2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

專(zhuān)題2細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程課題2精選ppt單克隆抗體等

動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的根底。植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交回憶：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？精選ppt動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)局部細(xì)胞“癌變〞，無(wú)限傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白精選ppt動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)?培養(yǎng)時(shí)又需要提供哪些必要條件呢？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（一）精選ppt3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中幾個(gè)重要的概念〔1〕細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上〔單層〕。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)外表光滑、無(wú)毒、易于貼附。精選ppt〔2〕接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到外表相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制：精選ppt(3)原代培養(yǎng)(primaryculture)定義：指將要培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞取出后，先用胰蛋白酶等使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，然后配制成一定濃度的細(xì)胞懸液，再將該懸液放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。過(guò)程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離制成細(xì)胞懸液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)〔1--2天換一次培養(yǎng)液〕細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞精選ppt定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)停止，這時(shí)如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，就要及時(shí)用胰蛋白酶等，使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來(lái)，然后參加新的培養(yǎng)液，將細(xì)胞別離稀釋?zhuān)脑囵B(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)傳代培養(yǎng)(4)傳代培養(yǎng)(subculture)精選ppt

細(xì)胞株：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生變化。細(xì)胞系：傳到40-50代后有局部細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。精選ppt細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)50代細(xì)胞無(wú)限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系知識(shí)點(diǎn)小結(jié)：各個(gè)新名詞之間的聯(lián)系多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長(zhǎng)和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變精選ppt1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境〔添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液〕2、營(yíng)養(yǎng)〔葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等〕3、溫度和PH溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境O2和CO2〔95%空氣和5%CO2〕4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒(méi)有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？精選ppt5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用〔1〕生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等?！?〕用于檢測(cè)有毒物質(zhì)〔3〕獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮?！?〕用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)〔2〕作為基因工程的受體細(xì)胞精選ppt獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清促生長(zhǎng)因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較工程6、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較精選ppt本節(jié)內(nèi)容小結(jié)1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程涉及的概念

細(xì)胞貼壁、細(xì)胞的接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株、細(xì)胞系3、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件精選ppt2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體練一練精選ppt1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------〔〕

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的根底是------〔〕

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

AD精選ppt3、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞〔〕

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強(qiáng)D精選ppt4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------〔〕A.培養(yǎng)基不同；B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行；C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。D精選ppt二、克隆技術(shù)1、概念：克隆就是無(wú)性繁殖，具體地說(shuō)，是指一個(gè)共同的祖先，通過(guò)無(wú)性繁殖的方法產(chǎn)生出來(lái)的一群遺傳特性相同的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體。a.分子水平上：一般指DNA克隆。b.細(xì)胞水平上：指一個(gè)單一的細(xì)胞分裂所形成的細(xì)胞群體。c.個(gè)體水平上：指基因型完全相同的兩個(gè)或一個(gè)群體。精選ppt2、克隆的條件：a.具有包含五種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞〔乳腺上壁細(xì)胞〕b.能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)〔去核的卵細(xì)胞質(zhì)〕。c.完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件〔誘導(dǎo)核-質(zhì)重組細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的實(shí)驗(yàn)條件和懷胎母體的子宮環(huán)境〕。3、技術(shù)根底：1.植物克隆的技術(shù)根底是組織培養(yǎng)2.動(dòng)物克隆的技術(shù)根底是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)精選ppt

動(dòng)物細(xì)胞特點(diǎn)？分化潛能變窄：隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性：細(xì)胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒(méi)有因細(xì)胞分化而喪失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性想一想精選ppt

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

再想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)精選ppt

1.概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。核移植〔難度高〕受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞三、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為克隆動(dòng)物精選ppt體細(xì)胞核移植的過(guò)程：思考：1.核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時(shí)期？2.通過(guò)什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？MⅡ中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母細(xì)胞電脈沖刺激卵母細(xì)胞黑面母綿羊白面母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核精選ppt供體細(xì)胞〔供核〕細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞〔MⅡ中期：供質(zhì)〕去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)根本相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵母細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作；含有激發(fā)細(xì)胞核全能性的物質(zhì)3.嚴(yán)格來(lái)說(shuō)新個(gè)體有卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀2.體細(xì)胞核移植過(guò)程精選ppt供體細(xì)胞培養(yǎng)〔MⅡ卵母細(xì)胞〕減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞受體細(xì)胞激活，完成減數(shù)分裂、發(fā)育胚胎移植精選ppt核移植圖片精選ppt多莉與“母親〞精選ppt

(1)遺傳素質(zhì)完全一致的克隆動(dòng)物將更有利于開(kāi)展對(duì)動(dòng)物(人)生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老和健康等機(jī)理的研究；

(2)有利于大量培養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良的家畜;

(3)經(jīng)轉(zhuǎn)基因的克隆哺乳動(dòng)物，將能為人類(lèi)提供源源不斷的廉價(jià)的藥品、保健品以及較易被人體接受的移植器官；

(4)科學(xué)家將很快地從目前的同種克隆技術(shù)推進(jìn)到異種克隆,即借腹懷胎的新領(lǐng)域,這無(wú)疑將大大促進(jìn)對(duì)瀕臨滅種的哺乳動(dòng)物的保護(hù)工作。克隆技術(shù)將對(duì)21世紀(jì)產(chǎn)生的重大影響精選ppt四、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改進(jìn)進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量3、克隆動(dòng)物作為生物反響器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植精選ppt五、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題胚胎移植－動(dòng)物幼體產(chǎn)出概率＜10％克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題克隆動(dòng)物的食品平安性問(wèn)題存在爭(zhēng)議精選ppt知識(shí)點(diǎn)小結(jié)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1.克隆動(dòng)物的概念2.體細(xì)胞核移植技術(shù)的過(guò)程3.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景4.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題精選ppt1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)脫分化嗎？為什么？2.體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？課后習(xí)題3.胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白質(zhì)外，長(zhǎng)時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。精選ppt5.什么叫單層細(xì)胞培養(yǎng)1957年，科學(xué)家采用胰蛋白酶消化處理和應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，獲得了單層細(xì)胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的開(kāi)展起了很大的推動(dòng)作用。4.為什么對(duì)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)通常要添加血清？血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)為白蛋白和球蛋白；氨基酸有多種，