？諝鈳в形⑸锏耐寥?、塵埃、痰沫與唾液播散到食品上，可造成食品的嚴(yán)重污染。

水：水是一種污染源，淡水中常見的微生物類群有：假單胞菌屬、無色桿菌屬、黃桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等菌種。海水中主要是副溶血弧菌，是人類吃海產(chǎn)品而引起食物中毒的病原菌……水不僅是重要的污染源，而且還是食品被微生物污染的重要途徑。

人與動(dòng)植物：人與動(dòng)植物體表、人與動(dòng)物的消化道和上呼吸道均有一定種類的微生物叢存在，該微生物如果污染了食品，常引起腐敗變質(zhì)。當(dāng)人與動(dòng)物有致病微生物侵入機(jī)體而致病時(shí)，體內(nèi)的病原菌就會(huì)隨糞便和分泌物排出體外，如處理不當(dāng)，直接或間接污染食品，造成對(duì)人的危害……

工具與容器

…四、食品微生物檢驗(yàn)的范圍(1)生產(chǎn)環(huán)境的檢驗(yàn)：車間用水、空氣、地面、墻壁等。(2)原輔料檢驗(yàn)：包括食用動(dòng)物、谷物、添加劑等一切原輔材料。(3)食品加工、儲(chǔ)藏、銷售諸環(huán)節(jié)的檢驗(yàn)：包括食品從業(yè)人員的衛(wèi)生狀況檢驗(yàn)、加工工具、運(yùn)輸車輛、包裝材料的檢驗(yàn)等。(4)食品的檢驗(yàn)：重要的是對(duì)出廠食品、可疑食品及食物中毒食品的檢驗(yàn)。

食品微生物檢驗(yàn)的指標(biāo)就是根據(jù)食品衛(wèi)生的要求，從微生物學(xué)的角度，對(duì)不同食品所提出的與食品有關(guān)的具體指標(biāo)要求。我國衛(wèi)生部公布的食品微生物指標(biāo)有菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌三項(xiàng)。五、食品微生物檢驗(yàn)的指標(biāo)1.菌落總數(shù)菌落(colony)：生長在固體培養(yǎng)基上，來源于一個(gè)細(xì)胞，肉眼可見的細(xì)胞群體。菌落總數(shù)

定義：菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。衛(wèi)生學(xué)意義：判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量。及時(shí)反映食品加工過程是否符合衛(wèi)生要求，為被檢食品衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。通常認(rèn)為，食品中細(xì)菌數(shù)量越多，那么可考慮致病菌污染的可能性越大，菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。2、大腸菌群定義：大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群不是細(xì)菌學(xué)上的分類命名，而是根據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。根據(jù)進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，可將這群細(xì)菌再分為大腸艾希氏菌〔俗稱大腸桿菌〕、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。衛(wèi)生學(xué)意義大腸菌群和大腸桿菌是評(píng)價(jià)衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，作為食品中的糞便污染指標(biāo)。食品中檢出大腸菌群，說明該食品有糞便污染，既可能有腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的上下，說明了糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。大腸桿菌在外界存活時(shí)間與一些主要腸道致病菌接近，它的出現(xiàn)預(yù)示著某些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行HACCP管理中，將大腸桿菌檢測(cè)作為微生物污染狀況的監(jiān)測(cè)指標(biāo)和HACCP實(shí)施效果的評(píng)估指標(biāo)。3、致病菌4、霉菌及其毒素5、其它指標(biāo)微生物指標(biāo)還應(yīng)包括病毒，肝炎病毒、豬瘟病毒、雞新城疫病毒、馬立克氏病毒、口蹄疫病毒，狂犬病病毒，豬水泡病毒等；另外，從食品檢驗(yàn)的角度考慮，寄生蟲也被很多學(xué)者列為微生物檢驗(yàn)的指標(biāo)：如旋毛蟲，囊尾蚴，住肉孢子蟲、蛔蟲，肺吸蟲，弓形體，螨，姜片吸蟲，中華分枝睪吸蟲等等。第三局部食品微生物學(xué)檢測(cè)方法及程序可替代方法：指用來檢驗(yàn)?zāi)骋惶囟óa(chǎn)品中某種目標(biāo)微生物的與相應(yīng)參考方法等效的方法〔ISO16140:2003〕，如快速檢測(cè)試劑盒和自動(dòng)化系統(tǒng)。值得說明的是，并非所有的可替代方法都是標(biāo)準(zhǔn)方法。

國內(nèi)主要食品微生物檢測(cè)體系

國家標(biāo)準(zhǔn)(GB)

檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN)

衛(wèi)生行標(biāo)(WS)

農(nóng)業(yè)行標(biāo)(NY)

國外主要食品微生物檢測(cè)體系

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)

美國食品藥品監(jiān)督局（FDA）(online)

美國官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(AOAC)

美國農(nóng)業(yè)部（USDA）(online)

加拿大健康署(HPB)(online)

美國公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)(APHA)

北歐食品分析委員會(huì)（NMKL）

法國標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(AFNOR)標(biāo)準(zhǔn)、英國國家標(biāo)準(zhǔn)(BS)、日本國家標(biāo)準(zhǔn)(JIS)、韓國國家標(biāo)準(zhǔn)（KS）等

標(biāo)準(zhǔn)方法非標(biāo)準(zhǔn)方法

科學(xué)書籍和期刊公布的方法；

實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的未出版的方法；

部分由設(shè)備制造商指定的方法；

擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法；

企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；

部分協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)；

部分地方標(biāo)準(zhǔn)等。食品微生物檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)方法未包含的方法http://www.foodmate.net

食品微生物檢測(cè)方法方法定量方法定性方法直接計(jì)數(shù)方法細(xì)菌總數(shù)*、大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、單核增生李斯特氏菌、沙門氏菌、彎曲菌屬、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌、李斯特氏菌屬、霉菌和酵母菌數(shù)*、嗜冷菌*、乳酸菌、雙歧桿菌等間接計(jì)數(shù)法(MPN法)大腸菌群*、糞大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、單核增生李斯特氏菌、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌等致病菌：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌、沙門氏菌、空腸彎曲菌、O157、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、肉毒梭菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、產(chǎn)毒霉菌等

帶*者通常被列為食品衛(wèi)生指示菌從待檢食品中別離微生物，是食品微生物學(xué)檢驗(yàn)的第一步。要求：每一部操作過程中不再發(fā)生微生物的次生污染。用于別離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物；在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時(shí)防止其它微生物的污染；無菌操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬敞、定期消毒；物品布局合理；無菌操作前半小時(shí)應(yīng)停止清掃工作、減少走動(dòng)、避免塵埃飛揚(yáng)操作前準(zhǔn)備無菌操作前，工作人員要做好個(gè)人準(zhǔn)備，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要時(shí)穿無菌衣、戴無菌手套。六步洗手法掌心對(duì)掌心搓擦掌手心指對(duì)交手錯(cuò)背搓擦手指交錯(cuò)掌心對(duì)掌心搓擦兩手互握互搓指背拇指在掌中轉(zhuǎn)動(dòng)搓擦指心在掌心中摩擦123456操作中保持無菌進(jìn)行無菌操作時(shí)，應(yīng)面向無菌區(qū)、手臂活動(dòng)范圍不跨越無菌區(qū)、避免….用無菌持物鉗取用無菌物品無菌物品一經(jīng)取出，即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)無菌物品懷疑污染或已經(jīng)污染，應(yīng)更換并重新滅菌無菌物品保管無菌物品必須與非無菌物品分開放置無菌物品不可暴露于空氣中應(yīng)存放于無菌包或無菌容器內(nèi)無菌包外應(yīng)注明物品名稱滅菌日期按先后順序擺放定期檢查滅菌日期及保存情況無菌包未污染保存期7天，過期或受潮應(yīng)重新滅菌2微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌常用的器具：試管、瓶子、培養(yǎng)皿等(culturedish)Petridish常用的滅菌方法：高壓蒸汽滅菌高溫干熱滅菌高壓滅菌鍋烘箱3培養(yǎng)基的除菌根據(jù)培養(yǎng)基的特點(diǎn)采用不同的除菌方式，包括物理、化學(xué)以及生物除菌的方法。4接種在無菌箱〔超凈工作臺(tái)〕或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行。超作時(shí)注意的問題工作區(qū)域？示意圖：二、檢測(cè)根本程序采樣方式：送檢樣品送到食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)室應(yīng)越快越好，一般應(yīng)不超過3h。如果路途遙遠(yuǎn)，可將不需冷凍樣品保持在1～5℃環(huán)境中(如冰壺)。如需保持冷凍狀態(tài)，那么需保存在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)(箱內(nèi)有干冰可維持在0℃以下)。送檢時(shí)，必須認(rèn)真填寫申請(qǐng)單，以供檢驗(yàn)人員參考。檢驗(yàn)食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)室接到送檢申請(qǐng)單，應(yīng)立即登記，填寫實(shí)驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求，立即將樣品放在冰箱或冰盒中，積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。各食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)室必須備有專用冰箱存放樣品。一般陽性樣品，發(fā)出報(bào)告后3d(特殊情況可適當(dāng)延長)始能處理樣品。進(jìn)口食品的陽性樣品，需保存6個(gè)月，方能處理。陰性樣品可及時(shí)處理。報(bào)告

檢驗(yàn)完后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫報(bào)告單，簽名后，送主管人員核實(shí)簽字，加蓋單位印章，以示生效，立即交食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。別離前的準(zhǔn)備A：培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基〔形態(tài)分〕：液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基；B：無菌取樣樣品預(yù)處理〔如均質(zhì))C樣品的稀釋:使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個(gè)菌落的根本方法.2別離方法2.1用固體培養(yǎng)基別離純培養(yǎng)方法：稀釋倒平板法涂布平板法平板劃線別離法稀釋搖管法〔用于厭氧菌的培養(yǎng)稀釋倒平板法:操作較麻煩，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好！涂布平板法:使用較多的常規(guī)方法，但有時(shí)涂布不均勻！使用移液管時(shí)注意問題？

涂布示意圖：稀釋倒平板法:操作較麻煩，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好！Stepsinloopdilution平板劃線法：原理示意圖劃線操作：圖Ⅴ-4，A：用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3-4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線局部作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線局部作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線局部作第四次平行劃線。

劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。

圖Ⅴ-4，B

將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置溫室培養(yǎng)。

恒溫培養(yǎng)結(jié)果觀察

菌落總數(shù)的測(cè)定－－平板菌落計(jì)數(shù)法程序菌落計(jì)數(shù)選擇2～3個(gè)適當(dāng)稀釋度懸液各1ml，加入無菌空培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做2～3個(gè)培養(yǎng)皿用生理鹽水進(jìn)行無菌稀釋，做成幾個(gè)適當(dāng)稀釋倍數(shù)的懸液每個(gè)培養(yǎng)皿中傾注約1.5ml熔化并冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂或肉湯瓊脂培養(yǎng)基，冷卻后，于37℃培養(yǎng)24h被檢樣品報(bào)告結(jié)果↓

↓

操作要點(diǎn)將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基置于45℃恒溫水浴鍋中保溫備用。編號(hào):無菌試管〔10-1、10-2、10-3、10-4。。。。?！?、無菌培養(yǎng)皿、空白對(duì)照平板稀釋菌液：搖勻平板：平板前后