生物技術(shù)實(shí)踐-2021年高考生物二輪復(fù)習(xí)真題通關(guān)練

（12）生物技術(shù)實(shí)踐—2021年高考生物二輪復(fù)習(xí)真題通關(guān)練

[2021年山東卷，12】1.葡萄酒的制作離不開酵母菌。下列說法錯(cuò)誤的是（）

A.無氧條件下酵母菌能存活但不能大量繁殖

B.自然發(fā)酵制作葡萄酒時(shí)起主要作用的菌是野生型酵母菌

C.葡萄酒的顏色是葡萄皮中的色素進(jìn)入發(fā)酵液形成的

D.制作過程中隨著發(fā)酵的進(jìn)行發(fā)酵液中糖含量增加

【2021年山東卷，13】2.粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸儲(chǔ)水并攪拌，過

濾后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出

DNA相對含量較高的白色絲狀物的處理方式是（）

A.加入適量的木瓜蛋白酶

B.37?40℃的水浴箱中保溫10-15分鐘

C.加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精

D.加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2moi/L—過濾—調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14mol/L

[2021年山東卷，1413.解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。

脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲，乙兩種菌分別等量接種

在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯(cuò)誤

的是（）

A.甲菌屬于解脂菌

B.實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源

C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比

D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力

[2021年廣東卷，914.秸稈的纖維素經(jīng)酶水解后可作為生產(chǎn)生物燃料乙醇的原料，生物興

趣小組利用自制的纖維素水解液（含5%葡萄糖）培養(yǎng)酵母菌并探究其細(xì)胞呼吸（如圖），

下列敘述正確的是（）

A.培養(yǎng)開始時(shí)向甲瓶加入重倍酸鉀以便檢測乙醇生成

B.乙瓶的溶液由藍(lán)色變成紅色，表明酵母菌已產(chǎn)生CO?

C.用甲基綠溶液染色后可觀察到酵母菌中線粒體的分布

D.實(shí)驗(yàn)中增加甲瓶的酵母菌數(shù)量不能提高乙醇最大產(chǎn)量

【2021年6月浙江卷，1715.下列關(guān)于原生質(zhì)體和細(xì)胞計(jì)數(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.測定植物原生質(zhì)體的密度時(shí)，可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

B.紅墨水不能進(jìn)入活細(xì)胞，可用于檢測細(xì)胞的存活狀態(tài)并計(jì)數(shù)

C.涂布分離法和劃線分離法均能得到單菌落，都可用于細(xì)菌計(jì)數(shù)

D.酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，可用比濁計(jì)測定其密度

[2021年1月浙江卷，10】6.用白蘿卜制作泡菜的過程中，采用適當(dāng)方法可縮短腌制時(shí)間。

下列方法中錯(cuò)誤的是（）

A.將白蘿卜切成小塊B.向容器中通入無菌空氣

C.添加己經(jīng)腌制過的泡菜汁D.用沸水短時(shí)處理白蘿卜塊

【2021年山東卷，20】（多選題）7.含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活

污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵錢結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)

生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵氨的

培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯(cuò)誤的是（）

甲乙

A.乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)

B.為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基

C.該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量

D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染

[2021年全國乙卷，37】8.【生物一選修1：生物技術(shù)實(shí)踐】

工業(yè)上所說的發(fā)酵是指微生物在有氧或無氧條件下通過分解與合成代謝將某些原料物質(zhì)轉(zhuǎn)

化為特定產(chǎn)品的過程，利用微生物發(fā)酵制作醬油在我國具有悠久的歷史。某企業(yè)通過發(fā)酵制

作醬油的流程示意圖如下：

（1）米曲霉發(fā)酵過程中，加入大豆、小麥和麥秋可以為米曲霉的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)，大豆

中

的可為米曲霉的生長提供氮源，小麥中的淀粉可為米曲霉的生長提供

（2）米曲霉發(fā)酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖，大量分泌制作醬油過程所需的

酶類，這些酶中的、能分別將發(fā)酵池中的蛋白質(zhì)和脂肪分解成易于吸

收、風(fēng)味獨(dú)特的成分，如將蛋白質(zhì)分解為小分子的肽和。米曲霉發(fā)酵過

程需要提供營養(yǎng)物質(zhì)、通入空氣并攪拌，由此可以判斷米曲霉屬于（填“自養(yǎng)厭

氧，，“異養(yǎng)厭氧，，或“異養(yǎng)好氧，，）微生物。

（3）在發(fā)酵池發(fā)酵階段添加的乳酸菌屬于（填“真核生物”或“原核生物”）；

添加的酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖的產(chǎn)物是。在該階段抑制雜菌污染

和繁殖是保證醬油質(zhì)量的重要因素，據(jù)圖分析該階段中可以抑制雜菌生長的物質(zhì)是

（答出1點(diǎn)即可）。

【2021年湖南卷，21】9.大熊貓是我國特有的珍稀野生動(dòng)物，每只成年大熊貓每日進(jìn)食竹子

量可達(dá)12~38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素，研究人員從大熊貓

糞便和土壤中篩選纖維素分解菌?；卮鹣铝袉栴}：

（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即o為篩選纖維

素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上

進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于培養(yǎng)基。

（2）配制的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌處理，目的是。檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常

用方法是?

（3）簡要寫出測定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實(shí)驗(yàn)思路：。

（4）為高效降解農(nóng)業(yè)桔稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，

在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是

菌株,理由是

菌株秸稈總重/g秸稈殘重/g秸稈桿重/%纖維素降解率/%

A2.001.5124.5016.14

B2.001.5323.5014.92

C2.001.4229.0023.32

【2021年廣東卷，21】10.中國科學(xué)家運(yùn)用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H,以糖

蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值

可降解材料，期望提高甘蔗的整體利用價(jià)值。工藝流程如圖。

攪拌器

喑鹽單胞菌pH調(diào)W

其他營養(yǎng)

溫度隔節(jié)

物質(zhì)、空氣

鹽

糖蜜成餐澗預(yù)PHA分惑

處

垃圾等各種純化制備

現(xiàn)

廢棄原料

開放式發(fā)醉系統(tǒng)

回答下列問題：

（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為,

并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時(shí)間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基

中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，評估

菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有等（答出兩種方法即可）。

（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，研究人員設(shè)計(jì)了一種不需要滅菌的發(fā)酵系

統(tǒng),其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L,PH為10,菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不

需要滅菌的原因是（答出兩點(diǎn)即可）。

（3）研究人員在工廠進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結(jié)果發(fā)

現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)

酵條件中可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。

（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA,說明其

能分泌.

【2021年河北卷，23】11.葡萄酒生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生大量的釀酒殘?jiān)ㄆぴ?。目前這些皮

渣主要用作飼料或肥料，同時(shí)研究者也采取多種措施拓展其利用價(jià)值。

回答下列問題：

（1）皮渣中含有較多的天然食用色素花色背，可用萃取法提取。萃取前將原料干燥、粉碎

的目的分別是,萃取效率主要取決于萃取劑的。萃取過程需要在適宜溫度

下進(jìn)行，溫度過高會(huì)導(dǎo)致花色首o(hù)研究發(fā)現(xiàn)，萃取時(shí)輔以纖維素酶、果膠酶處理可

提高花色音的提取率，原因是。

（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液,

用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。IO4倍稀釋對應(yīng)的三個(gè)平板中菌落數(shù)量

分別為78、91和95,則每克皮渣中微生物數(shù)量為個(gè)。

（3）皮渣堆積會(huì)積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時(shí)，需要將培養(yǎng)

基的pH調(diào)至_______性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后

倒平板，加入碳酸鈣的目的是。培養(yǎng)篩選得到的酯酸菌時(shí)，在缺少糖源的液體培養(yǎng)

基中可加入乙醇作為。

（4）皮渣堆積過程中也會(huì)積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時(shí)，乳酸菌有可能混入

其中，且兩者菌落形態(tài)相似。請?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)簡單實(shí)驗(yàn)，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌。（簡

要寫出實(shí)驗(yàn)步驟和預(yù)期結(jié)果）

【2021年全國甲卷，37]12.加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。某同學(xué)通過實(shí)驗(yàn)比較了

幾種洗衣粉的去漬效果（“+”越多表示去漬效果越好），實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。

加酶洗衣粉A加酶洗衣粉B加酶洗衣粉C無酶洗衣粉（對照）

血漬++++++++

油漬++++++++

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果回答下列問題：

（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是；加酶洗衣粉B中添加的酶是

加酶洗衣粉C中添加的酶是。

（2）表中不宜用于洗滌蠶絲織物的洗衣粉有,原因是。

（3）相對于無酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好的原因是。

（4）關(guān)于酶的應(yīng)用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生產(chǎn)實(shí)踐中得到應(yīng)

用，如固定化葡萄糖異構(gòu)酶已經(jīng)用于高果糖漿生產(chǎn)。固定化醐技術(shù)是指。固

定化酶在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是（答出1點(diǎn)即可）。

【2021年6月浙江卷，29（一）】13.回答下列（一）（二）小題：

（-）回答與甘蔗醋制作有關(guān)的問題：

（1）為了獲得釀造甘蔗醋的高產(chǎn)菌株，以自然發(fā)酵的甘蔗渣為材料進(jìn)行篩選。首先配制醋

酸菌選擇培養(yǎng)基：將適量的葡萄糖、KH2P。4、MgSO4溶解并定容，調(diào)節(jié)pH,再高壓蒸汽滅

菌，經(jīng)后加入3%體積的無水乙醇。然后將10g自然發(fā)酵的甘蔗渣加入選擇培養(yǎng)

基，震蕩培養(yǎng)24h。用將少量上述培養(yǎng)液涂布到含CaCCh的分離培養(yǎng)基上，在

30C培養(yǎng)48h。再挑取分離培養(yǎng)基上具有的單菌落若干，分別接種到與分離培

養(yǎng)基成分相同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后，置于4℃冰箱中保存。

（2）優(yōu)良產(chǎn)酸菌種篩選。將冰箱保存的菌種分別接入選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)一段時(shí)間后，取合

適接種量的菌液在30℃、150r/min條件下震蕩培養(yǎng)。持續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)液中醋酸濃度不再上

升，或者培養(yǎng)液中含量達(dá)到最低時(shí)，發(fā)酵結(jié)束。篩選得到的優(yōu)良菌種除了產(chǎn)酸量

高外，還應(yīng)有（答出2點(diǎn)即可）等特點(diǎn)。

（3）制醋過程中，可將甘蔗渣制作成固定化介質(zhì)，經(jīng)后用于發(fā)酵。其固定化方

法為。

（-）斑馬魚是一種模式動(dòng)物，體外受精發(fā)育，胚胎透明、便于觀察，可用于水質(zhì)監(jiān)測、基

因功能分析以及藥物毒性與安全性評價(jià)等。

（1）由于人類活動(dòng)產(chǎn)生的生活污水日益增多，大量未經(jīng)處理的污水直接排入河流、湖泊會(huì)

引起水體，導(dǎo)致藻類大量繁殖形成水華。取水樣喂養(yǎng)斑馬魚，可用斑馬魚每周的

體重和死亡率等指標(biāo)監(jiān)測水體污染程度。

（2）為了研究某基因在斑馬魚血管發(fā)育過程中的分子調(diào)控機(jī)制，用DNA連接酶將該基因

連接到質(zhì)粒載體形成,導(dǎo)入大腸桿菌菌株DH5a中。為了能夠連接上該目的基因、

并有利于獲得含該目的基因的DH5a陽性細(xì)胞克隆，質(zhì)粒載體應(yīng)含有

（答出2點(diǎn)即可）。提取質(zhì)粒后，采用法，將該基因?qū)氚唏R魚受精卵細(xì)胞中，

培養(yǎng)并觀察轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎血管的發(fā)育情況。

（3）為了獲取大量斑馬魚胚胎細(xì)胞用于藥物篩選，可用分散斑馬魚囊胚的內(nèi)細(xì)

胞團(tuán)，取分散細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加成纖維細(xì)胞作為

,以提高斑馬魚胚胎細(xì)胞克隆的形成率。

【2021年1月浙江卷，29(-)114.回答下列(一)、(二)小題:

(一)某環(huán)保公司從淤泥中分離到一種高效降解富營養(yǎng)化污水污染物的細(xì)菌菌株，制備了固定

化菌株。

(1)從淤泥中分離細(xì)菌時(shí)常用劃線分離法或法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成

。對分離的菌株進(jìn)行誘變、和鑒定，從而獲得能高效降解富營養(yǎng)化污水污

染物的菌株。該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖。

(2)固定化菌株的制備流程如下；①將菌株與該公司研制的特定介質(zhì)結(jié)合；②用蒸儲(chǔ)水去除

;③檢驗(yàn)固定化菌株的。菌株與特定介質(zhì)的結(jié)合不宜直接采用交聯(lián)法和

共價(jià)偶聯(lián)法，可以采用的2種方法是o

(3)對外，只提供固定化菌株有利于保護(hù)該公司的知識產(chǎn)權(quán)，推測其原因是。

(二)三葉青為蔓生的藤本植物，以根入藥。由于野生三葉青對生長環(huán)境要求非?？量蹋约?/p>

生態(tài)環(huán)境的破壞和過度的采挖，目前我國野生三葉青已十分珍稀。

(1)為保護(hù)三葉青的多樣性和保證藥材的品質(zhì)，科技工作者依據(jù)生態(tài)工程原理，利

用技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了三葉青的林下種植。

(2)依據(jù)基因工程原理，利用發(fā)根農(nóng)桿菌侵染三葉青帶傷口的葉片，葉片產(chǎn)生酚類化合物，

誘導(dǎo)發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達(dá)形成和限制性核酸內(nèi)切酶等，進(jìn)而從質(zhì)粒

上復(fù)制并切割出一段可轉(zhuǎn)移的DNA片段(T-DNA)0T-DNA進(jìn)入葉片細(xì)胞并整合到染色體上,

T-DNA上廠〃系列基因表達(dá)，產(chǎn)生相應(yīng)的植物激素，促使葉片細(xì)胞持續(xù)不斷地分裂形成

,再分化形成毛狀根。

(3)剪取毛狀根，轉(zhuǎn)入含頭抱類抗生素的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行多次培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添

加抗生素的主要目的是。最后取毛狀根轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進(jìn)行懸浮培養(yǎng),

通過控制搖床的和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的,獲得大量毛狀根，用于提

取藥用成分。

【2020年全國I卷，37115.某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會(huì)對環(huán)

境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照如圖所示流程從淤泥中分離得到能高效

降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S,乙的

組分為無機(jī)鹽、水、S和Y。

無菌水甲乙甲

回答下列問題：

(1)實(shí)驗(yàn)時(shí)，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中

的Y物質(zhì)是o甲、乙培養(yǎng)基均屬于培養(yǎng)基。

(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2XIO7個(gè)/mL,若要在每個(gè)平板上涂布lOOgL稀

釋后的菌液，且保證每個(gè)平板上長出的菌落數(shù)不超過200個(gè)，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液

稀釋倍。

(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時(shí)，某菌株對S的降解量反

而下降，其原因可能是(答出1點(diǎn)即可)。

(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請寫出主要實(shí)驗(yàn)步驟：o

(5)上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供4類

營養(yǎng)物質(zhì)，即。

答案以及解析

1.答案：D

2.答案：A

3.答案：B

4.答案：D

解析：本題考查探究酵母菌細(xì)胞呼吸方式的實(shí)驗(yàn)以及觀察線粒體的實(shí)驗(yàn)。

選項(xiàng)正誤原因

加入重銘酸鉀和濃硫酸的混合溶液才可以檢測乙醇的生成。濃硫酸的作用

AX

是提供酸性環(huán)境，酸性重銘酸鉀與乙醇混合，才能觀察到灰綠色

BXC02通入漠麝香草酚藍(lán)水溶液中，顏色變化為藍(lán)T綠一黃

CX觀察線粒體時(shí)需要用健那綠染液進(jìn)行染色

Dq乙醇的最大產(chǎn)量與容器中的葡萄糖量有關(guān)，與酵母菌數(shù)量無關(guān)

5.答案：C

解析:本題考查原生質(zhì)體和細(xì)胞計(jì)數(shù)的相關(guān)知識。原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁的部分,

可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，A項(xiàng)正確；由于細(xì)胞膜的選擇透過性，紅墨水不能進(jìn)入活細(xì)胞,

可用于檢測細(xì)胞是否存活，由于紅墨水具有顏色，位于細(xì)胞壁和原生質(zhì)層之間，因此可用于

細(xì)胞計(jì)數(shù)，B項(xiàng)正確；劃線分離法接種時(shí)，一些菌落往往由兩個(gè)或多個(gè)活菌繁殖而成，還有

一些不能形成菌落，而在計(jì)數(shù)時(shí)一個(gè)菌落對應(yīng)著一個(gè)活菌，這樣在劃線所得的平板中，菌落

數(shù)目低于活菌的實(shí)際數(shù)值，所以不能用劃線分離法測定活菌的數(shù)量，C項(xiàng)錯(cuò)誤。

6.答案：B

解析：A、將白蘿卜切成小塊可以擴(kuò)大白蘿卜與腌料的接觸面積，縮短腌制時(shí)間，A正確；

B、泡菜制作所需菌種為乳酸菌，制作過程中應(yīng)保持無氧環(huán)境，向容器中通入無菌空氣不利

于腌制，B錯(cuò)誤：

C、泡菜汁中含有一定量的發(fā)酵菌種，所以在腌制過程中，加入一些已經(jīng)腌制過泡菜汁可縮

短腌制時(shí)間，C正確；

D、用沸水短時(shí)處理，可抑制某些微生物的繁殖，提高泡菜品質(zhì)，也可縮短腌制時(shí)間，D正

確。故選B。

7.答案：BC

8.答案：（1）蛋白質(zhì)；碳源

（2）蛋白酶：脂肪酶；氨基酸；異養(yǎng)好氧

（3）原核生物；酒精和C02；食鹽（或乳酸或酒精）

解析：本題考查發(fā)酵工程的相關(guān)知識.

（1）氮源是指含氮的化合物，大豆中含氮的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)，淀粉的組成元素是C、H、

0,淀粉可為米曲霉的生長提供碳源。

（2）催化蛋白質(zhì)分解的酶是蛋白酶，催化脂肪分解的酶是脂肪酶。蛋白質(zhì)分解后的產(chǎn)物是

小分子的肽和氨基酸。由于米曲霉發(fā)酵過程需要提供營養(yǎng)物質(zhì)、通入空氣并攪拌，可推測米

曲霉屬于異養(yǎng)好氧微生物。

（3）乳酸菌屬于原核生物，在無氧條件下乳酸菌將葡萄糖分解為酒精和C02。在發(fā)酵池發(fā)

酵過程中，需添加乳酸菌酵母菌和食鹽，說明抑制雜菌生長的物質(zhì)有食鹽、乳酸或酒精。

9.答案：（1）G酶、Cx酶和葡萄糖甘酶；纖維素；選擇

（2）為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽抱、抱子）；不接種培養(yǎng)（或空白培養(yǎng)）

（3）將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板（每個(gè)稀釋度至

少涂布三個(gè)平板），對菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測大熊貓新鮮糞

便中纖維素分解菌活菌數(shù)

（4）C；接種菌株C后秸稈失重最多，纖維素降解率最大

解析：本題考查微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的有關(guān)知識和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力。

（1）纖維素酶至少包括C,酶、Cx酶和葡萄糖甘酶等3種酶；篩選纖維素分解菌應(yīng)使用以

纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。

（2）對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的目的是殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽抱、抱子），從

而防止外來雜菌的入侵;檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是將不接種的空白培養(yǎng)基放在

恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，看是否有菌落產(chǎn)生。

（3）可利用稀釋涂布平板法將菌液涂布在平板上，經(jīng)過一段時(shí)間培養(yǎng)后，對平板上的菌落

進(jìn)行計(jì)數(shù)，并依據(jù)公式推測出菌液中的活菌數(shù)量。

（4）對比幾種菌株接種后秸稈的失重量和纖維素降解率可以看出，菌株C的這兩項(xiàng)指標(biāo)是

最高的，因此它產(chǎn)生的纖維素酶的活力最強(qiáng)。

10.答案：（1）唯一碳源；稀釋涂布平板；誘變育種和轉(zhuǎn)基因育種（或雜交育種）

（2）培養(yǎng)基中高鹽濃度和高pH會(huì)抑制雜菌的生長

（3）氧氣濃度

（4）蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶

解析：本題考查微生物的培養(yǎng)的相關(guān)知識。

（1）蔗糖可作為微生物培養(yǎng)的唯一碳源，活細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法主要采取稀釋涂布平板法，通

過統(tǒng)計(jì)平板中的菌落來計(jì)算樣品中的菌落數(shù)。常見育種方法有雜交育種、透變育種、單倍體

育種、多倍體育種、轉(zhuǎn)基因食種，對于優(yōu)良菌株的選育還能采取誘變育種、雜交育種和轉(zhuǎn)基

因育種的方法。

（2）由題意可知，該發(fā)酵系統(tǒng)的環(huán)境為高濃度鹽和高pH,在鹽濃度為60g/L的條件下，

其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制，

因此不需要滅菌。

（3）根據(jù)題干中“產(chǎn)生少量乙醇”可知，發(fā)酵過程中氧氣不充足，細(xì)胞進(jìn)行了無氧呼吸產(chǎn)生

乙醇。

（4）菌株H可分解含有蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等餐廚的垃圾，因此可推測菌株H能分泌水解

其相應(yīng)的酶，即蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶。

11.答案：（1）降低含水量、使原料與萃取劑充分接觸，提高溶解度；性質(zhì)和使用量；分解;

纖維素酶和果膠酶可破壞細(xì)胞壁，有利于提高花色昔的提取率

（2）8.8X106

（3）中性或微堿；使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈，根據(jù)透明圈來篩選優(yōu)良菌株；碳源

（4）實(shí)驗(yàn)步驟：將平板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小。

預(yù)期結(jié)果：若菌落繼續(xù)生長，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼

續(xù)生長，透明圈不再擴(kuò)大，則為醋酸菌菌落。

解析：本題考查發(fā)酵工程的相關(guān)知識。

（1）萃取前將原料干燥的目的是降低含水量，粉碎的目的是使原料與萃取劑充分接觸，提

高溶解度，萃取效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量。萃取過程需要在適宜溫度下進(jìn)行，

溫度過高會(huì)導(dǎo)致花色首分解。纖維素酶和果膠酶會(huì)催化纖維素和果膠水解，破壞細(xì)胞壁，有

利于提高花色甘的提取率。

（2）平板上菌落數(shù)平均為（78+91+95）/3=88,每克皮渣中微生物數(shù)量為88/0.1xl04=8.8xl06?

（3）醋酸菌屬于細(xì)菌，故制備醋酸菌初篩平板時(shí)，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性。

碳酸鈣能夠與醋酸反應(yīng)，使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈，在平板上可根據(jù)碳酸鈣透明圈來篩

選優(yōu)良菌株，碳酸鈣透明圈越大，說明菌株產(chǎn)生醋酸的能力越強(qiáng)。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時(shí),

在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中，乙醇可作為碳源。

（4）乳酸菌屬于兼性厭氧型，醋酸菌屬于需氧型，故可將平板置于無氧環(huán)境中繼續(xù)培養(yǎng)，

觀察平板上形成的菌落。

12.答案：（1）蛋白酶；脂肪酶；蛋白酶和脂肪酶

（2）加酶洗衣粉A和C；洗衣粉中的蛋白酶可能會(huì)分解蠶絲織物中的蛋白質(zhì)而損傷衣物

（3）酶可以將污漬中的大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì)，使污漬易從衣物上脫落

（4）利用物理或化學(xué)方法將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)；固定化酶能夠反復(fù)利用，從而降

低生產(chǎn)成本

解析：本題考查酶及酶的應(yīng)用的相關(guān)知識。

（1）加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、

淀粉酶和纖維素酶。其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。堿性蛋

白酶能將血漬、奶漬（含有大分子蛋白質(zhì)）等水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽。使污跡

容易從衣物上脫落。根據(jù)題表介紹的四類洗衣粉的去漬效果可知，洗衣粉A、B、C分別含

有蛋白酶、脂肪酶、蛋白酶和脂肪酶。

（2）蠶絲織物中含有蛋白質(zhì)，不宜用含有蛋白酶的洗衣粉洗滌，避免蠶絲織物中的蛋白質(zhì)

被蛋白酶水解為可溶性的氨基酸和小分子的肽，對蠶絲織物造成損害，因此不宜用于洗滌蠶

絲織物的洗衣粉有加酶洗衣粉A和Co

（3）相對于無酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好的原因是加酶洗衣粉可將蛋白質(zhì)和脂肪等

大分子水解為小分子物質(zhì)，使其更容易脫落。

（4）固定化酶技術(shù)是指利用物理或化學(xué)方法將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)。固定化酶在生

產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是易于回收，可重復(fù)利用，從而降低生產(chǎn)成本。

13.答案：（一）（1）冷卻；玻璃刮刀；較大透明圈；斜面

（2）乙醇；耐酒精度高、耐酸高

（3）滅菌；吸附法

（二）（1）富營養(yǎng)化

（2）重組DNA分子；限制性核酸內(nèi)切酶的識別序列、抗生素抗性基因；顯微注射

（3）胰蛋白酶；原代；飼養(yǎng)層細(xì)胞

解析：本題考查微生物的培養(yǎng)和篩選、基因工程的相關(guān)知識。

（-）（1）高壓蒸汽滅菌后需經(jīng)過冷卻再加入無水乙醇，以免溫度過高使乙醇揮發(fā)；稀釋

涂布平板法的步驟：首先將培養(yǎng)的菌液稀釋，然后取一定量的稀釋液放在無菌的固體培養(yǎng)基

上，用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上；醋酸菌產(chǎn)生的醋酸會(huì)與培養(yǎng)基

中的CaCCh反應(yīng)形成透明圈，因此需挑取分離培養(yǎng)基上具有較大透明圈的單菌落若干；菌

種的臨時(shí)保藏一般是將菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基上,在合適的溫度下長成菌落后在4℃冰

箱中保存。

(2)醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，因此?dāng)培養(yǎng)液中乙醇含量達(dá)到最低時(shí)，

發(fā)酵結(jié)束；優(yōu)良菌種應(yīng)具有產(chǎn)酸量高、耐酒精度高、耐酸高等優(yōu)點(diǎn)。

(3)將甘蔗渣制作成固定化介質(zhì)需經(jīng)滅菌后才能用于發(fā)醉，以免雜菌的污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果;

因?yàn)楦收嵩哂泻芎玫奈叫?，因此常采用吸附法來進(jìn)行固定化。

(二)(1)被人類排放到水體中的污染物包括家庭污水、微生物病原體、化學(xué)肥料、殺蟲

劑、其他礦物質(zhì)和化學(xué)品、放射性物質(zhì)等，常常造成水體富營養(yǎng)化，從而導(dǎo)致藻類大量繁殖,

河流、湖泊生物多樣性銳減。

(2)將目的基因(外源DNA分子)用DNA連接酶在體外連接到適當(dāng)?shù)妮d體上，即DNA

分子的體外重組，這種重新組合的DNA稱為重組DNA；質(zhì)粒載體應(yīng)含有限制性核酸內(nèi)切

酶的識別序列，以便目的基因能成功插入質(zhì)粒載體，質(zhì)粒載體還應(yīng)含有抗生素抗性基因，以

便檢驗(yàn)?zāi)康幕蚴欠癖磉_(dá)；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法。

(3)胰蛋白酶可以消化細(xì)胞間產(chǎn)生的粘連蛋白，從而使細(xì)胞分散；原代培養(yǎng)是指直接從機(jī)

體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)，因此取分散細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行培養(yǎng)屬于原代

培養(yǎng)；干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，飼養(yǎng)層細(xì)胞可作為提供干細(xì)胞分裂、增殖的營養(yǎng)細(xì)胞，因此培養(yǎng)瓶中

添加的成纖維細(xì)胞是作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，以提高斑馬魚胚胎細(xì)胞克隆的形成率。

14.答案：(1).涂布分離單菌落篩選

(2).未固定的細(xì)菌降解富營養(yǎng)化污水污染物的能力包埋法和吸附法

(3).特定介質(zhì)能為菌株繁殖提供X

(1).遺傳間種

(2).DNA聚合酶愈傷組織

(3).繼代殺滅發(fā)根農(nóng)桿菌