肌鈣蛋白(TPI)檢測作業(yè)指導書-醫(yī)學檢驗

K廣州金域醫(yī)學檢驗中心KM-SOP0300·346GuangzhouKingmedSTANDARDOPERATIONPROCEDUREpagePAGE10/10肌鈣蛋白檢測作業(yè)指導書（2008-03-13《文件已閱聲明表》《Procedurecirculationform》文件名稱:肌鈣蛋白（TPI）檢測作業(yè)指導書表號:KM-MP03?02?02已閱聲明：本人承諾已了解此文件中的相關內容,今后的工作中將嚴格按照此文件執(zhí)行,不隨意對外傳閱此文件,如有因與文件不相符的操作,責任由本人承擔。（Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument.Iwillkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）閱讀人簽名表姓名（NAME）職務（POSITION）簽名（SIGNATURE）簽名日期（DATE）文件修改記錄頁（Procedureamendmentform）表號:KM-MP03?02?03序號NO.頁碼(Page)內容更改說明（DescriptionofModifiedcontents）審批人（Approvedby）批準生效日期（Approveddate）1換版文件信息表(Procedureinformationform)表號:KM-MP03?02?04文件名稱TitleofDOC.(Doc.Code)肌鈣蛋白（TPI）檢測作業(yè)指導書（KM-SOP0300?346）版本號(EditionNo.)Edition3.0生效日期(Operativedate)200文控部門(Doc.ControlDept.)實驗室文控室回顧日期/簽名(Reviewdate/signature)回顧日期(Reviewdate)回顧人員簽名(Signature)替代文件(Replaces)肌鈣蛋白（TPI）檢測作業(yè)指導書(Edition2.0)存放地點(Location)/持有人（Holder）No.Location（Holder）No.Location（Holder）1實驗室文控室（陳彬）2化學發(fā)光室（段學成）作者簽名/日期(Authorsignature/date)廖巍俊審批人簽名/日期(Authorizedby:Signature/Date)陳建波接收人簽名/日期（Receiptor/Date）副本數(shù)(copyNo.)肌鈣蛋白I（TPI）檢測作業(yè)指導書（StandardoperationprocedureforanalysisofTroponinI）1.原理（Testprinciple）:固相、酶標記化學發(fā)光免疫量度檢測。固相（包被珠）包被有鼠單克隆TNI抗體，試劑含有堿性磷酸酶標記的兔抗TNI多克隆抗體。試劑與樣本中的TNI同時與包被有鼠單克隆TNI抗體的包被珠溫育，形成抗體夾心復合物。未結合的酶標記物經(jīng)離心去除，最終加入化學發(fā)光底物，產生與結合酶成比例的光信號。2.樣本收集和儲存（SpecimenCollectionandStorage）:標本收集（Specimencollection）:類型（Type）:血清(Serum)或血漿（plasma）;用量(Volume)0.4mL，儀器加樣量(Samplingvolume)50μL拒收標本（Specimenrejection）：EDTA抗凝血，嚴重脂血或污染的樣本應拒收。推薦使用超速離心清除脂血（lipoprotein）樣本。溶血（hemolysis）樣本提示樣本在送達實驗室之前處理不當，因此檢測結果將受到影響，應予以注意。血清（serum）樣本在未充分凝集前離心將導致纖維蛋白的存在。為避免纖維蛋白對結果的影響必須確保離心處理前樣本已經(jīng)完全充分凝集。對于正在接受抗凝劑治療的病人樣本，需要延長凝集時間。源于不同生產商的血樣收集試管，由于原材料和添加劑不同，包括凝膠或物理涂層、促凝劑和/或抗凝劑，可能導致得到不同的結果。本試劑盒沒有對所有可能應用的收集管類型進行測試。標本儲存條件(Specimenstorageconditions)：室溫(Roomtemperature):2-8℃8小時；冷藏5天；十3、試劑(Reagent)：3.1美國IMMULITE原裝試劑。3.1.1試劑內組份(C試劑盒組分必須成套使用，條碼為實驗必需。TroponinI檢測單位（LTI1）每個帶有條碼的檢測單位內有一個包被珠，包被有單克隆鼠抗肌鈣蛋白I抗體。2-8℃可穩(wěn)定至失效期。(Storedin2～8℃basedonmanufacturerinstLKTI1：100個，LKTI5：500個打開包裝之前應恢復至室溫，從包裝頂部剪開，完整保留拉鏈隆起緣。使用后將拉鏈重新封好，避免潮濕。TroponinI試劑楔（LTI2）試劑楔帶有條碼。7.5mL堿性磷酸酶標記的多克隆羊抗肌鈣蛋白I抗體緩沖液，含防腐劑。封蓋低溫保存：2-8℃LKTI1：1個，LKTI5：5個TroponinI校正（LTIL，LTIH）兩瓶（低、高）凍干的含肌鈣蛋白I的非人血清基質。使用前至少30分鐘復溶，每瓶加3.0mL蒸餾水或去離子水。輕輕翻轉混勻，直到凍干粉全部充分溶解。復溶后2~8℃可穩(wěn)定30天，或-20LKTI1：1套，LKTI5：2套3.1.2TroponinI樣本稀釋液：（LTIZ）用于人工稀釋病人樣本。每瓶25mL，為不含肌鈣蛋白I的非人血清基質。開封后，2~8℃可穩(wěn)定30天，或-20LSUBX：化學發(fā)光底物LPWS2：探針清洗液LKPM：探針清洗試劑盒LCHx-y：樣本杯架（帶條碼）LSCP：樣本杯（一次性）LSCC：樣本杯蓋（可選）CCCM：雙水平，非人血清基質的心肌標志物質控，肌鈣蛋白是其中四種不同成分之一。其它必需：樣本加樣戲管、蒸餾水或去離子水、質控。3.2試劑準備(Reagentpreperation)：將試劑從冰箱中取出并平衡至室溫；不同批號的試劑不能混用；新試劑與前一批號試劑不同，則需做樣本結果的比對，并記錄，差異在允許范圍內方可使用。Putreagentfromrefrigeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recodtheresults.4儀器（Instrument）：美國IMMULITE.4.1儀器準備（Prepareapparatus）：使用前將儀器的液體與固體垃圾清空；加入足夠的蒸餾水，清冼液，底物及樣本杯。然后運行儀器操作軟件。而后排水及底物，防止內有殘留氣柱。在儀器的試劑盤中加入所需的試劑。5.安全防范（SafetyPrecautions）：操作時必須穿戴手套和工作服；工作后的臺面應消毒擦洗；用過的加樣槍頭等耗材應作為醫(yī)用垃圾處理；為了避免形成氣溶膠，所有樣品盡可能不要在空氣當中暴露太長時間；遇到樣本灑出，被污染的區(qū)域應立即用次氯酸鈉溶液清洗，擦拭用的物品應丟棄在標有生物污染的垃圾筒中。6校準（CalibrationifApplicable）：6.1校準品儲存和使用(Calibrationmaterialstorageandusage)：美國IMMULITE原裝校準品。要求在有效期內使用，過期的校準液應停止使用，保存于2-8℃可穩(wěn)定到有效期。Stopusingoverduecalibrationmaterial.useitwithinexpirationdate,storagein2-8配制（Calibrationmaterialredissolve）：用復溶專用加樣槍準確吸取2mL去離子水于瓶中，溶解靜置1小時，混勻并用有蓋小子彈頭分裝600μL/個，標明配制日期，校準品批號，配制人以及有效日期，于－20℃凍存?zhèn)溆?。L復溶后校準品成分的穩(wěn)定性：保存于15~25℃保存于2~8℃保存于（-15）~（-25）℃，可穩(wěn)定1個月（不可反復凍融）。6.2當下列任何一種情況出現(xiàn)時，請重新校準：(Ifoneofthetwohappens,recalibration)（1）試劑批號改變(Reagentlotchanges)（2）根據(jù)質控需要進行校準(Recalibrationbasedonqualitycontrolproblem)（3）校準周期（Frequencyofcalibration）：兩周(Twoweeks)。6.3步驟：在計算機屏幕上選擇kitEntry項，用掃碼器掃描藥盒上的條碼，選擇PatientEntry項，輸入校正信息.然后將兩個樣本杯中分別加入至少600ul的A，B校準品，放在加樣履帶上。點擊GO。儀器自動識別校準是否通過，但是每次做校準后，必須跟做所有濃度的質控，如質控在控則校準通過。校準結果判斷標準:儀器自動識別校準是否通過，但是每次做校準后，必須跟做所有濃度的質控，如質控在控則校準通過。7操作過程：(ProceduralSteps)7.1將從標本組取回的帶有編號的血清標本離心取血清.本項目編號為2xxx（一個x代表一個阿拉伯數(shù)字）。7.2取出空樣本杯架，將空的樣本杯放入樣本杯架上。將離好的血清加入對應的樣本杯中。7.3將樣品杯放到進樣鏈條的箭頭處，其后放入TPI反應杯。在WorklistEnter中輸入樣品杯中樣品相對應的實驗號。結果出來后，打印機自動打印出結果，作為原始記錄加以保留，并且操作者要簽上名字及操作日期。7.4數(shù)據(jù)聯(lián)機入系統(tǒng)(SenddatatoLIS)數(shù)據(jù)審核(Datacheckup)：聯(lián)機是否正確？對照申請表格與儀器LIST中的實驗號和加樣杯號是否一一正確對應，原始導出結果與系統(tǒng)結果是否對應。8質量控制(Qualitycontrol)：使用心肌標志物專用質控,當室內質控失控時，重取質控品重新檢測一次；若室內質控仍不能滿足要求，則檢查校準是否過期，重新校準，再檢測室內質控；仍不能滿足要求時，則做期間核查，檢查儀器是否正常。室內質控操作過程：從冰箱冷凍格拿出的分裝質控品必須放置室溫半小時以上，每次用量至少180ul，上機操作同日常標本。BMG最大允許誤差ALE為22%，室內質控CV為5.12%（低）、2.99%（高），偏移為4.59%,過程穩(wěn)定性<2%.根據(jù)公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用計算軟件可得,低值選擇的質控規(guī)則:13s/22s/R4s/41sN=2;高值選擇的質控規(guī)則13s/22s/R4s/41sN=2,當質控失控時，應按照《室內質量控制程序》處理9計算(CalculationsifApplicable)：無10參考范圍：(referenceinterval)統(tǒng)計100份合格體檢標本:（廣東省職業(yè)病防治院，詳情請在系統(tǒng)中搜索）樣本含量:100結果全部在我們給的范圍：低于1.0ng/mL所以得到驗證，參考區(qū)間為：低于1.0ng/mL。11結果解釋：（InterpretationofResults）血清TPⅠ變化可反映心急細胞的損傷程度。心肌損傷后3～6小時開始升高，14～20小時達高峰，5～7天恢復。TPⅠ盡管特異性高，但是其靈敏度較底。因此只有發(fā)生了心肌損傷3~6小時以后才可見TPI升高。12方法的局限性（MethodLimitations）：采用EDTA血漿樣本會得到偏低的檢測結果。人血清中的嗜異性抗體會與試劑盒組分中的免疫球蛋白發(fā)生反應，從而干擾體外免疫檢測【見BoscatoLM，StuartMC.Heterophilicantibodies:aproblemforallimmunoassays.ClinChem1988:34:27-33】。經(jīng)常接觸動物或動物血清制品的病人樣本可證明這種潛在導致異常結果干擾的存在。已經(jīng)證明這些試劑可以將這種風險最小化，但是少數(shù)情況下血清與實驗組分之間潛在的交叉反應還是會出現(xiàn)。為達到診斷目的，次實驗的檢測結果要與臨床檢查、病史和其它的檢查結合使用。12.1精密度（Precision）:2.1批間精密度:取2006年11月份的肌鈣蛋白I質控記錄作統(tǒng)計(單位pmol/L)MeanSDCV%0.89100.04565.12%17.77330.53112.99%總體數(shù)據(jù)均在1/3SD范圍內，與廠商聲稱的情況相比基本一致，符合要求。2.2批內精密度:選擇醫(yī)學決定水平附近的病人樣本,在相當短的時間測定10個數(shù)據(jù),測定時帶質控,且質控在控:MeanSDCV%3.790.1293.39%總體數(shù)據(jù)均在1/3SD范范圍內，與廠商聲稱的情況相比基本一致，符合要求。12.2靈敏度（Sensitivity）：0.1ng/mL12.3分析測試范圍（AMR）：0.1~180ng/mL12.4病人結果報告范圍（CRR）：0.1~720ng/mL12.5稀釋(Dilution)：需要手工稀釋的樣品，用去離子水將樣本稀釋4倍（加稀釋液160uL，血清40uL稀釋），其他操作跟樣本操作相同。最大稀釋倍數(shù)為4倍。稀釋材料（Dilutionmaterial）:去離子水最大稀釋倍數(shù)（Dilutiontimes）:1:4(40ulSample:160uldiluent)12.7干擾物質（InterferingSubstances）：膽紅素影響（Bilirubin）：樣本中膽紅素的濃度直至200mg/L，在實驗允許的精密度范圍內對結果沒有影響。溶血影響（Hemolysis）：樣本中壓積紅細胞的濃度直至30μL/mL，在檢測允許的精密度范圍內對結果沒有影響。脂血影響（Lip